寒热交替刺激对正常及免疫低下大鼠肺及皮毛组织结构的影响

梁 锐，程天虹，张瑞卿，杨 蓉，赵延龙，郭晓峰，李俊莲

（山西中医药大学，山西太原030024）

皮肤是人体抗御外邪的第一道屏障，若皮毛受到邪气侵袭，正虚抗邪无力，则邪气入里，内舍于肺。而“肺主皮毛”，肺伤，同样也会引起皮毛发生变化。肺与皮毛在生理上同源同功，互助互用，在病理上相互影响，共同为病。本研究从中医整体观念出发，基于《黄帝内经》中“肺主皮毛”，“皮毛者，肺之合也”的基本理论以及“天人合一”的基本思想，使用人工气候箱及氢化可的松制备寒热刺激与免疫低下大鼠模型，采用玉屏风散对其干预，通过观察寒热环境及免疫低下大鼠肺与皮毛组织结构变化，探讨寒热刺激对大鼠肺与皮毛组织的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SPF级健康雄性Wistar大鼠108只（由中国人民解放军医学科学院实验动物中心提供），体质量180~220 g，合格证号为SCXK-（军）2012-0004。实验动物环境设施符合I级标准。室温20℃~25℃，相对湿度为60%~80%，自然采光。自由进食饮水，以清洁级饲料喂养，适应性饲养1 w后开始实验。

1.1.2 药物与试剂 氢化可的松注射液，规格：20mL：100 mg，批号：H12020887，天津金耀药业有限公司。脱毛剂，规格：100 mL：3.57 fl.oz；批号：50RF6102，广东省广州市玛贝拉化妆品有限公司。玉屏风颗粒，规格：5 g×21 袋，批号：Z10930036，国药集团广东环球制药有限公司。

1.1.3 实验仪器 烘干箱：DZF-6050型，上海善志仪器设备有限公司；生物显微镜：ZL2800T型，上海奋业光电仪器设备有限公司；人工气候箱：LRH-800-GSI型，韶关市泰宏医疗器械有限公司（珠江牌培养箱）；电子天平：FA2204型，上海皓庄仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组 SPF级健康雄性Wistar大鼠108只，按照随机数字表法分为正常常温组（A组）、正常寒热交替组（B组）、正常寒热交替加中药干预组（C组）、免疫低下常温组（D组）、免疫低下寒热交替组（E组）、免疫低下寒热交替加中药干预组（F组）6组，每组18只。于造模前测体质量，观察精神状态、活动情况、饮食饮水量、毛色、皮肤、关节及二便等情况。

1.2.2 造模 ①免疫低下大鼠模型的制备［1］。适应性饲养结束后，免疫低下常温组（D组）、免疫低下寒热交替组（E组）、免疫低下寒热交替加中药干预组（F组）各组大鼠均皮下注射免疫抑制剂氢化可的松注射液20 mg/（kg·d），连续5 d。②寒热刺激大鼠模型的制备［2-4］。低免模型造模成功后，正常寒热交替组（B组）、正常寒热交替加中药干预组（C组）、免疫低下寒热交替组（E组）、免疫低下寒热交替加中药干预组（F组）各组大鼠每天定时置于人工气候箱喂养，并设定RH（空气中实际含量占同等温度下饱和含水量的百分比值）、T（温度）。寒刺激设定 RH（50±4）%，T（0±2）℃，每天40 min；寒刺激结束后接着进行热刺激，热刺激设定 RH（50±4）%，T（33±2）℃，每天 20 min。造模组大鼠每天定时接受1次寒热交替刺激，其余时间为常温环境喂养。

1.2.3 药物干预 每天定时将寒热交替加中药干预组的大鼠置于人工气候箱接受寒热交替刺激后，按中药给药剂量等效换算方法计算，将玉屏风颗粒成人每日所需药量换算成大鼠所需药量为25 g/kg［5］，连续灌胃 28 d，其余时间为常温环境喂养。实验期间动物均自由进食饮水。

1.2.4 检测指标 实验第7天、第14天、第28天，随机抽取每组大鼠各6只，于检测前禁食禁水12 h，腹腔注射10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）进行麻醉，取适量脱毛剂给大鼠背部皮肤局部进行脱毛，打开胸腔，取两叶右肺及1 cm×1 cm的背部皮肤。将右肺及皮肤用生理盐水冲洗干净后，分别置于提前配置好的4%甲醛溶液中固定备用。取大鼠肺及皮肤组织经中性甲醛缓冲液固定，多级酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚度约3~4 μm，作HE染色。

对比观察各组之间分别于第7天、第14天、第28天的病理组织学改变，本实验选择在光镜下观察，物镜×4，目镜×10 倍数。

2 结果

2.1 各组大鼠第7天、第14天、第28天肺部病理组织结构

结果见图1~图3。

图1 HE染色检测各组大鼠第7天肺组织结构病理改变（光学显微镜，×400）

图1提示第7天：A组肺组织未见明显异常；B组可见局部肺泡萎陷，淋巴细胞及少量中性粒细胞浸润，纤维组织增生；C组可见细支气管周灶状淋巴细胞浸润；D组可见细支气管、小血管、肺实质小灶淋巴细胞浸润，肺泡内灶状组织细胞浸润；E组可见部分区域肺泡萎陷，淋巴细胞、浆细胞浸润，纤维组织增生呈实质性变化；F组可见细支气管及肺泡周围灶状淋巴细胞浸润，局灶细支气管周围组织细胞沉积。

图2 HE染色检测各组大鼠第14天肺组织结构病理改变（光学显微镜，×400）

图2提示第14天：A组肺组织未见明显异常；B组小血管充血，部分区域肺泡隔增厚，淋巴细胞浸润，纤维组织增生；C组可见细支气管及血管周围多灶状淋巴细胞浸润；D组可见部分区域肺泡隔增厚，慢性炎细胞浸润，纤维组织增生；E组可见部分区域肺泡隔增厚，慢性炎细胞浸润，纤维组织增生；F组部分肺泡隔膜增厚，慢性炎细胞浸润，纤维组织增生。

图3 HE染色检测各组大鼠第28天肺组织结构病理改变（光学显微镜，×400）

图3提示第28天：A组肺组织未见明显异常；B组可见支气管、细支气管及小血管周围多灶慢性炎细胞浸润，部分肺泡上皮及细支气管上皮增生，局灶乳头状增生，局灶区域肺泡隔增厚，纤维组织增生，慢性炎细胞及组织细胞浸润，部分区域肺泡扩张融合；C组可见小血管周慢性炎细胞及少量中性粒细胞浸润；D组可见细支气管、小血管周多灶淋巴细胞浸润，肺泡隔增厚，淋巴细胞浸润，部分肺泡腔内大量组织细胞沉积；E组可见细支气管、小血管周多灶慢性炎细胞、中性粒细胞浸润，部分肺实质大片状慢性炎细胞浸润及纤维组织增生，肺泡萎陷，组织细胞沉积；F组近胸膜处小片状慢性炎细胞及少量中性粒细胞浸润，纤维组织增生。

2.2 各组大鼠第7天、第14天、第28天皮肤病理组织结构

结果见图4~图6。

图 4提示第 7天 A、B、C、D、E、F 组皮肤组织均未见明显异常。

图5提示第14天A、B、C、D组皮肤组织均未见明显异常；E组可见局灶周围少量慢性炎细胞浸润；F组可见小血管周小灶状淋巴细胞浸润。

图4 各组大鼠第7天皮肤组织结构病理改变（光学显微镜，×400）

图5 各组大鼠第14天皮肤组织结构病理改变（光学显微镜，×400）

图6 各组大鼠第28天皮肤组织结构病理改变（光学显微镜，×400）

图6提示第28天A、B、C、F组皮肤组织均未见明显异常；D组可见真皮少量慢性炎细胞（淋巴）浸润；E组真皮少量慢性炎细胞浸润。

3 讨论

中医学认为“肺主皮毛”，肺通过宣发作用，输精于皮毛，其中也包括卫气的宣发。肺损伤，会使卫气“温分肉、充皮肤、肥腠理、司开合”的功能受到影响。卫气防御外邪的功能受到限制，邪气乘虚而入导致人体发病［6-7］。本实验研究结果显示，同期寒热交替刺激环境下大鼠肺组织存在慢性炎细胞浸润、淋巴细胞浸润，纤维组织增生，肺泡萎缩等不同程度的损伤；玉屏风散干预后得以改善。而皮肤组织的病变程度则不明显，仅表现为低免模型组皮肤组织出现少量淋巴细胞浸润。表明肺为娇脏，不耐寒热，在皮肤与肺的寒热交替刺激下，肺组织比皮肤更容易受到损伤，这可能与大鼠皮毛组织较人体更致密有关系，其内在机制还需进一步探究。