香菇多糖对脓毒症小鼠急性肾损伤的影响

杨舒楠 肖 芳 玄春月 王晓群 刘庆阳 徐凯智

华北理工大学研究生学院 河北唐山 063000；①保定市妇幼保健院;②煤炭总医院;③唐山工人医院

香菇多糖对脓毒症小鼠急性肾损伤的影响

杨舒楠 肖 芳①玄春月 王晓群③刘庆阳②徐凯智③

华北理工大学研究生学院 河北唐山 063000；①保定市妇幼保健院;②煤炭总医院;③唐山工人医院

①目的 探讨香菇多糖对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用。②方法 将90只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(假手术组)、模型组和香菇多糖组，每组30只。模型组与香菇多糖组采用盲肠结扎穿孔法建立小鼠脓毒症模型，对照组除不结扎和穿刺盲肠外，其余操作同模型组；香菇多糖组术后给予香菇多糖腹腔注射。各组分别在术后6、12、24小时各取10只小鼠，监测血清肌酐、尿素氮水平。用流式细胞仪监测术后24小时肾脏细胞的增殖与凋亡情况。 ③结果 模型组小鼠血清肌酐在术后6小时明显高于对照组和香菇多糖组，差异有统计学意义(P<0.05)；12、24小时则无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。模型组小鼠尿素氮在术后6、12、24小时均明显高于对照组和香菇多糖组，差异有统计学意义(P<0.05)。香菇多糖组肾脏细胞凋亡低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05) 。④结论 香菇多糖对脓毒症小鼠急性肾损伤具有一定的保护作用。

香菇多糖 脓毒症 急性肾损伤

脓毒症是伴随感染而出现的全身炎症反应综合征( systemic innammatory response syndrome，SIRS)，常继发于严重感染、烧伤、创伤及大手术后，进一步发展可引起多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)，甚至危及生命[1～3]。肾脏是最易且较早发生损伤的重要脏器之一，如不及时干预，则导致其他器官序贯性损害。脓毒症患者中约42%发生急性肾损伤，而急性肾损伤是脓毒症的独立死亡因素，脓毒症患者发生急性肾损伤后的死亡率高达70%[4]。脓毒症导致的急性肾损伤是危重病医学和肾脏病学急需解决的难题之一。脓毒症后出现的肾血流动力学改变、内毒素诱发炎症、肾小管细胞凋亡和肾小球内微血栓形成等一系列变化都是导致急性肾损伤的危险因素[5]。香菇多糖是一种中药提取物，有研究表明香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用[6～8]。本研究旨在探讨香菇多糖在脓毒症小鼠急性肾损伤模型中对肾脏组织细胞的保护作用。

1 材料与方法

1.1主要药品与试剂 香菇多糖购自北京索莱宝科技有限公司，肌酐和尿素氮的ELISA试剂盒购买自浙江爱康生物科技有限公司，10%戊巴比妥钠注射液、PBS缓冲液购自上海拜力生物科技有限公司。

1.2动物分组与建模

1.2.1动物分组 健康C57BL/6小鼠90只，平均体质量为(20±2)g，由北京动物实验中心提供。动物证号：SCXK(京)2014-0004。将其随机分为对照组(假手术组)、模型组和香菇多糖组，每组30只；每组再随机分为三个亚组：6、12、24小时组，各10只。

1.2.2动物建模 采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。模型组与香菇多糖组小鼠术前在标准饲养条件下适应1周,腹腔内注射10%戊巴比妥钠溶液2～3mL麻醉，腹壁正中切开2cm，拉出盲肠后在盲肠总长度2/3处结扎，用国产16号针头在结扎线下5mm处贯穿盲肠4次后，挤压盲肠内容物外漏，形成盲肠漏，然后回纳盲肠并关腹。术后即刻腹腔注射0.9%氯化钠注射液1mL 。对照组除不结扎和穿刺盲肠外，其余操作同模型组。香菇多糖组在术后1小时腹腔回输香菇多糖80mg/kg。

1.3检测指标

1.3.1肾组织细胞凋亡的测定 取肾组织用200目滤网研磨，加PBS冲洗，收集肾组织细胞离心5分钟，2000r/min。除去上清液后的肾组织细胞加PBS液，加入7-AAD，用流式细胞仪测其凋亡情况。

1.3.2肌酐、尿素氮的测定 将小鼠眼球取血，静置30分钟，取其上清，按试剂盒的要求检测肌酐和尿素氮。

2 结果

2.1流式细胞仪检测肾组织细胞凋亡 与对照组比较，模型组小鼠肾组织细胞凋亡率在各时间点均显著升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较,香菇多糖组肾组织细胞凋亡率显著降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；而对照组与香菇多糖组比较,肾组织细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05), 见表1。

2.2血清肌酐的测定 术后6小时，模型组小鼠血清肌酐值明显高于对照组和香菇多糖组，差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组和香菇多糖组比较则差异无统计学意义(P>0.05)。术后12、24小时，三组之间相互比较，血清肌酐值差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3血清尿素氮的测定 术后6、12、24小时，模型组小鼠血清尿素氮值明显高于对照组和香菇多糖组，差异有统计学意义(P<0.05)；对照组和香菇多糖组之间差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表1 各组小鼠术后肾脏细胞凋亡率的测定情况

注：与对照组、香菇多糖组比较，*P<0.05

表2 各组小鼠术后血清肌酐的测定情况

注：与对照组、香菇多糖组比较，*P<0.05

表3 各组小鼠术后血清尿素氮的测定情况

注：与对照组、香菇多糖组比较，*P<0.05

3 讨论

脓毒症是伴随感染的全身炎症反应综合征，但是脓毒症并不是指感染本身，而是由感染引起的机体的免疫反应过程，指全身炎症反应与抗炎反应失衡的状态[9,10]。 严重的脓毒症患者往往死于多器官功能衰竭，而肾脏是较早发生损坏的器官，因此肾脏的保护尤为重要。本实验采用盲肠结扎穿孔法来制备小鼠的脓毒症急性肾损伤模型，这是目前公认的实验小鼠的脓毒症模型[11～13]。本实验采用6、12、24小时作为观察点来观察模型组、香菇多糖组和对照组之间各项肾功能指标是否有差异，为临床应用提供理论依据。

肌酐和尿素氮水平是监测肾功能最常用的指标[14,15]。肌酐由肾小球滤过排出体外，肾小管对肌酐重吸收少。尿素氮是人体蛋白质代谢主要终末产物，正常情况下，尿素氮在肾小球至各段小管均可被重吸收[16]。从表1中可以看出，在术后24小时取肾组织细胞观察其凋亡率情况，香菇多糖组和对照组比较差异无统计学意义，而两组和模型组比较均有显著性差异，说明脓毒症小鼠经过香菇多糖处理后其肾脏细胞凋亡率明显下降，并使其不会快速凋亡，充分说明香菇多糖对脓毒症损伤的肾组织细胞具有一定的保护作用。 从表2中可以看出，模型组小鼠血清肌酐在术后6小时明显升高，高于对照组和香菇多糖组，而后下降，与其他两组无显著差异，说明香菇多糖可以保护肾组织细胞，使其肌酐水平不会一过性的升高。从表3可以看出，模型组小鼠血清尿素氮在6、12、24小时均明显高于对照组和香菇多糖组，而对照组与香菇多糖组之间差异无统计学意义，说明香菇多糖可以保护脓毒症小鼠的肾功能，使其尿素氮水平不会显著升高。

综上所述，脓毒症小鼠在运用香菇多糖治疗后，其肾脏功能和肾组织细胞凋亡情况得以改善，说明香菇多糖对脓毒症小鼠急性肾损伤具有一定保护作用。

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(2017-03-02 收稿)(张爱国 编辑)

Protectiveeffectoflentinanonsepsisinmicewithacutekidneyinjury

YANGShunan,XIAOFang,XUANChunyue,etal

(GraduateSchool,NorthChinaUniversityofScienceandTechnology,Tangshan063000,China)

ObjectiveTo explore protective effect of lentinan on sepsis in mice with acute kidney injury.MethodsA total of 90 C57 mice were randomly divided into three groups:the sham group,the CLP group and the Lentinan group,30 in each.The models of C57 mice induced by sepsis were established by cecum ligation and perforation,mice in the Len group were intraperitoneal injection of lentinan after the CLP models established.Detection of serum concerntration of creatinine and urea nitrogen of 10 mice in each group were conducted at 6,12 and 24 hours after operation.Using a flow cytometry instrument observed the renal cell proliferation and apoptosis at 24 hours after operation.ResultsThe level of creatinine in CLP group significantly higher than the sham group and the Len group(P<0.05) at 6 hours after operation,however,the data had no significant difference between the three groups(P>0.05) at 12 and 24 hours after operation.The level of urea nitrogen in CLP group obviously higher than the sham group and the Len group(P<0.05) at the three time points.The apoptosis of renal cell in the Len group lightly than the CLP group(P<0.05).ConclusionLentinan has a protective effect on sepsis in mice with acute kidney injury.

Lentinan. Sepsis. Acute kidney injury

R 96，364.5, 969.3

A

2095-2694(2017)06-443-04

国家自然科学基金(项目编号：81272140, 81000847);中国博士后面上项目(编号：201150M1530)。

杨舒楠(1991-)，女，硕士研究生。研究方向：脓毒症的基础与临床研究。

刘庆阳，徐凯智。