泥土污染胶带上脱落细胞DNA检验1例

季炳均，陈馨扬

（南平市公安局刑侦支队，福建 南平 353000）

泥土污染胶带上脱落细胞DNA检验1例

季炳均，陈馨扬

（南平市公安局刑侦支队，福建 南平 353000）

法医物证学；DNA污染；胶带；脱落细胞

1 案 例

1.1 简要案情

某年2月春节期间，某县夜间连续发生多起抢劫停在偏僻路段轿车内青年男女的案件。嫌疑人蒙面持刀、戴手套将车内人员挟持到山上，用胶带捆绑在山上逼问受害人的银行卡密码。现场勘验中仅提取到一段被雨水淋湿且附着大量黄泥土的胶带（图1），为侦破案件，对胶带进行DNA提取、分型。

图1 现场勘验中提取的胶带

1.2 检材处理

胶带长28cm、宽3.5cm，室内晾干后用软毛刷弹去胶带表面的泥土，分离找到端部的单层胶带，寻找留有手印纹线的端部并剪取两块面积各为1.0 cm×1.0cm的胶带，分别标记为检材1、检材2。

1.3 DNA检验

DNA提取：参照GA/T 383—2014《法庭科学DNA实验室检验规范》，用5%Chelex-100提取胶带检材1的模板DNA，并用Microcon-100浓缩过柱。用MagAttract DNA Mini M48试剂盒（德国QIAGEN公司）提取胶带检材2的模板DNA。取1.0cm×1.0cm检材剪碎放入1.5mL离心管中，加入190μL裂解液（G2 buffer）、10μL QIAGEN 蛋白酶 K，旋涡振荡 10s。56℃孵育1 h，孵育过程中，取出振荡多次。以离心半径10cm，1 000 r/min，离心 5 min，转移 200 μL 上清液到1.5mL离心管中。在离心管中加入3倍体积的吸附液（MTL缓冲液），摇匀磁珠，加入30μL磁珠，充分混匀溶液，吸附15min（约每2min摇匀一次）。混匀后将离心管放在磁力架上，使磁力架和样品颠倒2～3次，吸出溶液，加入 500 μL的漂洗液（MW1缓冲液），摇匀样品溶液，在磁力架上吸出溶液。加入500μL 80%的乙醇溶液，摇匀样品溶液，放在磁力架上，使磁力架和样品颠倒2～3次，吸出溶液；重复上一步骤两次，使洗涤次数达到3次，最后一遍洗涤后去除所有的洗涤液。将离心管置于磁力架上，打开管盖，放入65℃金属浴中烘干（5min）。加入30μL去离子水65℃加热10min，期间振荡2～3次。从金属浴上取下离心管，高速漩涡振荡2s。迅速将其置于磁力架上；在磁力架上吸出溶液即得到所需的DNA。

扩增及检测：用 AmpFℓSTR®Identifiler®Plus试剂盒（美国AB公司）在9700型PCR仪（美国AB公司）上进行扩增，采用10 μL体系扩增，模板DNA为1.0 μL，扩增产物在3130xl型基因分析仪（美国 AB公司）上进行电泳分析。

1.4 检验结果

采用Chelex-100法在胶带检材1中未检出DNA分型。采用MagAttract DNA Mini M48试剂盒成功提取到胶带检材2中DNA分型，将该分型结果导入本地DNA数据库并上报到国家库进行查询比对，比中上海市公安局DNA数据库中前科人员饶某，16个基因座无容差（图2）。

图2 胶带检材2上的DNA分型图谱

2 讨 论

本案中，检材为一段遗留在现场已较长时间的包装用透明胶带，被雨水淋湿且有泥土污染，检材条件较差，检验有一定的难度，能在胶带上成功检出嫌疑人脱落细胞DNA分型主要有以下原因。

（1）成功找到嫌疑人手撕胶带的端部。现场提取的捆绑受害人胶带一般只有一端是嫌疑人用手撕开的，另一端一般是用工具剪断。捆绑受害人的时候，为了便于找到胶带的起点进而撕开胶带，胶带使用者一般会脱掉手套。由于胶带有较大的黏性，徒手撕开胶带时极易在端部留下使用者的手部脱落细胞，因此，用手撕开的一端是我们检验的重点。本案中，由于受害人被胶带多层缠绕，能否找到使用人用手撕开胶带的起点关系到检验是否成功。胶带被泥土严重污染，笔者仔细分离胶带找到端部的单层胶带，最终在一处单层胶带的端部发现有少量手印纹线，以此确定该位置就是手撕胶带的起点，这是本案能成功检出嫌疑人DNA分型的前提。

（2）选择正确的提取方法。泥土内含有微生物DNA杂质片段、离子、灰尘、微粒、色素等，这些杂质会对DNA扩增产生抑制作用，增加检验的难度。检验这类污染程度比较严重的检材时，要去除各种可能影响扩增的因素，技术人员可以根据各种可能的污染物特点和性质，以不同的方法去除扩增抑制物。公安部物证鉴定中心的《M48手工提取方法》（文件控制编号IFSC-02-02-05-2010）指出，M48纯化试剂盒能有效对含有大量扩增抑制物的检材中DNA模板进行纯化，在“高浓度焦性盐”存在的条件下，核酸特异性地吸附到二氧化硅上，经80%乙醇溶液充分洗涤，去除杂质后，在低盐条件下洗脱获得较为纯净的DNA模板[1]。笔者通过日常检案经验也进一步证实用MagAttract DNA Mini M48试剂盒提取被泥土污染的检材（如胶带上脱落细胞）可以有效去除扩增抑制物，纯化后的扩增产物电泳后可以得到比较满意的DNA分型结果。本案先将胶带放在室内晾干，用软毛刷尽量弹去胶带表面附着的泥土，再通过MagAttract DNA Mini M48试剂盒提取胶带检材上的DNA，这是成功检出嫌疑人完整DNA分型的关键。

综上所述，胶带上遗留的人体脱落细胞多为角质上皮细胞，细胞核多已退化，DNA分型难度较大。在进行胶带上人体脱落细胞的DNA提取时，采用Chelex-100法提取DNA，并用Microcon-100浓缩过柱，省时又方便，操作简单，条件较好的检材一般可以得到理想的DNA分型图谱[2]。如果由于检材污染严重未能获得有效DNA分型时，可继续采用MagAttract DNA Mini M48试剂盒进行DNA提取或对DNA模板进行纯化，以获得较纯净的DNA模板，进而得到更为理想的DNA分型。

[1]王华荣，廖勤，吴世青.三种磁珠法提取脱落细胞DNA的比较[J].法医学杂志，2016，32（6）：459-460.

[2]郭燕霞，陈松，刘开会，等.人体脱落上皮细胞DNA检验 2 例[J].刑事技术，2007（1）：51-52.

2016-08-18）

（本文编辑：边英男）

DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.05.033

1004-5619（2017）05-0568-02

季炳均（1979—），男，副主任法医师，主要从事法医学检案工作；E-mail：1954185928@qq.com