宫血净颗粒中药物薄层色谱法鉴别

刘立轩



宫血净颗粒中药物薄层色谱法鉴别

刘立轩

目的：探讨宫血净颗粒中药物的质量标准。方法：采用薄层色谱(TLC)法鉴别宫血净颗粒中的黄芪、茜草、枳壳、益母草四味中药。结果：TLC法可以鉴别出黄芪、茜草、枳壳、益母草的特征斑点，专属性强。结论：TLC结果可靠，简便易行，可作为宫血净颗粒的质量控制依据。

宫血净颗粒； 薄层色谱法； 黄芪； 茜草； 枳壳； 益母草

宫血净颗粒为医院制剂由北刘寄奴、续断、黄芪、益母草、马齿苋、茜草等九味药物组成，主要用于月经不调，月经过多。陈梅等[1]曾报道宫血净颗粒治疗月经过多56例，疗效较好。本实验采用TLC法鉴别宫血净颗粒中的黄芪、茜草、枳壳、益母草四味中药，结果表明该方法操作简便易行、重复性好，可作为宫血净颗粒质量控制的重要依据，现报告如下。

1 仪器与材料

CQ-939全自动薄层制板机(北京恒奥德仪器仪表有限公司)；WFH-201紫外投射仪(上海精科)；KZW-G型仪表恒温不锈钢水浴锅(上海)；SB-3200DTS超声波清洗机(宁波新芝)；梅特勒电子天平(万分子一)；薄层层析硅胶G(青岛裕宝精细化工有限公司)；大叶茜草素对照品(批号为：110884-200604)、黄芪甲苷对照品(批号为：110781-201314)、茜草对照药材(批号为：1049-200301)、柚皮苷(批号为：110722-201111)、盐酸水苏碱对照品(批号为：110712-201111)均购自中国药品生物制品检定所；水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 黄芪的鉴别[2-3](1)供试品溶液的制备：取宫血净颗粒三批各5g，研细，加50ml水使溶解，用水饱和正丁醇分3次提取，每次30ml，合并3次正丁醇提取液，再用1%氢氧化钠溶液每次50ml分2次提取，弃去氢氧化钠提取液，然后再用正丁醇饱和的水每次50ml洗涤2次，弃去水液，将正丁醇液用水浴蒸干，再加甲醇1ml使残渣溶解，制成供试品溶液。(2)对照品溶液的制备：用甲醇溶解黄芪甲苷对照品制成1mg/ml的对照品溶液。(3)阴性对照溶液的制备：按处方比例以宫血净颗粒制备工艺制成不含黄芪的阴性样品，以2.1.1方法制成阴性对照溶液。

2.1.1 色谱条件 薄层板：以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂制备厚度0.5mm的硅胶G板，于105℃活化30min。展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(10：20：11：5)10℃以下放置的下层溶液。

2.1.2 鉴别方法 照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VIB)试验，取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，凉干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，现相同的橙黄色荧光斑点。见图1。

2.2 茜草的鉴别[2-3](1)供试品溶液、茜草对照药材溶液的制备:取宫血净颗粒3批各10g，研细，加甲醇40ml，超声处理30min，滤过，将滤液蒸干，用1ml甲醇使残渣溶解，制成供试品溶液。取茜草对照药材3g，加甲醇20ml，按供试品溶液同法制成对照药材溶液。(2)对照品溶液的制备：用甲醇溶解大叶茜草素对照品制成2mg/ml的对照品溶液。(3)阴性对照溶液的制备：按处方比例以宫血净颗粒制备工艺制成不含茜草的阴性样品，以2.2.1方法制成阴性对照溶液。

2.2.1 色谱条件 薄层板：以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂制备厚度0.5mm的硅胶G板，于105℃活化30min。展开剂：石油醚(60℃～90℃)-丙酮(4：1)。

2.2.2 鉴别方法 照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VIB)试验，取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，凉干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。见图2。

2.3 枳壳的鉴别[2-3](1)供试品溶液的制备：取宫血净颗粒3批各10g，研细，加30ml水使溶解，置分液漏斗中用乙醚萃取2次，每次25ml，弃去乙醚液，水层再用乙酸乙酯每次30ml提取2次，将2次乙酸乙酯提取液合并后置水浴蒸干，加甲醇1ml使残渣溶解，制成供试品溶液。(2)对照品溶液的制备：用甲醇溶解柚皮苷对照品制成1mg/ml的对照品溶液。(3)阴性对照溶液的制备：按处方比例以宫血净颗粒制备工艺制成不含枳壳的阴性样品，以2.3.1方法制成阴性对照溶液。

2.3.1 色谱条件 薄层板：以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂制备厚度0.5mm的硅胶G板，于105℃活化30min。展开剂：甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸 (2：2.5：5：0.5：0.5)。

2.3.2 鉴别方法 照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VIB)试验，取供试品溶液和阴性对照溶液各15μl，取对照品溶液10μl，于同一硅胶G薄层板上点样，待充分展开后，取出，凉干，喷以2%三氯化铝甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。见图3。

2.4 益母草的鉴别[2-3](1)供试品溶液的制备：取宫血净颗粒3批各15g，研细，加50ml水使溶解，用2mol/l盐酸调节pH值至1～2，酸液通过已处理好的强酸性阳离子交换树脂(内径10mmm，柱高20cm)，先以水洗脱至流出液近无色，弃去水洗液，再以100ml乙醇-氨水(8：2)混合溶液洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用水浴蒸干，加乙醇1ml使残渣溶解，制成供试品溶液。(2)对照品溶液的制备：用甲醇溶解盐酸水苏碱对照品制成5mg/ml的对照品溶液。(3)阴性对照溶液的制备：按处方比例以宫血净颗粒制备工艺制成不含益母草的阴性样品，以2.4.1方法制成阴性对照溶液。

2.4.1 色谱条件 薄层板：以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂制备厚度0.5m的硅胶G板，于105℃活化30min。展开剂：丙酮-无水乙醇-盐酸(10：6：1)。

2.4.2 鉴别方法 照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VIB)试验，取供试品溶液和阴性对照溶液各20μl，取对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开，取出，凉干，喷以稀碘化鉍钾试液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。见图4。

1、2、3为样品，4 黄芪甲苷对照品，5 阴性对照 1、2、3为样品，4茜草对照药材，5大叶茜草素对照品，6阴性对照

1 、2、3为样品，4柚皮苷对照品，5阴性对照 1、2、3样品，4盐酸水苏碱对照品，5阴性对照

3 讨论

宫血净颗粒由北刘寄奴、续断、黄芪、益母草、马齿苋、茜草等九味药物组成，方中北刘寄奴活血止血为君药，益母草活血养血祛瘀，马齿苋凉血散热，贯众炭凉血止血，黄芪补中益气，川续断补血生血。诸药合用，共奏清热凉血，化瘀止血，益气扶正的作用。本品组方是在传统中医药理论指导下，根据“宫血”的发病机制及演变规律，既能快速止血以治标，又能益气扶正、固冲摄血以治本，从而有效的改善机体状态，增强了机体的抵抗力，使脏腑功能得到有效调节，本固血充则月经自调，使瘀血去，新血生而归经，以达止血之目的。

根据方中各药材有效成分及制备工艺，结合查阅相关文献报道，按照《中国药典》2010年版一部附录VI薄层色谱法，对宫血净颗粒进行了薄层鉴别研究。经过鉴别研究，结果表明，黄芪、茜草、枳壳、益母草采用TLC法专属性、重复性良好，方法简便可行,可以作为宫血精颗粒质量控制的指标。另外，对方中北刘寄奴、马齿苋、绵马贯众、仙鹤草也按药典方法进行了薄层鉴别的研究[2]，但经过反复试验，分离情况均不太理想，不能有效展开，Rf值偏小，重现性、专属性较差，还需进一步研究，暂时不适合作为该制剂质量控制的指标。

[1] 陈梅，杨援朝，郑敏沛.宫血净颗粒治疗月经过多56例[J].陕西中医，2009,30(7)：775.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]．北京：化学工业出版社，2010.

[3] 吕武清，龙新华．中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京：人民卫生出版社，1997：36.

宁夏职业技术学院 生物与制药系，宁夏 银川 750021

刘立轩(1978-)，男，讲师，大学。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2017.01.038

R 917

A

1008-7044(2017)01-0088-03

2016-07-28)