周兆华,王志杰,杨一帆 (江苏省常熟市疾病预防控制中心微生物检验科,江苏常熟215500)
沙门氏菌属于肠杆菌科,革兰氏阴性肠道杆菌。除可感染人外还可感染很多动物,属于人畜共患疾病之一[1]。本研究探讨了在沙门氏菌的检验中采用不同的培养基进行检验的检出效果,并将结果进行了有效的分析,现报道如下。
1.1 样品来源选择2018年1至7月市面上进行售卖的猪肉/羊肉进行随机购买,共计167份,在市场中进行正常采购的同时,也随机选取部分被污染的猪肉/羊肉,将其一同作为研究对象送于实验室内。
1.2 培养基SS培养基,基础培养基为牛肉膏5 g/L,脙胨 5 g/L,三号胆盐 3.5 g/L,琼脂 17 g/L,乳糖10 g/L,柠檬酸钠 8.5 g/L,硫代硫酸钠 8.5 g/L,10%柠檬酸铁溶液10 mL,1%中性红溶液2.5 mL,0.1%煌绿溶液0.33 mL。将其溶入1000 mL蒸馏水中,并进行均匀加热搅拌,校正pH为7.0,制好后备用。
HE 培养基为牛肉膏 3 g/L,乳糖 12 g/L,蔗糖12 g/L,水杨素 2 g/L,胆盐 20 g/L,氯化钠 5 g/L,琼脂 15 g/L,溴麝香草酚兰 0.064 g/L,酸性复红0.1 g/L,硫代硫酸钠 6.8 g/L,柠檬酸铁钠 0.8 g/L,去氧胆酸钠2 g/L。将其溶入1000 mL蒸馏水中,进行均匀加热搅拌,制好后备用。
XLD 培养液为牛肉膏 3 g/L,L-赖氨酸 5 g/L,乳糖 7.5 g/L,蔗糖7.5 g/L,木糖 3.75 g/L,氯化钠5 g/L,硫代硫酸钠 6.8 g/L,柠檬酸铁铵 0.8 g/L,去氧胆酸钠2.5 g/L,苯酚红 0.08 g/L,琼脂 15 g/L。 将其溶入1000 mL蒸馏水中,进行均匀加热搅拌,制好后备用[2]。
1.3 方法无菌操作称取25 g(mL)样品置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中,用拍打式均质器拍打 1~2 min于(36±1)℃培养 8~18 h。 轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1 mL转种于10 mL TTB内,于(42±1)℃培养18~24 h。 同时另取 1 mL转种于10 mL SC 内,于(36±1)℃培养 18~24 h。 分别用直径3 mm的接种环取增菌液1环,划线接种于SS、HE、XLD三种不同的培养基上,于(36±1)℃分别培养 40 h~48 h[]或 18~24 h,观察各个平板上生长的菌落[3]。
1.4 观察指标沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征分别为:SS琼脂菌落为黑色有光泽、棕褐色或灰色,菌落周围培养基可呈黑色或棕色,有些菌株形成灰绿色的菌落,周围培养基不变;HE琼脂菌落为蓝绿色或蓝色,多数菌落中心黑色或几乎全黑色,有些菌株为黄色,中心黑色或几乎全黑色;XLD琼脂菌落呈粉红色,带或不带黑色中心,有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心,或呈现全部黑色的菌落,有些菌株为黄色菌落,带或不带黑色中心。如发现可疑菌落则利用沙门氏菌生化鉴定或者MID细菌鉴定系统进行鉴定[4]。
对167份样品进行MID细菌鉴定系统检验,阳性检出率为28.74%,48例,并以此作为金标准进行对比。样品在3种不同培养基上的假阳性情况分别为SS培养基5.99%(10例),HE培养基9.58%(16例),XLD培养基10.78%(18例)。3种培养基在假阳性检验方面差异明显。在检出率结果中,SS培养基的检出率为25.75%(43例),HE培养基的检出率为19.76%(33例),XLD培养基的检出率为17.37%(29例)。检出率结果进行对比,SS培养基的检出率明显高于HE培养基与XLD培养基,HE培养基与XLD培养基经过对比,差异并不明显。其中,SS培养基的敏感性为89.58%,特异性为87.5%,HE培养基的敏感性为82.16%,特异性为81.11%,XLD培养基的敏感性为79.85%,特异性81.45%。SS培养基敏感性与特异性均高于HE培养基与XLD培养基。
沙门氏菌的检验较常采用的培养基为SS培养基、HE培养基以及XLD培养基[5]。这3种培养基在进行检验培养时均有不同的优缺点,在沙门氏菌的实际检验中,仍然存在一定的误差,并不能十分有效并且准确地检出食物样本中的沙门氏菌[6]。在本次检验中,SS、HE以及XLD 3种培养基对猪肉样本进行培养时,培养结果也有所不同。在3种培养基中,SS培养基的沙门氏菌检出率明显较高,其余两种培养基的检出率较差。SS培养基在进行沙门氏菌检验时,拥有强选择性,这就使SS培养基在进行沙门氏菌检验时可以非常准确地检验出食物样本中包含的沙门氏菌,也可以与其余两种培养基共同使用来确保沙门氏菌的检出效果[7]。随着沙门氏菌检测方法不断研究,更多新方法如科马嘉显色培养基均得到临床应用,并且可以较好地提高临床检出率,拥有更多优点[8]。
综上所述,沙门氏菌在不同的培养基中,有不同的检出率,SS培养基的检出率明显高于HE培养基与XLD培养基,可以有效提高食品中沙门氏菌的检出率。