北美冬青“奥斯特”的组织培养和快速繁殖研究

王 涛

（新疆林科院园林绿化研究所，新疆 乌鲁木齐 830063）

1 北美冬青‘奥斯特’的组织培养

植物组织培养又叫离体培养，是利用从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物的技术。利用组织培养进行冬青植物的离体培养和快繁已有一定成效。

1.1 选择合适的外植体

选择本研究所自行种植的地栽苗优质雌株，并选择当年生的、健壮的、没有病虫害的枝条，去掉叶片，保留2cm左右的叶柄，利用湿润的报纸包裹保湿，保存在4℃的冰箱中。

1.2 外植体的处理和诱芽培养

将保存的枝条截开成茎段，保证每个茎段带有芽节，使用饱和的洗衣粉溶液浸泡90min，并置于搅拌器上旋转30min，用流水冲洗20min，使用75%的酒精溶液浸泡1min，并用汞溶液消毒，使用无菌水清洗5次，然后放在接种盘中风干，之后将每个茎段两端各自切去0.5cm，形成1.0～1.5cm长的带有0.5～1.0cm叶柄的茎段，接种到诱芽培养基上。

1.3 增殖培养

将诱芽培养基上生长出的无菌苗切割成0.5～1.0cm的单芽或顶芽，然后接种到不同生长物质配比的增值培养基中，每次培养10瓶，每瓶接种5个茎段或顶芽，重复进行3次，培养25d后，观察试管苗的生长状况，选出最适合的生长物质配比。

1.4 生根培养

将增殖培养基中收获的生长状况最好的芽苗移植到生根培养基中，选择标准是生长健壮、长势一致、长度在1.5～2.0cm的组培苗嫩茎，接种到不同生长物质配比的生根培养基中，每个处理10瓶，每瓶接种10个嫩茎，重复培养3次。培养结果判定培养30d后观察生根数，出现2条以上视为有效根，计算生根率。

所有外植体诱芽培养、继代增殖培养和生根培养均设置不加生长物质的对照试验，并在25℃左右，光照强度40μmol·m-2·s-1的条件下培养，并每天保证12h的光照。

2 无菌快繁体系的建立

没有被污染且成功成活的外植株，接种1周后也并逐渐出现松动，最终脱落，腋芽出现膨胀，10d后可看到冒出的嫩芽，25d后腋芽伸长并且长出叶片，并以单芽生长为主，培养40d后嫩茎逐渐生长到3～4cm。将长成的嫩茎切割成小部分，接种在同样的诱芽培养基上，经过连续2～3次的继代培养，腋芽逐渐分化出丛生芽，丛生芽的繁殖能力很强，因此，无菌无性体系群体会逐渐扩大，形成无菌快繁体系。

另外，在培养外植体时，诱芽培养基上除了嫩茎之外，还形成了愈伤组织，在切割嫩茎进行继代培养时，将这些愈伤组织切除干净，转入到芽诱导培养基中继续培养，30d后会同样收获3～4cm高度的嫩茎，嫩茎部依然会出现致密的愈伤组织，再次重复上述操作，也会有同样收获。反复培养6次后，统共收获嫩茎7次，时间持续多半年。而在第4次收获后，嫩茎颜色逐渐变黄，而且愈伤组织也逐渐变小，最后一次收获后，嫩茎细小，叶片泛黄，愈伤组织呈黄褐色，再次转接培养不再生长嫩茎，而是死亡。

3 不同植物生长物质配比对北美冬青继代增殖的影响

继代增殖选择的是茎段切割的方式，选择经过2～3次芽诱导培养基培养的扩大群体中长势较好的茎段进行接种。根据观察不同生长物质配比条件下茎段的生长形势，发现接种在WPM+6-BA1.50mg/L+0.10NAA mg/L+蔗糖20g/L的培养基上的增值系数最大，即培养后获得的芽数与接种时的芽数的比值最大，长势最好。但是此配比条件下，继代培养的组培苗有玻璃化现象出现。此时如果将6-BA的浓度降低到1.000mg/L时，茎段的增值系数不变，但玻璃化现象消失。所以，最适合的增值培养基的生长物质配比为WPM+6-BA1.00mg/L+0.10NAA mg/L+蔗糖20g/L，此时增值系数最大，且芽苗健壮，颜色浓绿，生机勃勃。

4 结语

‘奥斯特’是北美冬青适合在我国地理环境条件下生长的优势品种，有较高的经济价值和观赏价值，因此，研究其组织培养技术，和无菌快繁体系的建立，并寻找最适合继代增值培养的生长物质配比条件，从而为‘奥斯特’的大量繁殖创造条件。