手足口病患儿血清中NSE和S-100β含量的变化

周土木

(浙江衢化医院 儿内科，浙江 衢州 324004)

手足口病患儿血清中NSE和S-100β含量的变化

周土木

(浙江衢化医院 儿内科，浙江 衢州 324004)

目的研究血清神经元特异性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β含量对手足口病患儿病情评估和临床诊断的意义。方法154例手足口病患儿分为危重型组(32例)、重型组(67例)、轻症组(55例)，选取同期健康体检儿30例作为对照组；采用RT-PCR方法对病患儿咽拭子样本进行病原学鉴定，利用酶联免疫测定法检测各组血清NSE和S-100β的水平。结果送检154份病例中，EV71检测呈阳性率为59.1%，COXA-16检测呈阳性率为24.7%。NSE和S-100β水平检测结果显示，危重型组高于重型组、轻症组和对照组，重型组高于轻症组和对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；但轻症组和对照组的含量差异无统计学意义(P>0.05)；危重型组和重型组患儿血清中S-100β和NSE含量水平呈显著正相关。结论手足口病患儿血清中NSE和S-100β水平变化与病情的轻重相关，该指标的检测有助于临床上对患儿手足口病病情的早期评估和判断预后。

儿童手足口病；神经元特异性烯醇化酶；S-100β；病情评估

手足口病(Hand-foot-mouth Disease，HFMD)是一种全球性的儿科常见传染病，主要是由多种肠道病毒感染引起，多发于5岁以下儿童中，常会引起急性传染[1]。该病情发展迅速，常引起心、肺或脑部并发症，例如心肌炎、神经源性肺水肿、脑膜炎、脑脊髓炎和脑炎等[2]，致死率较高、严重影响了儿童的健康。

目前，临床上在患儿发病早期能够很好地对手足口病的病情进行预测和分型的诊断标准不多，特别是对于判断继发性脑部并发症的指标十分有限。血清神经元特异性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β是目前医学界公认的分别能够特异性反映中枢神经系统神经元和星形胶质细胞损伤程度的生物学标志物[3]，越来越多研究认为是检测脑损伤程度和预后评估的敏感指标。本研究通过检测手足口病不同病情程度患儿血清中NSE和S-100β的含量水平变化，探索NSE和S-100β在手足口病患儿的早期病情程度的判断和治疗上的意义，以期为NSE和S-100β作为指示物的临床应用提供依据。

1 资料与方法

1.1 对象及分组 选取我院2012年1月—2016年5月收治的154例手足口病患儿，根据《手足口病诊疗指南(2010年版)》的诊断标准，并经过血清学和病原学检查鉴定，均出现手、口、足和臀部的疱疹，部分儿童还伴有发热等症状；根据患儿的病情程度分为危重型组(32例)、重型组(67例)、轻症组(55例)；并选取30例同期健康体检儿童作为对照组，病原学检测EV71和COXA-16均呈阴性。患儿中男93例、女61例，年龄1.2～6.8岁，平均2.5±0.8岁；对照组儿童中男18例、女12例，年龄1.4～6.5岁，平均2.5±0.5岁；2组年龄、性别差异均无统计学意义(P>0.05)。本研究通过医院伦理委员会批准，所有患儿家长知情同意。

1.2 病原学检查 用消毒的采样棉签，轻柔适度的抹拭患儿两侧扁桃体和咽后壁部位，取样过程中应尽量避免棉签接触到舌部。获取咽拭子样本后，迅速将取样棉签转入到采样管中(含有1 mL的Hanks平衡盐保存液)，并旋盖拧紧密封，保持湿润环境。对照组的正常儿童用同样的方法获取咽拭子样本。将获取的保存于Hanks平衡盐溶液的咽拭子样本在12 h内在冰浴的低温条件下，通过冷藏运输途径及时送予衢州市疾病预防控制中心进行肠道病毒CoxA16和EV71的特异性核酸定性检测。

1.3 样本采集 本研究中所选择的患儿病例均是患儿发病的3天内住院治疗，在患儿入院的24小时内分别抽取静脉血3 mL，对照组的正常儿童在相同的时间抽取等量的静脉血作为对照。所有静脉血样本均需要经过离心(3000 rpm, 20 min)处理，然后取上层血清置于-70℃保存，并同时取1mL行常规血白细胞和血糖、血肌酐的生化学项目检测。

1.4 NSE和S-100β水平的检测 从-70℃确认温度冰箱中取出各患儿血清样本，采用酶联免疫测定法(ELISA)检测NSE和S-100β的水平，测定方法严格按照NSE ELISA试剂盒(R&D Systems, USA)和S-100β ELISA试剂盒(R&D Systems, USA)说明书的方法操作，并记录好各样本的指标数据。

1.5 统计学分析 利用SPSS 19.0进行统计学处理，计量资料2组间采用t检验，多组间采用单因素方差分析LSD检验方法，数据均符合正态分布；计数资料用χ2检验，相关分析采用Pearson直线相关性分析方法。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 基本临床资料 各组患儿和对照组在年龄、性别构成、血肌酐含量和血白细胞计数方面，差异无统计学意义(P>0.05)；但危重组患儿的血清中血糖含量显著高于重型组、轻症组和对照组(P<0.05)，而重型组、轻症组和对照组之间血糖含量差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 病原学检测 送检154份咽拭子样本，经RT-PCR鉴定，结果显示EV71阳性患儿91例，占比59.1%，COXA-16阳性患儿38例，占比24.7%，EV71和COXA-16均呈阳性的患儿共8例，占比5.2%，两者均呈阴性的患儿共17例，占比11.0%。在危重型患儿中，EV71阳性和COXA-16阳性病例分别占66%和18%；而在重型患儿中，EV71阳性和COXA-16阳性病例分别占70%和9%。轻症组患儿中，引起手足口病的病原主要为EV71(42%)和COXA-16(47%)，对照组健康儿童均未检测出EV71和COXA-16。

表1 各组患儿和对照组的基本临床资料比较

2.3 血清中NSE和S-100β水平 危重型患儿血清中NSE和S-100β水平均高于重型组、轻症组和对照组，重型组患儿血清中NSE和S-100β水平也高于轻症组和对照组；差异均有统计学意义(P<0.05)；而轻症组和对照组患儿的NSE和S-100β水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.4 血清中NSE和S-100β水平相关分析 对手足口病不同病情程度的患儿血清中NSE与S-100β含量水平进行Pearson相关性分析，结果显示，手足口病病情危重型组和重型组患儿血清中S-100β与NSE的含量水平呈显著正相关(r=0.641、0.512，均P<0.05)。但是在手足口病病情轻症组和对照组健康患儿的血清中S-100β与NSE的含量水平并未显示出明显的相关性(P>0.05)。见图1。

NSES⁃100β危重型组(n=32)2463±282∗#213±038∗#重型组(n=67)1837±246∗165±029∗轻症组(n=55)1065±171083±015对照组(n=30)959±113079±011F94005119334P00000000

注：*分别与轻症组、对照组比较，P<0.05；#与重型组比较，P<0.05。

图1 手足口病患儿血清中NSE与S-100Β含量水平Pearson相关性分析

2.5 转归分析 手足口病轻症组中有21例患儿的血清中S-100β含量水平高于1.2 ng/mL，定义为高水平组，有34例患儿血清中S-100β含量水平低于1.2 ng/mL，定义为低水平组[4]。预后转归结果显示，高水平组有10例患儿转化为手足口病重症或危重症病情(47.6%)，低水平组患儿有8例(23.5%)转化为重症或危重症病情；S-100β高水平组患儿转化为重症或危重症的发生率高于低水平组，差异有统计学意义(χ2=4.637，P<0.05)。

3 讨论

手足口病是由多种肠道病毒感染所引起，其中尤以属于小RNA病毒科的肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(COXA16)的致病性最高，对儿童的危害性也极其严重[5]。EV71病毒可以直接感染患儿的髓质和脊髓，引发不同程度的中枢神经系统病变的症状，继而导致脑脊髓膜炎、神经源性肺水肿等与神经系统相关疾病的发生，EV71病毒感染的情况多发生在手足口病重症或危重症病例中。本研究中，危重症组和重症组患儿血清中检测出EV71呈阳性的比例分别达到了66%和70%，显著高于轻症组中EV71阳性率(42%)，这一结果与之前研究者的报道一致[6]。HFMD具有传播途径多且复杂和传染性强等特点，尤其是对于重症HFMD患儿，其致死率和致残率一致高居不下。因此，寻找合适的生物标志物，在早期诊断中就能够发现重症患儿以及评估患儿脑神经损伤程度，及早进行针对性的治疗是目前HFMD的临床治疗亟需解决的问题。

血清神经元特异性烯醇化酶(Neutron Specific Enolase, NSE)和S-100β是目前医学界公认的能够特异性反映患者脑损伤程度的生物学标志物[3]。NSE主要存在于神经元和神经内分泌细胞中，正常情况下，血清中的NSE的含量水平很低，但当神经组织遭到破坏后，脑部的包膜和血-脑脊液屏障受损而通透性升高，NSE随之大量渗透到血液中，导致血液中NSE水平升高[7]。因此，NSE常被认为是检测脑损伤程度和预后评估的敏感指标[8]。李俊等[9]研究发现重型颅脑损伤患者血清NSE的水平显著升高；张永英[10]发现病毒性脑炎患儿的血清中NSE含量水平显著高于健康儿。本研究中，手足口病重型组或危重型组患儿的血清中NSE含量均维持在较高水平，且随着病情的加重，其含量水平也随之而升高，相较于轻症组和对照组差异显著。这说明患儿血清中NSE的含量水平对于患儿病情程度具有良好的指示性。

S-100β蛋白存在于星形胶质细胞和雪旺细胞中，当颅脑受到外力打击而受损后，中枢神经系统的组织遭到破坏，进而神经胶质细胞中的S-100β蛋白会因此而渗入到脑脊液，然后通过已受到损伤的血-脑屏障进入到外周血中，引起血清中S-100β含量的升高。因此，通常将S-100β作为中枢神经系统星形胶质细胞完整性的特异标志物[11]。史艳平等[12]对189例危重症或重症HFMD患儿的脑脊液和血清中S-100β含量水平检测分析发现，HFMD病情越严重，患儿血清中S-100β含量水平越高。本研究中，HFMD重型组或危重型组患儿的血清中S-100β含量均维持在较高水平，且随着病情的加重，其含量水平也随之而升高，相较于轻症组和对照组差异显著。同时，我们也注意到轻症组中S-100β含量水平较高的患儿病情转为危重型或重型的概率要高于S-100β含量水平较低的患儿，这提示在临床治疗过程中，对于重症患儿要尽早发现、及时治疗，同时要关注轻症患儿血清中S-100β含量水平的变化，警惕患儿病情的进一步恶化。

Pearson相关性分析结果显示，HFMD病情危重型组和重型组患儿血清中S-100β与NSE的含量水平呈显著正相关，但在轻症组和对照组并没有发现两者之间存在显著相关性。NSE和S-100β作为脑损伤的生物学指示物，在对HFMD患儿早期的病情诊断和预后评估中能够提供有价值的客观依据，特别是反映危重型和重型患儿的脑损伤程度，对于临床上HFMD危重型和重型患儿的发现和及时治疗具有重要的指导作用。

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PatternofvariationinthelevelsofserumNSEandS-100βinchildrenwithhand-foot-mouthdisease

ZHOU Tu-mu

(DepartmentofPediatrics,ZhejiangQuhuaHospital,ZhejiangQuzhou324004,China)

ObjectiveTo evaluate the implications of the recognition of the pattern of variation in the levels of serum neuron specific enolase (NSE) and S-100β for the assessment and diagnosis of hand, foot and mouth disease (HFMD) in children.Methods154 cases of children with HFMD were firstly divided into three experimental groups, namely, critical type group (n=32), severe group (n=67) and mild disorder group (n=55) according to the clinical symptoms and signs; 30 healthy children were chosen as the control group. Secondly, RT-PCR method was used to identify the virus type of throat swab samples of children with HFMD and the levels of NSE and S-100β were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).FindingsOf the 154 cases, 59.1% were found positive cases in EV71 test and 24.7% were found positive cases in COXA-16 detection. The results showed that the levels of NSE and S-100β of the critical type group were higher than those in the severe group, the mild disorder group and the control group, and those of the severe group were higher than those in the mild group and the control group. The differences were statistically significant (P<0.05). However, the levels of the mild group and the control group were not significantly different (P>0.05). There was a significant positive correlation between serum S-100β and NSE levels in patients from the critical type group and the severe group.ConclusionThe changes of serum NSE and S-100β levels in children with HFMD are correlated to the severity of the disease. And the detection of these indices can well inform the early assessment and prognosis of the disease.

hand-foot-mouth disease (HFMD); neutron specific enolase (NSE); S-100β; disease assessment

2017-02-17

周土木(1966 - )，男，浙江衢化人，本科，主治医师。

10.3969/j.issn.1674-6449.2017.06.015

R725.1

A

1674-6449(2017)06-0647-04