桦褐孔菌多糖对小鼠抗运动疲劳的影响

曹利丹

（郑州工业应用技术学院，河南郑州451150）

桦褐孔菌多糖对小鼠抗运动疲劳的影响

曹利丹

（郑州工业应用技术学院，河南郑州451150）

为了研究桦褐孔菌多糖对小鼠的抗运动疲劳作用，试验利用将小鼠进行分组，分别为低、中、高剂量组和对照组，按剂量（10、20、30、0mg/kg）灌胃桦褐孔菌多糖，灌胃延续30d，末次灌胃后测定抗运动疲劳及消炎作用指标，包括小鼠负重游泳、爬杆、耐缺氧时间以及运动后小鼠体内尿素氮、血乳酸、肝糖原、炎症因子肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）的含量的方法.结果表明：桦褐孔菌多糖可提高小鼠爬杆、负重游泳、耐缺氧时间，还能够提高小鼠机体运动后肝糖原储存量，降低血乳酸和血清尿素氮储存量，说明桦褐孔菌多糖具有增强小鼠抗运动性疲劳和耐缺氧的功能活性.

桦褐孔菌多糖；小鼠；运动；抗疲劳；消炎

桦褐孔菌（（Inonotus obliquus）隶属担子菌亚门，主要产地为俄罗斯、日本以及我国的吉林省、黑龙江省等地，是非常重要的药用菌类.其含有重要的功能性成分，如含有桦褐孔菌多糖、桦褐孔菌多酚类物质以及桦褐孔菌三萜类化合物，具有抗氧化、抗肿瘤以及消炎等功效.有研究表明，桦褐孔菌还具有治疗糖尿病、防治高血压等功效，因此桦褐孔菌在药用真菌中占有重要的地位.近年来，桦褐孔菌的研究广受人们关注，本研究通过制得的桦褐孔菌多糖灌胃小鼠，研究其对小鼠的抗运动疲劳的影响，对进一步开发桦褐孔菌产品提供技术参考.

1 材料

1.1 试验动物

ICR小鼠，60只，雄性，重量28～30g，购自中国农业大学动物中心，合格证号SCXK2016-0013.

1.2 主要材料与试剂

桦褐孔菌，由雪开野生灵芝销售有限公司提供；石油醚、乙醇，购自宏盛化工科技有限公司；尿素氮、血乳酸试剂盒，，Siemens Medical Solutions Diagnostics生产；小鼠TNF-α酶联免疫吸附反应（enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA）检测试剂盒、小鼠IL-6 ELISA检测试剂盒，由上海依科赛生物制品有限公司生产.

1.3 主要仪器

德国EK Flactatescout便携式血乳酸测定仪，德国EKF有限公司生产；WFJ-15型超微粉碎机，江阴市康和机械制造有限公司生产；TS-5型离心机，湖南平凡科技有限公司生产；721G-100型可见分光光度计，上海雷韵试验仪器制造有限公司生产；Hei-VAP Advantage旋转蒸发仪，德国HEIDOLPH有限公司生产；HWS-14型电热恒温水浴锅，上海善志仪器设备有限公司生产；LPS（E.coliO26:B6）美国Sigma公司；

2 方法

2.1 桦褐孔菌多糖的制备

取一定量的桦褐孔菌，洗净烘干后进行粉碎至40目，取一定量粉末，向其中加入40倍水，在90℃温度下浸提2.5h，进行过滤，浓缩，再加入4倍体积的乙醇（95%）溶液，在4℃下静止24h，离心后取沉淀，再采用无水乙醇溶液清洗3次，干燥后得到多糖粗品.取一定量桦褐孔菌粗多糖，向其中加入1L纯净水溶解，用三氯乙酸-正丁醇法去除蛋白后于4℃冰箱中保存，备用.

2.2 试验动物分组与给药

将小鼠分成4组，每组15只，除每天正常饲养外，给对照组每天灌胃去离子水10mg/kg，低剂量组每天灌胃桦褐孔菌多糖10mg/kg，给中剂量组每天灌胃桦褐孔菌多糖20mg/kg，给高剂量组每天灌胃桦褐孔菌多糖30mg/kg，持续灌胃30d.其他条件四组均相同.

2.3 负重游泳时间测定试验

各组小鼠经末次灌胃桦褐孔菌多糖30min后，将每组小鼠分别置于相对应的小鼠游泳试验游泳箱内，水深约为35cm，水温约为28℃，再将小鼠尾巴负重体重5%铅丝，从此刻开始记录时间，也即从小鼠开始游泳至小鼠死亡时间，作为负重游泳时间.

2.4 爬杆时间测定试验

对小鼠进行末次灌胃桦褐孔菌多糖30min后，将其放于玻璃棒上，玻璃棒长度为140mm，直径为10mm，此时，使小鼠身体每个部位肌肉有紧张感觉，开始记录从小鼠开始上爬至小鼠疲劳后不能玻璃棒上继续爬，从而下落，参照以上上爬试验，共做3次平行试验，平均时间即为爬杆时间[17].

2.5 常压耐缺氧时间测定试验

对小鼠进行末次灌胃桦褐孔菌多糖30min后，将其放在大瓶中，瓶内提前放入石灰15g，小鼠进入后将大瓶密封，此时记录从小鼠进入至小鼠无法呼吸时的时间，即小鼠常压耐缺氧时间[18].

2.6 生化指标的测定方法

2.6.1 血清尿素氮含量

对小鼠进行末次灌胃桦褐孔菌多糖30min后，将小鼠放于试验用游泳池中进行游泳，泳池温度约为35℃，游泳90min后，对小鼠进行采血，同时分离血清，测其中尿素氮含量.

2.6.2 肝糖原含量

对小鼠进行末次灌胃桦褐孔菌多糖30min后，将小鼠放于试验用游泳池中进行游泳，泳池温度约为35℃，游泳90min后，处死后进行取小鼠肝组织200mg，将其匀浆，检测肝糖原含量[19].

2.6.3 血乳酸含量

对小鼠进行末次灌胃桦褐孔菌多糖30min后，将小鼠尾部系上铅丝，重量为其身体重量的5%，进行负重游泳，泳池水温约为35℃，游泳90min后，休息20min，从小鼠眼球位置取血，测血乳酸含量.

2.6.4 TNF-α和IL-6含量检测

收集各组小鼠血清，参照ELISA试剂盒相关说明书操作，测定血清TNF-α和IL-6含量.

3 结果与分析

3.1 桦褐孔菌多糖对小鼠负重游泳、爬杆及常压耐缺氧时间的影响

结果见表1.

表1 桦褐孔菌多糖对小鼠负重游泳、爬杆、耐缺氧时间的影响(n=15，x±s)

由表1可知，将小鼠灌胃桦褐孔菌多糖后，小鼠运动后各项指标均发生明显变化，游泳时间明显延长，且灌胃桦褐孔菌多糖剂量越大，小鼠负重游泳时间越长，而且中、高剂量组小鼠负重游泳延长时间极显著，爬杆时间也明显增长，剂量越大，延长时间越长，耐缺氧时间也有较明显变化，灌胃桦褐孔菌多糖剂量越大，小鼠耐缺氧时间越长.说明桦褐孔菌多糖能够增强小鼠的运动能力以及运动耐力，具有较强的抗疲劳和耐缺氧能力.

3.2 桦褐孔菌多糖对小鼠生化指标的影响

结果见表2.

表2 桦褐孔菌多糖对小鼠各项生化指标的影响(n=15，x±s)

由表2可知，将小鼠灌胃桦褐孔菌多糖后，生化指标变化较为明显，剂量越大，生化指标变化越大.血清尿素氮随着灌胃桦褐孔菌多糖剂量增大而降低，而且灌胃剂量达到20mg/kg后，下降极显著.运动后肝糖原储存量随着灌胃桦褐孔菌多糖剂量的增大而增加，从表中可明显看出，中、高剂量组肝糖原储存量增长极显著.血乳酸含量随着灌胃剂量的增大降低显著，达到中、高剂量组后下降明显.血乳酸和尿素氮的降低能够说明小鼠运动后机体恢复能力加强，恢复速度会加快，有利于减少运动后乳酸堆积，具有积极效果，肝糖原能够为运动机体不断提供能量，灌胃桦褐孔菌多糖后，小鼠体内肝糖原储存量增多，能够为机体运动提供保障，因此，灌胃桦褐孔菌多糖能够增强机体运动能力，加快机体恢复，提高抗疲劳功能.

4 结论

小鼠经灌胃桦褐孔菌多糖后，各项运动及生理生化指标均发生变化，而且随着灌胃桦褐孔菌多糖剂量越大，各项指标变化越明显，随着灌胃剂量的增大，小鼠负重游泳时间明显延长且中、高剂量组小鼠负重游泳延长时间极显著，爬杆时间延长，耐缺氧时间也显著延长.血乳酸和血清尿素氮随着灌胃剂量的增大而下降显著，肝糖原储存量增多，桦褐孔菌多糖剂量组均可显著降低血清TNF-α和IL-6含量.因此可得出，灌胃桦褐孔菌多糖能够显著增强小鼠机体运动能力，加快机体运动后恢复，对小鼠具有较强的抗运动疲劳和消炎功能.

〔1〕张梅梅,魏志文,刘玉冰,赵艳霞,郑维发.Folin-Ciocalteu比色法测定桦褐孔菌多酚的条件优化[J].菌物学报,2011(02):295-304.

〔2〕陈义勇,顾小红,汤坚.桦褐孔菌多糖的抗肿瘤活性研究[J].食品与生物技术学报,2011(01):65-69.

〔3〕闫可，等.桦褐孔菌不同菌株培养特性及人工栽培比较[J].延边大学农学学报，2011（04）.

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1673-260X（2017）11-0149-02

2017-08-24