IgA肾病尿巨噬细胞及自然杀伤细胞检测的临床意义〔1〕

朱国贞，王利华，齐悦，赵彦

(山西医科大学第二医院，太原 山西 030001)

论 著

IgA肾病尿巨噬细胞及自然杀伤细胞检测的临床意义〔1〕

朱国贞，王利华，齐悦，赵彦

(山西医科大学第二医院，太原 山西 030001)

目的：研究尿巨噬细胞、自然杀伤细胞含量与IgA肾病(IgAN)患者肾功能损伤程度的关系。方法：用流式细胞仪(FCM)联合检测36 例IgAN患者尿巨噬细胞及自然杀伤细胞含量，并依据肾小球滤过率将患者分为肾功能损伤组和肾功能正常组。结果：肾功能损伤组尿巨噬细胞含量明显高于肾功能正常组(P<0.05)。肾功能损伤组尿自然杀伤细胞含量明显低于肾功能正常组(P<0.05)。结论：联合检测尿巨噬细胞及自然杀伤细胞含量可作为协助判断IgAN肾功能损伤的指标之一。

巨噬细胞；自然杀伤细胞；流式细胞术；IgA肾病

过去多数学者一直认为IgA肾病(IgAN)是一种预后良好的疾病，随着对该病的不断研究，发现IgA肾病是一种进展性疾病，只有5%～30%的IgA肾病患者能完全缓解，而大多数患者呈慢性进行性发展。近几年一些预测IgA肾病进展的新标志物不断被报告，如CD34、CD54、血管细胞黏附分子-1、血管紧张素Ⅱ受体、血小板源性生长因子、白介素-1、白介素-6、白介素-10、肿瘤坏死因子(TNF-α)、单核细胞趋化因子(MCP-1)等[1-3]。但关于联合检测尿巨噬细胞及自然杀伤细胞细胞方面的研究少有报道。本文利用流式细胞仪(FCM)联合检测我院2016年12月—2017年6月IgA肾病患者尿液中巨噬细胞及自然杀伤细胞的含量，初步探讨IgA肾病患者尿巨噬细胞以及自然杀伤细胞与肾功能损伤的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2016年12月—2017年6月所有经肾活组织检查证实的IgA肾病(免疫荧光表现为以IgA为主的免疫球蛋白在肾小球系膜区沉积)患者36 例。其中，男16 例，女20 例，年龄(30±6) 岁。

1.2 肾功能分组

36 例患者于肾穿前留取血液标本，检测血清肌酐水平，依据Cockcroft-Gault计算出患者肾小球滤过率(GFR)，并按照GFR水平将患者分为肾功能正常组(GFR>90 mL/min)和肾功能损伤组(GFR<90 mL/min)，其中肾功能正常组20 例，肾功能损伤组16 例。

1.3 尿细胞检测

1.3.1 试剂和仪器

CD68-FITC及CD56-PE(法国Immunotech公司)，Beckman Coulter FC500流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)。

1.3.2 尿巨噬细胞检测方法

在患者进行肾活组织检查前留取新鲜晨尿标本100 mL，1 500 r/min离心5 min，沉渣用pH7.0磷酸盐生理盐水(PBS)前后洗涤并离心3次，弃去上清液后获得悬浮细胞，并调整细胞数为1×106，分别加入CD68-FITC及同型对照后避光孵育，然后流式细胞仪检测，用前向(FSC)-侧向(SSC)设门，CXP32软件分析检测试管中的CD68+细胞含量，以百分比表示。

1.3.3 尿自然杀伤细胞检测方法

尿标本留取及离心、洗涤方法同上，分别加入CD56-PE及同型对照后避光孵育，然后用流式细胞仪检测，利用前向散射光(FSC)观察细胞大小，侧向散射光(SSC)观察细胞颗粒度，CXP32软件分析检测试管中的CD56+细胞含量，以百分比表示。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 两组尿液中巨噬细胞含量比较

肾功能损伤组尿液中巨噬细胞含量[(23.6±3.2)%]明显高于肾功能正常组[(11.8±2.4)%]，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 两组尿液中自然杀伤细胞含量比较

肾功能损伤组尿液中自然杀伤细胞的含量[(15.5±2.8)%]明显低于肾功能正常组[(21.7±3.1)%]，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

IgA肾病是我国最常见的原发性肾小球疾病，约占原发性肾小球疾病的三分之一。免疫荧光显示：以IgA为主呈颗粒样或团块样在肾小球系膜区分布，故可以认为它是一种自身免疫性肾病。那么，究竟IgA肾病病情轻重及预后与参与免疫反应的细胞之间有无相关性？联合检测尿中巨噬细胞及自然杀伤细胞含量能否协助早期判断该病的预后？带着这样的疑问，我们利用流式细胞仪联合检测IgA肾病患者尿液中巨噬细胞及自然杀伤细胞的含量，并根据临床肾功能指标(血肌酐、GFR值)将被研究的IgA肾病患者分为肾功能正常及损伤组。最终我们观察到IgA肾病患者肾功能损伤组尿液中巨噬细胞含量明显高于肾功能正常组(P<0.05)。推测IgA肾病患者尿液巨噬细胞含量可协助反映肾脏功能损伤程度。肾小管萎缩和间质纤维化被认为是IgA肾病进展至终末期肾病的重要因素和主要病理学特征[4]。研究发现：随着IgA肾病患者肾间质巨噬细胞浸润的加重，肾间质纤维化程度亦明显加重，进而导致肾小球滤过率下降[5]。有研究证实，巨噬细胞本身可以通过释放大量的基质降解酶抑制剂、转化生长因子-β(TGF-β)以及激活肌成纤维细胞等多种途径促进肾小球硬化及肾间质纤维化，进一步影响肾小球及肾小管间质细胞的功能，从而进展为终末期肾衰竭[6-7]。结合本实验结果，推测巨噬细胞可能通过促肾脏纤维化导致肾小球滤过功能下降，加剧肾脏损伤。

自然杀伤细胞在机体免疫监视过程中发挥重要作用，CD56是自然杀伤细胞的标志物。本研究检测到肾功能损伤组尿自然杀伤细胞含量明显低于肾功能正常组(P<0.05)。我们推测IgA肾病患者自然杀伤细胞的水平下降，其抑制B淋巴细胞增殖、分化的作用减弱，导致多克隆B细胞活化，引起免疫球蛋白的分泌增加，由此异常的免疫复合物沉积在肾小球引起病变[8]，并影响肾小球滤过功能，但具体机制有待进一步研究证实。

本研究不仅探讨了尿巨噬细胞及自然杀伤细胞含量检测在IgA肾病中的临床价值，而且对巨噬细胞、自然杀伤细胞与IgA肾病之间的病理生理关系提出新的研究方向。

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2017-06-06

(本文编辑：王作利)

TheClinicalsignificanceintestingurinarymacrophagesandnaturalkillercellsinpatientswithIgAnephropathybyflowcytometry

ZHU Guozhen，WANG Lihua，QI Yue，ZHAO Yan

(The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China)

Objective：To find the correlation among urinary macrophages and natural killer cells and and degree of renal injury in patients with IgA nephropathy(IgAN).Methods：The content of urinary macrophages and macrophages natural killer cells from 36 patients with IgAN was measured by flowcytometry.All the patients were grouped according to the degree of renal injury.Results：Urinary macrophage contents in IgAN with renal injury were significantly higher than those in normal renal function group (P<0.05).Meanwhile，urinary natural killer cells contents in IgAN with renal injury were significantly lower than those in normal renal function group (P<0.05).Conclusion：Testing urinary macrophages and natural killer cells by flowcytometry may provide useful information for evaluating the degree of renal injury in IgAN.

macrophages；natural killer cells；flowcytometry；IgA Nephropathy

R692

A

1671-8631(2017)12-0883-03

〔1〕本课题为山西省国际科技合作项目(项目编号：2015081036)

朱国贞(1974— )，女，河北省迁西县人，博士学位，副主任医师，主要从事肾内科工作。