血清胆红素水平对新生儿神经功能及免疫功能的影响*

黄 莉，鲁利群

成都医学院第一附属医院 儿科(成都 610500)

·论著·

血清胆红素水平对新生儿神经功能及免疫功能的影响*

黄 莉，鲁利群Δ

成都医学院第一附属医院 儿科(成都 610500)

目的探讨新生儿血清胆红素水平对神经功能及免疫功能的影响。方法将100例新生儿黄疸患儿按照其治疗前血清总胆红素(total serum bilirubin, TSB)水平的高低分为轻度组(n=33)、中度组(n=36)和重度组(n=31)；另选30例健康新生儿作为正常对照组。比较各组血清TSB/白蛋白(B/A)比值、S-100B蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)水平及外周血T淋巴细胞亚群(CD4+、CD4+/CD8+)的差异，并分析TSB与其他各指标的相关性。结果与正常对照组比较，轻、中、重度组患儿血清B/A比值、S-100B蛋白和NSE水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)；血清IgG、IgA、IgM水平及外周血CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+比值均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)；随着血清TSB水平的升高，血清B/A比值、S-100B蛋白和NSE水平逐渐升高，血清IgG、IgA、IgM水平及外周血CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+比值逐渐降低，且轻、中、重度组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；新生儿血清TSB水平与B/A比值、S-100B蛋白及NSE水平呈正相关(P<0.05)；与血清IgG、IgA、IgM水平及外周血CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+比值呈负相关(P<0.05)。结论新生儿血清胆红素升高可导致一定程度的神经毒性和免疫功能损害，且胆红素水平越高，神经功能和免疫功能损害越严重。

血清胆红素；新生儿；神经功能；免疫功能

新生儿黄疸是指新生儿时期因胆红素代谢异常引起血中胆红素水平升高，出现以皮肤、黏膜及巩膜黄染为特征的病症，是新生儿中最常见的临床问题。大多数新生儿黄疸为生理性，可在出现数天后自然消退，对新生儿影响较小。但少数病理性黄疸因高水平胆红素的毒性作用，可导致重症高胆红素血症甚至胆红素脑病，严重者可造成新生儿死亡[1-2]。研究[3]显示，新生儿高胆红素血症不仅会造成患儿中枢神经系统损伤，还会影响机体免疫功能，包括体液免疫和细胞免疫。目前，关于新生儿血清胆红素水平对其神经功能和免疫功能影响的报道较少，本研究旨在探讨新生儿血清胆红素水平对神经功能及免疫功能的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2015年10月至2017年3月于成都医学院第一附属医院出生并确诊为高胆红素血症(病理性黄疸)的1～7 d日龄足月新生儿100例作为研究对象，诊断符合2010年中华医学会制订的高胆红素血症诊断标准[4]，并排除合并窒息、呼吸窘迫、先天性免疫缺陷、严重心肺疾病及神经系统感染、败血症、肺炎、脐炎等感染性疾病[5]。根据治疗前血清总胆红素(total serum bilirubin, TSB)水平的不同将纳入患儿分为轻度组(220.6 μmol/L290.7 μmol/L)。轻度组33例，男17例，女16例；胎龄(39.2±1.5)周；出生体质量(3 522±460)g；日龄(3.1±1.8)d。中度组36例，男19例，女17例；胎龄(38.9±1.7)周；出生体质量(3 610±501)g；日龄(3.4±2.0)d。重度组31例，男14例，女17例；胎龄(39.0±1.3)周；出生体质量(3 488±475)g；日龄(3.3±2.1)d。另选该院同期30例健康新生儿作为正常对照组，男16例，女14例；胎龄(38.6±1.5)周；出生体质量(3 594±470)g；日龄(3.1±2.2)d。各组新生儿性别、年龄、胎龄、出生体质量及日龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究所有新生儿家长均签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂

FACSCalibur流式细胞仪购自美国BD公司；ELISA检测试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司；CD4-FITC 、CD8-RPE 荧光标记抗体购自西宝生物科技(上海)股份有限公司。

1.3 检测指标及方法

采集黄疸患儿治疗前及健康新生儿外周静脉血各2份，每份2～3 mL。1份离心分离血清，采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清总胆红素(TSB)、白蛋白及免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)水平，计算TSB/白蛋白(B/A)比值；放射免疫法测定血清S-100B蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平；另1份(经EDTA抗凝处理)采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群(CD4+、CD4+/CD8+)变化。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 各组血清S-100B蛋白、NSE水平及B/A比值比较

轻、中、重度组患儿血清B/A比值、S-100B蛋白和NSE水平均显著高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；随着血清TSB水平升高，血清B/A比值、S-100B蛋白和NSE水平逐渐升高，各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

2.2 各组血清免疫球蛋白水平比较

轻、中、重度组患儿血清IgG、IgA、IgM水平均显著低于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；随着血清TSB水平升高，血清IgG、IgA、IgM水平逐渐降低，各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。

表1 各组血清S-100B蛋白、NSE水平及B/A比值比较

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与轻度组比较，△P<0.05；与中度组比较，▲P<0.05

表2 各组血清免疫球蛋白水平比较

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与轻度组比较，△P<0.05；与中度组比较，▲P<0.05

2.3 各组外周血T淋巴细胞亚群变化

轻、中、重度组患儿外周血CD4+细胞百分比和CD4+/CD8+比值均明显低于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；随着血清TSB水平升高，CD4+细胞百分比和CD4+/CD8+比值逐渐降低，各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)(表3)。

表3 各组外周血T淋巴细胞亚群的变化

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与轻度组比较，△P<0.05；与中度组比较，▲P<0.05

2.4 TSB与神经功能及免疫功能相关指标的关系

新生儿血清TSB水平与B/A比值、S-100B蛋白及NSE水平均呈正相关(r=0.783、0.819、0.767，P<0.05)，而与血清IgG、IgA、IgM水平及外周血CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+比值呈负相关(r=-0.938、-0.932、-0.792、-0.846、-0.877，P<0.05)。

3 讨论

新生儿黄疸是新生儿时期最常见的症状之一，绝大多数足月儿和早产儿在新生儿期会出现不同程度的胆红素暂时性增高现象。由于早产儿血清胆红素正常参考值受较多因素影响，因此本研究仅选择足月儿作为研究对象。新生儿黄疸的发生与新生儿胆红素代谢特点有关，血清游离胆红素在胆红素的神经毒性中起主要作用。由于重度高胆红素血症可引起胆红素脑病甚至新生儿死亡[6-8]，且目前国内尚无条件普及血清游离胆红素的定性检测，因此建议新生儿存在血清游离胆红素增高的因素时，适当放宽干预指征[9]。

高水平胆红素致神经功能损伤主要表现为胆红素脑病，是新生儿病理性黄疸最严重的后果之一。目前胆红素脑病的主要实验室检测指标有S-100B蛋白、NSE和B/A比值等。血清S-100B蛋白主要存在于中枢神经系统星型胶质细胞胞浆中，是反应脑损伤的重要标志物[10]。NSE广泛分布于神经元及神经内分泌细胞，是早期诊断神经系统损伤高敏感、高特异性生化指标[11]。B/A比值不仅可用于评估胆红素对中枢神经的毒性作用，还能间接反映血清未结合胆红素的浓度，对预测胆红素的发生具有重要意义[12]。研究[13-14]表明，血清B/A比值、S-100B蛋白及NSE水平越高，发生胆红素脑病的风险越高，病情越重。本研究结果显示，不同程度黄疸患儿的血清B/A比值、S-100B蛋白及NSE水平均明显高于正常对照组，且随着TSB水平的增高，B/A比值、S-100B蛋白及NSE水平随之升高，说明新生儿血清TSB水平越高，神经毒性越强，新生儿神经功能损害越严重。

高水平胆红素不仅对神经功能有损害作用，对免疫功能亦有影响。T淋巴细胞亚群是机体细胞免疫功能的重要指标，其中CD4+和CD8+T细胞对机体的细胞免疫和体液免疫具有重要调节作用。正常生理条件下，CD4+/CD8+处于动态平衡状态以维持机体免疫功能正常，CD4+/CD8+比值降低则提示T淋巴细胞亚群功能紊乱，免疫调节失衡。本研究中，黄疸患儿外周血中CD4+细胞百分比和CD4+/CD8+比值均明显低于健康新生儿，且随着TSB水平的升高，CD4+细胞百分比和CD4+/CD8+比值逐渐降低，提示新生儿胆红素水平升高可抑制细胞免疫功能，且TSB水平越高，细胞免疫功能越低。研究[15]发现，黄疸亦可引起体液免疫功能改变。本研究通过对各组新生儿血清免疫球蛋白水平进行比较分析，结果显示黄疸患儿血清IgG、IgA、IgM水平明显低于健康新生儿，且TSB水平越高，免疫球蛋白水平越低，说明新生儿高胆红素水平可下调体液免疫反应，TSB水平越高，对体液免疫功能的影响越大。因此，高水平的胆红素对新生儿体液和细胞免疫功能均具有抑制作用。

本研究相关性分析显示，TSB水平与其B/A比值、S-100B蛋白和NSE水平均呈正相关，与免疫球蛋白水平及外周血CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+比值呈负相关，进一步说明新生儿血清TSB水平越高，对其神经功能及免疫功能的不利影响越大。

综上所述，新生儿血清高胆红素水平可导致一定程度的神经毒性和免疫功能损害，且胆红素水平越高，神经毒性越强，免疫功能损害越严重。临床上应密切监测新生儿血清胆红素，降低胆红素脑病发生风险，同时重视胆红素升高引起的免疫学改变，加强新生儿黄疸的综合治疗，改善新生儿机体免疫状态。本研究仅探讨了血清胆红素水平对出生后1～7 d足月新生儿神经功能及免疫功能的影响，其对患儿远期功能以及对早产儿的影响，尚有待进一步研究。

[1]Atkinson M, Budge H. Review of the NICE guidance on neonatal jaundice[J]. Arch Dis Child Educ Pract Ed, 2011, 96(4): 136-140.

[2]Hameed N N, Na' Ma A M, Vilms R,etal. Severe neonatal hyperbilirubinemia and adverse short-term consequences in Baghdad, Iraq[J]. Neonatology, 2011, 100(1): 57-63.

[3]王晓娇, 姜敏, 王亚娟. 新生儿胆红素脑病早期监测的研究进展[J]. 中国新生儿科杂志, 2014, 29(6): 427-429.

[4]《中华儿科杂志》编辑委员会, 中华医学会儿科学分会新生儿学组. 新生儿黄疸诊疗原则的专家共识[J]. 中华儿科杂志, 2010, 48(9): 685-686.

[5]中华医学会儿科学分会新生儿学组, 中国新生儿胆红素脑病研究协作组. 中国新生儿胆红素脑病的多中心流行病学调查研究[J]. 中华儿科杂志, 2012, 50(5): 331-335.

[6]李云珠, 俞善昌. 新生儿胆红素脑病的研究进展[J]. 中华儿科杂志, 1996, 34(4): 70-71.

[7]Lawn J E, Blencowe H, Oza S,etal. Every Newborn: progress, priorities, and potential beyond survival[J]. Lancet, 2014, 384(9938): 189-205.

[8]Bhutani V K, Zipursky A, Blencowe H,etal. Neonatal hyperbilirubinemia and Rhesus disease of the newborn: incidence and impairment estimates for 2010 at regional and global levels[J]. Pediatr Res, 2013, 74(Suppl 1): 86-100.

[9]中华医学会儿科学分会新生儿学组, 《中华儿科杂志》编辑委员会. 新生儿高胆红素血症诊断和治疗专家共识[J]. 中华儿科杂志, 2014, 52(10): 745-748.

[10] Olivecrona Z, Bobinski L, Koskinen L O. Association of ICP, CPP, CT findings and S-100B and NSE in severe traumatic head injury. Prognostic value of the biomarkers[J]. Brain Inj, 2015, 29(4): 446-454.

[11] Kövesdi E, Lückl J, Bukovics P,etal. Update on protein biomarkers in traumatic brain injury with emphasis on clinical use in adults and pediatrics[J]. Acta Neurochirurgica, 2009, 152(1): 1-17.

[12] Sato Y, Morioka I, Miwa A,etal. Is bilirubin/albumin ratio correlated with unbound bilirubin concentration[J]. Pediatr Int, 2012, 54(1): 81-85.

[13] 陈洁, 钱新华, 梁婉仪, 等. 血清神经元特异性烯醇化酶及S100B蛋白在新生儿胆红素脑损伤的变化及意义[J]. 中国优生与遗传杂志, 2012, 20(6): 66-68.

[14] 邱建武, 刁诗光, 刘晓燕, 等. 新生儿胆红素脑病监测NSE的意义[J]. 中国妇幼健康研究, 2016, 27(12): 1445-1446.

[15] 何源, 唐艳林, 易海英, 等. 母乳性黄疸婴儿免疫功能研究[J]. 中华实用诊断与治疗杂志, 2013, 27(2): 140-141.

TheEffectoftheSerumBilirubinLevelontheNeonatalNeurologicalFunctionandImmuneFunction

HuangLi,LuLiqunΔ.

DepartmentofPediatrics,TheFirstAffiliatedHospitalofChengduMedicalCollege,Chengdu610500,China

ObjectiveTo study the effect of the serum bilirubin level on the neurological function and immune function in neonates.MethodsThe 100 cases with neonatal jaundice were divided into the mild group (n=33), moderate group (n=36) and severe group (n=31) according to the levels of their serum total bilirubin (TSB) before treatment. Another 30 healthy neonates were selected into the normal control group. The ratio of TSB to albumin (B/A) , the levels of serum S-100B protein, neuron specific enolase (NSE) and immunoglobulin (IgG, IgA and IgM) and the changes of peripheral blood T lymphocyte subsets (CD4+and CD4+/CD8+) in each group were compared respectively, and the correlation between TSB and the other indexes was analyzed.ResultsCompared with the normal control group, the ratio of B/A and the levels of serum S-100B and NSE in the mild, moderate and severe groups were significantly increased (P<0.05), while the levels of serum IgG, IgA and IgM, the percentage of CD4+cells and the ratio of CD4+/CD8+in those groups were significantly decreased (P<0.05). With the increase of the serum TSB level, the ratio of B/A and the levels of serum S-100B and NSE gradually increased while the levels of serum IgG, IgA and IgM, the percentage of CD4+cells and the ratio of CD4+/CD8+gradually decreased, and the differences among the mild, moderate and severe groups were statistically significant (P<0.05). In the neonates, the serum TSB level was correlated positively with the ratio of B/A and the levels of serum S-100B and NSE (P<0.05), while it was correlated negatively with the levels of serum IgG, IgA and IgM, the percentage of CD4+cells and the ratio of CD4+/CD8+(P<0.05).ConclusionThe neonatal hyperbilirubinemia could lead to a certain degree of neurotoxicity and immune impairment and the higher levels of bilirubin would cause the greater impairment of the neurological and immune function.

Serum bilirubin; Neonate; Neurological function; Immune function

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20171108.0839.006.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2017.06.011

R722.1

A

教育部“春晖计划”合作科研基金项目(No:Z2016121)

△

鲁利群，E-mail:879553911@qq.com