新型微生物源天然食品防腐剂的抑菌效果分析

□ 李智高 毛永杨 苏 涛 田金兰 大理州食品检验检测院

随着食品工业的不断发展以及人们对健康问题的重视，食品安全受到越来越多的关注[1]。当前，在食品安全性要求越来越高的背景下，天然食品防腐剂成为研究重点。在天然食品防腐剂中，乳酸链球菌肽、溶菌酶是比较常见的三类。根据相关的报道，乳酸链球菌肽、溶菌酶的抑菌效果十分好，本实验拟在符合GB 2760-2014规定的情况下，研究乳酸链球菌肽、溶菌酶的抑菌效果，为其应用范围的扩大提供参考资料。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是导致食品污染的常见微生物，因而选择这两种菌为供试菌种。

1 材料与方法

1.1 材料

乳酸链球菌肽、溶菌酶均购自安徽省某化学试剂厂，而大肠杆菌和金黄色葡萄球菌由某学院生命科学系提供。

1.2 实验方法

1.2.1 试剂制备

进行试剂制备时，分别制备质量浓度为0、2、5、10、30、50 g/L的乳酸链球菌肽、溶菌酶溶液备用。

1.2.2 培养基制备

根据相关文献进行牛肉膏蛋白胨液体培养基制备，高压蒸汽灭菌备用。

1.2.3 菌悬液制备

在制备过程中，在无菌条件下，将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别接种在2个试管斜面上，放置在温度为37 ℃的培养箱中进行活化培养，时间为24 h。将活化培养完成的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌使用2 mL、0.85%氯化钠溶液进行洗脱，并将洗脱液分别倒入包含一定量液体培养基的三角瓶中，将恒温振荡器放置其中，并进行2 h震荡培养，然后就可以获得两种细菌的混悬液。

1.2.4 接种培养

使用移液管取出9 mL培养基，然后将其倒入50 mL的三角瓶中，并在三角瓶中加入1 mL、质量浓度为50 g/L的乳酸链球菌肽试液，均匀摇晃，将其摇匀。根据同样的方法，分别添加质量浓度为0（无菌水，为对照组）、2、5、10、30 g/L的乳酸链球菌肽试液，因而，乳酸链球菌肽的实际使用量分别是0.0、0.2、0.5、1.0、3.0、5.0 g/L。然后使用移液管在上述三角瓶中分别添加1.0 mL的制备好的菌悬液。每一个质量浓度共做3组重复，并使用细菌过滤膜对每一个瓶口进行包裹。置恒温振荡器内37 ℃进行18 h的震荡培养。另外取1.1 mL无菌水，将其加入到包含9 mL培养基的三角瓶中，将其用作调零。

使用同样的方法分别制备溶菌酶的质量浓度为0.0、0.2、0.5、1.0、3.0、5.0 g/L的培养液，使用与上述相同的方法进行接种培养。

1.2.5 OD值测定

在培养完成后，从每一个三角瓶中取出1 mL培养液，同时利用无菌水对其进行10倍稀释，然后使用分光光度计，在550 nm波长的位置对其吸光值进行测定，每一个样品都进行3次测定[2]。

1.3 统计学分析

将实验中获得的数据使用SPSS 19.0统计学软件进行分析。

2 结果与分析

与对照组相比，乳酸链球菌肽对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果随着质量浓度的增加不断增强。在乳酸链球菌肽的质量浓度为0.2 g/L，乳酸链球菌肽对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果已经比较明显，在乳酸链球菌肽的质量浓度为3.0 g/L和5.0 g/L时，其OD值已经接近或者为0。在溶菌酶质量浓度为0.3 g/L时，与对照组相比，其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果已经比较明显，在溶菌酶质量浓度为3.0 g/L和5.0 g/L时，其OD值已经接近或者为0。

从总体上看，乳酸链球菌肽、溶菌酶对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果随着其质量浓度的增加而不断增强。

3 讨论

乳酸链球菌肽又可以称为乳球菌肽，它是一种通过蛋白质发酵而提取的。乳酸链球菌肽可以很好地抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌的生长。通常情况下，它对革兰氏阴性菌的作用不是十分明显，但是在冷冻、加热等特定条件下，会使革兰氏阴性菌死亡，起到好的杀菌效果。溶菌酶是一种水解酶，多存在于哺乳动物的体液、乳汁以及禽类蛋白中，同时在微生物以及植物中也有。溶菌酶一种很好的抑菌蛋白，分为酵母菌细胞壁溶解酶、细菌细胞壁溶解酶以及霉菌细胞壁溶解酶。溶菌酶在枯草杆菌、革兰氏阳性菌等细菌中的效果很好，其本身无毒害，安全性很高，放心使用。

4 结语

乳酸链球菌肽、溶菌酶均对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有很好的抑制作用。考虑到乳酸链球菌肽、溶菌酶均安全无害，因而其最佳抑菌浓度可以为1.0 g/L ，此时其细菌杀灭相对比较好。