黑果枸杞组培种苗工厂化生产技术

陈 权 陈慧兰 （上海孙桥现代温室种子种苗有限公司，上海市浦东新区 201210）

黑果枸杞（Lycium ruthenicumMurr.）是茄科枸杞属多年生耐盐、抗旱植物，主要分布于我国西部地区。黑果枸杞成熟浆果中富含紫红色色素，属于典型的天然花色苷类植物色素资源，具有重要的药食保健价值[1-2]。近年来，黑果枸杞开始被人工驯化栽培，造成了大量黑果枸杞野生资源被破坏。因此，开展黑果枸杞种苗的人工繁育，既能满足市场对黑果枸杞优质种苗日益增长的需求，又能避免大量黑果枸杞野生资源被乱砍滥伐，使生态与经济协调发展。笔者经生产实践，对黑果枸杞组培种苗工厂化生产技术体系进行探索，以期实现对选定的黑果枸杞优良母株进行种苗的快速繁殖，从而为规模化生产优质黑果枸杞组培种苗提供技术保障。

1 外植体预处理

选择由宁夏农科院提供的优良母株一年生休眠枝条作为外植体，枝条长约30 cm。先用流水将休眠枝条表面的尘土冲洗干净，再用锋利的刀把枝条下端切成整齐的斜面，然后将枝条放入盛有清水的烧杯中，水没过枝条下端约5 cm，每个1 L容量的烧杯中放入10～15根枝条，然后将烧杯放在玻璃温室或25～30 ℃的环境中，以促进侧芽萌发。

2 外植体消毒

当外植体侧芽萌发并生长至2～3 cm时，用锋利的手术刀片将侧芽从基部切下，拿回实验室进行消毒处理。先用洗洁精水清洗1～2 min，后用流水冲洗20～30 min，再在超净工作台上用75%酒精消毒30 s，然后用浓度为0.1%的二氧化氯溶液消毒20 min，再用无菌水冲洗5～6次，最后用无菌纱布把材料表面水吸干后，置于经消毒的烧杯中备用。

3 无菌苗获得

将消毒好的外植体切成长1～1.5 cm的茎段，接种到MS+0.1 mg/L IBA+30 g/L白砂糖+4.5 g/L琼脂、pH 5.8的初代培养基上，培育形成无菌组培苗。培养条件为培养温度23～25℃、光照时间12 h/d、光照强度40～50 μmoL/(m2·s）。培养7～10 d，侧芽萌发，培养至30 d左右，侧芽可伸长至3 cm以上。

4 组培苗扩繁

黑果枸杞组培苗的扩繁有诱导愈伤出苗和微型扦插两种途径。

4.1 诱导愈伤出苗

将获得的黑果枸杞无菌组培苗的叶片切掉，剩下的茎段切成长2～3 mm的小段，放置于MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+30 g/L白砂糖+4.5 g/L琼脂、pH 5.8的愈伤诱导培养基上，在培养温度23～25 ℃、光照时间12 h/d、光照强度40～50 μmoL/(m2·s）条件下诱导愈伤组织产生。组培苗的叶片、叶柄也可作为愈伤组织的诱导材料。叶片，先用手术刀沿叶片边缘切掉，形成伤口，再将叶片切成小块，接种时叶片正面向下，伤口表面贴近培养基；叶柄的切割、接种方式与茎段相同。黑果枸杞试管苗的茎段、叶片和叶柄虽然均能诱导形成愈伤组织，但其愈伤组织的出苗率差异明显，茎段、叶片、叶柄3种外植体材料的愈伤诱导率分别为100%、97%、100%，愈伤组织再分化形成不定芽的比例差异显著，分别为91%、58%、73%。

通过诱导愈伤组织产生不定芽进行增殖的方式，具有增殖速度快、生长周期短等优点，每3周可增殖1次，继代增殖比例达1∶3.5以上。但经愈伤组织诱导产生的不定芽，其后代个体存在变异的可能。

4.2 微型扦插

将获得的黑果枸杞组培苗的顶芽或茎段切割成长1～1.5 cm，接种在MS+0.1 mg/L IBA+30 g/L白砂糖+4.5 g/L琼脂、pH 5.8的培养基上，培养条件为培养温度23～25 ℃、光照时间12 h/d、光照强度50～60 μmoL/(m2·s）。顶芽培养1周左右即可发根，经过4～5周的培养，植株高度可达5～7 cm；茎段培养7～10 d叶腋处将萌发出侧芽，培养10～12 d茎段基部将有根系萌出，再经过2～3周的培养，植株高度可达4～5 cm。将培养得到的顶芽苗和茎段苗重新切段，即可循环培养，进行不断增殖。值得注意，由于茎段苗需先进行腋芽萌发再进入芽伸长阶段，因此，在相同的培养周期内，茎段苗的生长速度较顶芽苗慢。

木本植物通过微型扦插的方式进行组培增殖，所获得的后代植株不会变异，且增殖培养和生根培养同步完成，操作简单。同时，在工厂化生产过程中，采用微型扦插进行组培苗扩繁，易于生产安排，可控性强，可随时通过调整扩繁种苗的基数，压缩或扩大生产量，不会造成繁殖材料浪费。因此，微型扦插是木本植物组培苗规模化生产最理想的途径。

5 生根培养

将愈伤组织分化形成的丛芽上高度超过1.5 cm的不定芽单独切下，接种到MS+0.1 mg/L IBA+30 g/L白砂糖+4.5 g/L琼脂、pH 5.8的生根培养基上，培养条件为培养温度23～25 ℃、光照时间12 h/d、光照强度50～60 μmoL/(m2·s），当植株高度达4～5 cm时即可出瓶，进入驯化阶段。

微型扦插的顶芽苗或茎段苗扩繁和生根过程可同步完成，无需再进行生根培养。

6 移 栽

当黑果枸杞组培苗高度达4～5 cm时，植株根系发达，即可进入移栽炼苗阶段。打开瓶盖，轻敲培养瓶底部，使培养基能顺利滑出瓶口，然后用清水将组培苗根部的培养基洗净，再将其根部放入多菌灵或百菌清700～800倍液中浸3～5 s后取出，即可进行移栽。将组培苗移栽到填装好基质的72孔穴盘中，采用草炭∶珍珠岩=2∶1的混合基质。组培苗移栽至穴盘后浇定根水，苗床采用小管棚覆膜，空气湿度保持在70%～90%，1周后逐渐掀开薄膜通风，2周后完全除去薄膜，并视基质的干湿程度进行浇水，培养45～60 d后即可完成组培苗的驯化，幼苗成活率可达85%以上。