反,反-2, 4-己二烯乙酸酯高效液相色谱分析方法研究

王滢秀，李金涛，张作山，刘钦胜，孙梅心，江忠萍

(山东省化学农药重点实验室 山东省农药科学研究院，山东 济南 250100)

反,反-2, 4-己二烯乙酸酯高效液相色谱分析方法研究

王滢秀，李金涛，张作山，刘钦胜，孙梅心，江忠萍*

(山东省化学农药重点实验室 山东省农药科学研究院，山东 济南 250100)

建立了一种用高效液相色谱测定反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的定量分析方法。采用WondaSil C18色谱柱，以甲醇-磷酸水溶液(体积比为80:20)为流动相，流量为0.8 mL/min，柱温为25 ℃，选择220 nm为检测波长进行检测。结果表明，该分析方法的线性相关系数为0.9991，标准偏差为0.0019，平均回收率为99.04 %。该方法快速、简便、灵敏度高、定量准确、结果稳定。

反,反-2,4-己二烯乙酸酯；高效液相色谱；分析

反,反-2, 4-己二烯乙酸酯英文名称：trans, trans-2,4-Hexadienyl acetate，CAS号：1516-17-2，分子式：C8H12O2，中文别名：反,反-2, 4-己二烯醛醋酸酯。反,反-2, 4-己二烯乙酸酯是人工合成苹果蠹蛾性信息素反,反-8, 10-十二碳二烯-1-醇的重要中间体[1-2]，也是人工合成大豆食心虫性信息素反,反-8, 10-十二碳二烯-1-醇乙酸酯的重要中间体[3]，同时也是其他杀虫剂和活性物质的关键中间体[4]。

反,反-2, 4-己二烯乙酸酯结构式

目前，尚未见公开报道有关反,反-2, 4-己二烯乙酸酯含量的分析方法。本文建立了利用高效液相色谱法(HPLC)，对反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的定量分析方法，填补相关检测空白。实验结果表明该方法具有操作简便、快速、准确，分离效果好，稳定性好等优点，而且精密度和准确度均能达到定量分析的要求，可以作为企业生产过程质量控制和质检机构质量检测的参考方法。

1 试验部分

1.1 试剂和溶液

甲醇：色谱纯；磷酸：分析纯；水：二次蒸馏水；磷酸水溶液：V(H2O) : V (H3PO4) = 1000:1；反,反-2,4-己二烯乙酸酯标样：97.0% (购于Alfa Aesar)；反,反-2, 4-己二烯乙酸酯试样(本实验室提供)。

1.2 仪器

高效液相色谱仪：岛津LC-20AT，具有紫外检测器；岛津LC solution色谱工作站；色谱柱：WondaSil C18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)。

1.3 液相色谱操作条件

流动相：V (甲醇) : V (磷酸水溶液) = 80:20；流量：0.8 mL/min；检测波长：220 nm；柱温：25 ℃；进样体积：5 μL；反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的保留时间约6.9 min。以上选用的高效液相色谱操作条件为典型操作参数，实验者可根据不同仪器特点，对以上操作参数作适当调整以期获得最佳结果。如图所示为典型的反,反-2, 4-己二烯乙酸酯标样和试样的高效液相色谱图(图1、2)。

图1 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯标样色谱图

图2 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯试样色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯标样溶液的配制

准确称取反,反-2, 4-己二烯乙酸酯标样0.02 g (精确至0.0001)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，静置备用。

1.4.2 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯试样溶液的配制

准确称取反,反-2, 4-己二烯乙酸酯试样0.02 g (精确至0.0001) ，置于100 mL容量瓶中， 用甲醇超声溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，静置备用。

1.4.3 测定步骤

在以上操作条件下，待基线稳定后，连续进入数针反,反-2, 4-己二烯乙酸酯标样溶液，直至相邻两针标样溶液的响应值相对变化<1.0%，而后按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.4 结果计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯峰面积分别进行平均。试样中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的质量分数ω (%)，按式(1)计算：

(1)

式中：A1——标样溶液中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯峰面积的平均值；

A2——试样溶液中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯峰面积的平均值；

m1——标样的质量，g；

m2——试样的质量，g；

P——标样中反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的质量分数，%。

2 测定结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

检测波长的选择：利用岛津高效液相色谱仪中的全波长扫描功能，得到反,反-2, 4-己二烯乙酸酯在190 nm～370 nm范围内的紫外波长扫描图(图3)。如图所示反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的最大吸收波长在226 nm附近。鉴于此处溶剂干扰较小，故选用220 nm作为检测波长。

图3 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯

流动相的选择：根据反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的理化性质，我们选择常用的C18色谱柱，甲醇作为样品溶剂，甲醇和水溶液作为混合流动相，为了达到更好的分离效果和样品峰形，在1 L水中加入1 mL磷酸。通过混合不同比例的流动相在色谱柱上进行试验，确定流动相为V (甲醇) : V (磷酸水溶液) = 80 : 20，流速为0.8 mL/min时，样品与杂质分离效果好，基线平稳，样品色谱峰形对称。如图1、图2所示，样品分析时间较短，12 min左右即可完成检测，有效提高了工作效率。

2.2 分析方法的线性相关性测定

准确称取五个不同质量的标样，分别置于100 mL容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷至室温后稀释至刻度，摇匀。在上述色谱操作条件下进行测定，绘制标准曲线(表1、图4)。图中横坐标为标样的质量，纵坐标为峰面积，得到线性方程为y=5.8035×108x+148472，其线性相关系数为0.9991。结果表明在测试范围内线性关系良好。

表1 分析方法的线性相关性试验结果

2.3 分析方法的精密度测定

在同一样品中准确称取五个试样，在上述所选色谱操作条件下进行测定。分析结果表明该方法测得反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的标准偏差为0.0019，变异系数为0.19% (表2)。

图4 反,反-2, 4-己二烯乙酸酯线性相关性图

编号12345平均值/%标准偏差变异系数/%反，反-2，4-己二烯乙酸酯质量分数/%97．5497．7697．7497．3097．5397．570．00190．19

2.4 分析方法的准确度测定

准确称取五个一定量的试样(已知质量分数)，再分别准确加入一定量的反,反-2, 4-己二烯乙酸酯标样。 而后在上述选用的色谱操作条件下进行HPLC测定，测得反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的平均回收率为99.04% ,见表3。

表3 分析方法的准确度试验结果

3 结论

本文建立了一种利用高效液相色谱法测定反,反-2, 4-己二烯乙酸酯的定量分析方法。采用WondaSil C18色谱柱，0.8 mL/min的流速，以V (甲醇) : V (磷酸水溶液) = 80 : 20为流动相，25 ℃柱温， 220 nm波长进行检测。试验结果显示该方法的线性相关系数为0.9991，标准偏差为0.0019，平均回收率为99.04%。综上所述，该分析方法准确度高、精密度高、具有良好的线性关系，具有简便、快速、准确的特点，是反,反-2, 4-己二烯乙酸酯质量控制和应用研究中切实可行、较为理想的分析方法。

[1] Wendell R, André C, Ada H, et al. Sex attractant of the codling moth: characterization with electroantennogram technique[J]. Science, 1971, 174: 297-299．

[2] 张 涛,蔡崇林,冯俊涛,等.苹果蠹蛾性信息素的合成及活性测试[J].农药，2011, 50 (8): 561-563.

[3] 胡代花，杨晓伟，冯俊涛， 等.大豆食心虫性信息素的研究及应用进展[J].农药学学报，2014, 16 (3): 235-244.

[4] 刘红梅,姜笑寒,丛振娜. 反,反-2, 4-己二烯醛醋酸酯的合成[J]. 广州化工, 2012, 40 (2): 93-94.

DeterminationofTrans,Trans-2, 4-HexadienylAcetatebyHPLC

WangYingxiu,LiJintao,ZhangZuoshan,LiuQinsheng,ShunMeixin,JiangZhongping*

(Shandong Province Key Laboratory of Chemical Pesticide, Shandong Academy of Pesticide Sciences,Jinan 250100, China)

A method of HPLC was developed for the quantitative determination of trans, trans-2, 4-Hexadienyl acetate. The mobile phase was a 80:20 mixture of methanol and phosphoric acid aqueous solution, flow rate was 0.8 mL/min, and a WondaSil C18 chromatographic column was used with column temperature at 25℃ and the detection wave length was 220 nm. The results showed that the linear correlation coefficient was 0.9991, the standard deviation was 0.0019 and the average recovery was 99.04%. The method is found to be rapid, simple, high sensitivity, accurate quantitative, and the results are stable.

trans；trans-2, 4-Hexadienyl acetate;HPLC;analysis

2017-09-21

山东省农业科学院科技创新工程(CXGC2016B12)，2016年山东省农业重大应用技术创新项目

王滢秀(1986—)，女，山东泰安人，工程师，硕士，主要从事农药分析工作；通讯作者：江忠萍(1982—)，江西吉安人，高级工程师，博士，主要从事农药、化工合成和分析，昆虫信息素制备及应用推广研究。

O657.7+2

A

1008-021X(2017)22-0066-03

(本文文献格式：王滢秀，李金涛，张作山，等.反,反-2, 4-己二烯乙酸酯高效液相色谱分析方法研究[J].山东化工，2017，46(22)：66-68.)