虹鳟传染性造血器官坏死症疫苗的应用研究

文/孙玉芝 李小进 胡传伟 李征远 韩德武 李晓晨 王丽

虹鳟种鱼注射IHN免疫灭活疫苗对虹鳟第二代苗种的母源抗体有效，苗种成活率提高了60%左右；为30克左右的虹鳟鱼种注射虹鳟IHN免疫灭活疫苗，虹鳟成鱼生产成活率在90%以上；本试验虹鳟鱼免疫灭活疫苗的免疫有效期为18个月。

虹鳟是辽宁省养殖的主要冷水性鱼类，分布在本溪、丹东、葫芦岛、辽阳和鞍山市，近年来病害频发，鱼苗发病时的死亡率可达到90%，成为虹鳟鱼养殖的瓶颈因素之一。辽宁省水产技术推广总站2015年承担了辽宁省海洋与渔业厅下达的《虹鳟鱼综合疾病防控措施的研究与初步应用》项目，联合本溪市渔业管理总站和辽宁出入境检验检疫局，研制虹鳟鱼传染性造血器官坏死症疫苗，2015年～2017年应用于生产，使虹鳟的发病死亡情况得到改善。

一、疫苗应用技术路线

资料显示虹鳟IHN可以水平传播，即传染源为感染携带IHN病毒的病鱼，主要经水传播，也是病毒在稚鱼和幼鱼之间水平传播的主要方式，此外还可经过病毒污染的食物以及带毒鱼排泄物等传播感染；虹鳟IHN也可以垂直传播，即携带病毒的虹鳟种鱼，可以把病毒传染给第二代。

生产试验证实，虹鳟鱼鱼龄越小对IHN病毒越敏感，一般2月龄左右幼鱼最易感染，且病程急，发病后死亡率高达50%～100%；成鱼一般不发病，但可携带扩散病毒。而1月龄～2月龄左右的稚鱼因鱼体太小，不能注射疫苗。

基于以上原因，我们设定虹鳟IHN免疫灭活疫苗的免疫程序是，在虹鳟种鱼育卵期前为其注射虹鳟IHN免疫灭活疫苗，在母源免疫鱼卵培育的虹鳟鱼种长到30g左右时，第二次为其注射虹鳟IHN免疫灭活疫苗，确保生产商品鱼的成活率。

二、试验与结果

1.虹鳟疫苗母源免疫试验

2016年我们在虹鳟种鱼育卵期前对其注射了虹鳟IHN免疫灭活疫苗，2017年年初对采集的卵进行培育、观察、比对。2016年注射虹鳟免疫灭活疫苗的虹鳟种鱼，受精、孵化发眼卵2.7万粒，分别在2家虹鳟鱼养殖场孵化、养殖。

本溪县宋爽虹鳟鱼养殖场，孵化发眼卵1.7万粒左右，由于养殖场水温长年偏低（10℃左右），长至2017年7月17日，培育10g鱼苗15000尾左右，培育成活率非常理想；而其同期、同一渔场、同一水源孵化的20万粒虹鳟发眼卵，现仅培育鱼苗2000尾左右，对比效果非常明显。

辽宁省本溪县金宥利虹鳟鱼养殖场，孵化母源免疫鱼卵1万粒左右，长至2017年7月17日，培育20g虹鳟苗种6000尾左右，其中一批3000粒发眼卵由于虹鳟种鱼没有同步成熟，仅上浮20g苗种1000尾左右，试验数据见表1。

表1 虹鳟IHN免疫灭活疫苗母源免疫试验数据

试验结果表明，虹鳟种鱼注射IHN灭活免疫疫苗采的卵到鱼种培育成活率，比同期没有注射疫苗的虹鳟种鱼采的卵培育到鱼种的成活率提高了60%左右，基本上就是无病鱼苗孵化、培育的成活率，甚至略有提高，表明我们给种鱼注射的IHN免疫灭活疫苗对虹鳟第二代免疫有效。

2.虹鳟疫苗鱼种免疫试验

2017年年初，在不能确定母源免疫有效期长短的情况下，按技术路线继续在本溪县宋爽虹鳟鱼养殖场和本溪县金宥利虹鳟鱼养殖场进行鱼种免疫试验，为2016年母源免疫鱼卵培育的30g左右的虹鳟鱼种，注射虹鳟IHN灭活免疫疫苗，以保证生产虹鳟商品鱼的成活率。

每个试验场的试验分3组：1组注射国产佐剂制作的虹鳟IHN免疫灭活疫苗，2组注射进口佐剂制作的虹鳟IHN免疫灭活疫苗，3组是母源免疫鱼卵孵化的鱼苗组。

试验观察至2017年11月16日，虹鳟从体长12cm～16cm，体重20g～50g，长至体长17cm～26cm、体重75g～150g；除2组因疫苗保存问题，背鳍注射后出现了针孔扩大、红肿进而腐烂死鱼的现象，2家渔场6组试验，均未出现因虹鳟鱼IHN疫病爆发而大量死鱼的现象。特别是本溪县宋爽虹鳟鱼养殖场几组试验均未出现死鱼现象，可能因为本次制作疫苗的病料鱼取自该渔场，金宥利虹鳟鱼养殖场试验数据见表2。

试验结果表明，为30g左右的虹鳟鱼种注射虹鳟IHN免疫灭活疫苗，效果理想，虹鳟成鱼生产成活率在90%以上，达到了预期效果。

3.虹鳟IHN免疫灭活疫苗保质期试验

表2 虹鳟疫苗鱼种免疫试验数据

2017年8月，本溪县金宥利虹鳟鱼养殖场，试验虹鳟鱼种背鳍注射疫苗处出现了针孔扩大、红肿，继而腐烂的现象，死亡率20%左右。本次死亡鱼注射的为进口佐剂疫苗，使用时发现疫苗分层，摇晃后不能混合，注射后虹鳟鱼出现了不吸收、死亡的现象。针对此现象，2017年9月8日，我们在本溪县宋爽虹鳟鱼养殖场进行了灭活疫苗保质期的试验。试验设计胸鳍和背鳍注射，疫苗选择摇晃已不能混合和摇晃即可混匀的进口佐剂疫苗。每组注射30尾。试验至2017年11月16日，背鳍注射疫苗的虹鳟鱼种，出现了背鳍针眼扩大、红肿的现象，但后期愈合，没有出现死鱼。其它两组鱼种亦生长正常。分析是因为宋爽虹鳟鱼养殖场水温常年在8℃～10℃左右，水温偏低虹鳟鱼种没有发生其它细菌的感染。试验数据如表3。

表3 虹鳟鱼IHN免疫灭活疫苗保质期试验数据

三、结论与分析

1.关于虹鳟传染性造血器官坏死症疫苗

（1）疫苗效果

进口佐剂、国产佐剂制作的虹鳟IHN免疫灭活疫苗免疫效果基本相同，都对虹鳟感染传染性造血器官坏死症有预防效果。

（2）疫苗保质期

本次进口佐剂制作的疫苗易分层。

国产佐剂制作的疫苗建议保质期1年；进口佐剂制作的疫苗建议保质期为6个月。4℃低温保存。

牛、鸡等遇到疫苗分层的情况都可摇匀后继续使用，但鱼出现了不吸收的现象，虹鳟鱼背鳍注射疫苗处出现针孔扩大、红肿，继而腐烂的现象，死亡率20%左右，已分层的疫苗能否应用于鱼类免疫要继续观察。

（3）注射位置

本溪县金宥利虹鳟鱼养殖场，于2016年9月中旬，通过背鳍注射虹鳟鱼免疫灭活疫苗虹鳟鱼种5000尾，经过半年多的观察，2017年7月份成活率达70%左右，虽然高于不注射虹鳟灭活免疫疫苗虹鳟鱼种的成活率，但低于同期胸鳍注射虹鳟免疫灭活疫苗鱼种成活率的20%左右，说明疫苗胸鳍体腔注射比背鳍注射效果理想。2017年9月的疫苗保质期试验，也是胸鳍注射效果明显好于背鳍注射。鱼类血液循环为开放式的，胸鳍基部体腔注射，抗原进入机体后，能充分的与血液中的免疫球蛋白（即抗体）结合，注射效果好。

（4）注射前麻醉

无论鱼种、种鱼注射疫苗前必须麻醉，麻醉是为了减少因注射对鱼类产生应激反应造成的伤害。我们采用的是乙二醇苯醚麻醉剂，注意合理用量及麻醉时间。剂量小麻醉时间长，但加大剂量要掌握好度。建议一是虹鳟鱼注射后用一次消毒杀菌剂；二是100kg水用乙二醇苯醚5mL，种鱼适当加量。

2.关于灭活免疫疫苗应用

（1）虹鳟母源免疫有效

试验数据显示种鱼注射IHN灭活免疫疫苗后，采的卵到鱼种培育成活率比同期没有注射疫苗的种鱼采的卵培育到鱼种的成活率可高60%左右，证明虹鳟鱼免疫灭活疫苗母源免疫有效。

（2）虹鳟鱼种注射规格

虹鳟鱼龄越小对IHN病毒越敏感，一般2月龄左右幼鱼最易感染，且病程急，发病后死亡率高达50%～100%；野生幼鱼感染后也会发病；成鱼一般不发病，但可携带病毒。所以我们选择30g左右虹鳟进行疫苗注射。此时注射虹鳟灭活免疫疫苗，免疫效果更好。

（3）虹鳟免疫程序设定

虹鳟IHN免疫灭活疫苗的设定免疫程序是，在虹鳟种鱼育卵期前为其注射虹鳟IHN免疫灭活疫苗，在母源免疫鱼卵培育的虹鳟鱼种长到30g左右时，第二次为其注射虹鳟IHN免疫灭活疫苗，确保生产商品鱼的成活率。试验达到了预期效果，证明我们设定的免疫程序合理、有效。

（4）疫苗的有效期初步确认

2015年10月中旬注射虹鳟鱼免疫灭活疫苗的虹鳟鱼种，长至2017年3月，体重达到1500g左右时爆发了IHN，死亡率40%，初步确认本次IHN虹鳟免疫灭活疫苗的免疫有效期为18个月。

（4）预防鱼病减少用药

注射疫苗的虹鳟鱼种或种鱼一个月内不能服用其它的口服渔用药，否则影响免疫效果。