不同级别的厚朴饮片GC指纹图谱对比研究

谭淏雯，许腊英

·炮制制剂·

不同级别的厚朴饮片GC指纹图谱对比研究

谭淏雯1，许腊英2*

目的：比较不同级别的厚朴饮片气相指纹图谱, 以相似度为评价指标， 探索不同级别的厚朴饮片的GC指纹图谱的区别。方法：将厚朴按不同质地、厚度分为三个级别：质地大于0.60 g/cm3、厚度4～6 mm以上的为优级，质地接近0.60 g/cm3、厚度2～4 mm以上的为一级，质地小于0.60 g/cm3、厚度2 mm以下的为统货。 用气相色谱法分别对不同质地、厚度的各4批次湖北恩施GAP示范基地的厚朴进行分析, 建立厚朴GC指纹图谱共有模式，比较其区别。结果：经比较发现,不同质地、厚度的厚朴共有模式之间相似度差别明显，表明各级别之间有特征性。结论：此方法灵敏度高、重现性好，可以直接区分各级别厚朴，为厚朴饮片分级方法提供参考依据。

厚朴饮片；GC指纹图谱；质地；厚度

本项目研究的厚朴为木兰科植物厚朴(Magnolia officinalisRehd. et Wils.)的干燥干皮、根皮及枝皮[1]。道地产区为四川、湖北等省。能行气化湿、健脾和胃，临床上用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳等症。厚朴中的挥发油是其主要药效成分之一,其中主要含B-桉油醇[2-3],含量＞95%。经现代药理实验研究证明,厚朴挥发油能引起胃液、唾液分泌,加快肠胃蠕动,有健胃作用等药理活性[4-9]。有关厚朴成分研究的文献很多，但大多都是关于不同产地厚朴饮片指纹图谱区别的研究[10-16]，对不同质地、厚度的厚朴饮片GC指纹图谱的研究几乎没有。本文通过对不同质地、厚度的厚朴饮片,以β桉油醇为指标，研究其GC指纹图谱，来寻找质地、厚度与厚朴分级的关联。

1 仪器、试剂与药材来源

1.1 仪器与试剂

SHIMAD2UGC -14C气相色谱仪, HP -5色谱柱(30 m*0.32 mm*0.25 um)。BP -211D型十万分之一分析天平(西德Sartorius产)。所用试剂均为分析纯;

β-桉油醇 对照品由中国生物制品检验检定所提供，批号：11002-201105。

1.2 药材

实验用厚朴药材购于湖北省恩施GAP示范基地,经湖北中医药大学鉴定教研室张林碧教授鉴定为木兰科植物厚朴(Magnolia of fi cinalis Rehd. etW ils)的干燥树皮、根皮和枝皮。

根据厚朴药材的不同质地和厚度，将厚朴药材分为三个级别：质地大于0.60 g.cm-3、厚度4～6 mm以上的为优级，质地接近0.60 g.cm-3、厚度2～4 mm以上的为一级，质地小于0.60 g.cm-3、厚度2 mm以下的为统货。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱∶ HP -5柱(30 m*0.32 mm*0.25 um); 柱前压：50 kpa,柱流速：1.743 ml*min-1,分流比40：1，尾吹5圈，气化室温度：250 ℃，检测器：280 ℃。程序升温：起始温度50 ℃（2 min）以6 ℃*mim-1升至116 ℃（2 min），再以1 ℃*min-1升至118 ℃（2 min）,再以10 ℃*min-1升至220 ℃（15 min）[6-8]。

2.2 样品溶液的制备

称取厚朴粉末各约50 g,按《中华人民共和国药典》2015年版四部通则2204挥发油测定方法,加300 mL纯化水浸泡30 min,自挥发油测定器上端加纯化水至溢入烧瓶中止，加正己烷2 mL,加热到沸并保持微沸5 h,停止加热1 h后分取正己烷液,得厚朴样品溶液备用。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取0.3 mg的β桉油醇对照品溶于25 mL正已烷溶剂中，摇均备用。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验 取同一供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，连续进样5次，将数据导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A版)，设定匹配模板，将谱峰自动匹配，生成对照，然后进行谱峰差异性评价和整体相似性评价，考察色谱峰相似度的一致性，结果其主要共有峰面积RSD＜2%，表明仪器精密度良好。结果见图1，表1。

表1 厚朴饮片气相指纹图谱精密度试验相似度分析结果

50.99980.9995 0.9996 0.9998 1.0000 0.9998对照0.9997 0.9997 0.9998 0.9999 0.9998 1.0000

图1 厚朴饮片谱精密度试验GC图

2.4.2 稳定性试验 取同一供试品溶液，在室温下放置，分别在0、2、4、8、12 h进行测定，将数据导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A版)，设定匹配模板，将谱峰自动匹配，生成对照，然后进行谱峰差异性评价和整体相似性评价，考察色谱峰相似度的一致性，结果其主要共有峰面积RSD＜2%，表明供试品溶液在12 h内稳定，结果见图2，表2。

表2 厚朴饮片气相指纹图谱稳定性试验相似度分析结果

图2 厚朴饮片稳定性试验GC图

2.4.3 重现性试验 取同一供试品，平行5份，按供试品溶液制备方法制备，按2.1项下色谱条件测定，将数据导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A版)，设定匹配模板，将谱峰自动匹配，生成对照，然后进行谱峰差异性评价和整体相似性评价，考察色谱峰相似度的一致性，结果其主要共有峰面积RSD＜2%表明试验方法重现性较好，结果见图3，表3。

表3 厚朴饮片气相指纹图谱重现性试验相似度分析结果表

50.9990 0.99850.9989 0.9980 1.0000 0.9995对照0.9993 0.9989 0.9993 0.9989 0.9995 1.0000

图3 厚朴饮片GC指纹图谱重现性试验色谱图

2.5 测定法

分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，在上述色谱条件下测定，记录色谱图，即得。

2.5.1 厚朴GC指纹图谱和共有峰的建立 分别取不同厚度、质地的厚朴各10个供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定。记录各样品色谱图。所有组分在45 min内洗脱出柱，共计出峰数71个，其中共有峰数目为34个见图4，经比较从中选定15个共有峰作为构成厚朴指纹图谱的稳定的特征峰。

图4 厚朴饮片气相指纹图谱

共有峰定性 通过比较样品与对照品出峰保留时间及结合文献研究确认， 21号峰为α -丁香烯，22号峰为γ-杜松烯，23号峰为α一芹子烯，24号峰为γ-芹子烯，27号峰为丁香烯氧化物，29号峰为茅苍术醇，30号峰为β-桉醇，32号峰为均三异丙苯。见图5、图6、表4。

图5 β-桉醇GC对照品图谱

图6 厚朴干皮挥发油总离子流图

表4 厚朴干皮挥发油总离子流数据

2.5.2 共有模式的生成及相似度的计算 将图谱导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A版)进行数据，设定时间窗宽度为0.5 min，以中位数法生成对照指纹图谱，建立共有模式（即对照图谱），各样品与该共有模式比较，结果见图7、表5。

图7 各级别共有模式相似度及叠加图

表5 相似度结果

2.5.3 结果 根据厚朴药材的三个级别（ 优级 → 一级 → 统货）分别分析GC共有模式图谱峰：

a组峰：A3-A4的峰面积比值0.5、0.6、0.8，呈逐渐增大趋势。

b组峰：A6-A7-A8的峰面积比值（14：7：100）、（20：20∶100）、（14：16：100），6.7号峰峰面积比值逐渐减小趋势2→1→(＜1)。

c组峰：A11-A12-A13-A14的峰面积比值（0.7：1.4：3.7：1）、（1.5：1.8：5.5：1）、（3：3.5：5：1）内部比例不同，峰形不同。

d组峰：A15-A17的峰面积比值3、2、1.5 呈逐渐减小趋势。

3 讨论

分析三种级别的厚朴药材的GC共有模式，各级别共有模式34个峰，将优级厚朴前15个强峰作为特征峰，其他级别相应的这15个峰作为分子，各共有模式34个峰面积总和作为分母算得面积的比值，数据等级明显，符合等级分级标准。

三种等级的共有模式之间的相似度很差，区别明显，表明各级别之间各具有特征性，可以直接区分各级别厚朴饮片。

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Comparative study on GC fingerprints of Houpo of different levels

/TAN Hao-wen1, XU La-ying2/ / (1. NO.1 Middle School Affiliated to Central China Normal University, Wuhan 430223, Hubei; 2. Pharmacy School, Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065, Hubei)

Objective:The GC fingerprints of Houpo of different levels were compared. Similarity was used as the evaluation index to explore the difference of different levels of Houpo GC fingerprints.Method:According to different texture and thickness,Houpo was divided into three levels∶ premium class with the texture greater than 0.60 g/cm3and thickness larger than 4 ～ 6mm;first class with texture close to 0.60 g/cm3and thickness of 2 ～ 4mm; fair average quality with texture less than 0.60 g/cm3, and thickness less than 2 mm. GC was applied to analyze four batches Houpo of different textures and thickness from Enshi GAP demonstration base. And the common pattern of GC fingerprints of Houpo was established to compare the difference among them.Result:The similarity of Houpo GC common pattern of different texture and thickness had significant difference which indicated that the different characteristic of Houpo existed among different levels.Conclusion:The sensitivity of this method is high and reproducibility is good. It can directly distinguish the different levels of Houpo, and can provide reference for Houpo classification method.

Houpo; GC fingerprint; texture; thickness

R283.1

A

1674-926X(2017)06-007-04

国家中医药管理局中医药行业科研专项基金（201007012-2）

1.华中师范大学第一附属中学，武汉，湖北，武汉430223；2.湖北中医药大学药学院，武汉，湖北，武汉 430065

谭淏雯，（2000- ），女，学生。Tel∶13986249486 Email∶450208495@qq.com

许腊英，（1952- ），女，教授，主要从事中药饮片标准化研究工作。Tel∶18971211681 Email∶xulaying@163.com

2017-3-3

(责任编辑：傅舒)