短期快速失血对机体脂质过氧化水平影响的实验研究*

李大鹏 吕春雷 徐会斌 郑文哲 王凤娇 张霞

短期快速失血对机体脂质过氧化水平影响的实验研究*

李大鹏 吕春雷 徐会斌 郑文哲 王凤娇 张霞

目的 探讨短期快速失血对机体脂质过氧化水平的影响。方法 选择普通级新西兰兔11只，通过急性失血方式建立收缩压下降曲线，形成快速失血模型，测定收缩压基础值（T1），当收缩压降至基础值2/3（T2）、基础值1/2（T3）、基础值1/3（T4）时采集血样，采用酶联免疫吸附分析检测各位置血清丙二醛（malondialdehyde MDA）、过氧化氢酶（hydrogen peroxide enzyme CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione oxidation reductase GSH-PX）活性，并

予以统计分析。结果 MDA ：B组低于C组、C组低于D组，各时间水平间差异无统计学意义（P＞0.05）；CAT ：A组高于B组、B组高于C组、C组高于D组，T1-T2、T2-T3、T3-T4各组间差异无统计学意义（P＞0.05），其余组间差异存在统计学意义（P＜0.05）；GSH-Px ：A组高于B组、B组高于C组、C组高于D组，T1、T2间差异无统计学意义（P＞0.05），其余组间差异存在统计学意义（P＜0.05）。结论 短期快速失血对机体抗氧化酶CAT、GSH-Px具有明显影响，可致CAT、GSH-Px活性下降，而反映脂质过氧化程度的MDA水平则上升，失血量与CAT、GSH-Px指标间相关性具有统计学意义。

失血 脂质过氧化 丙二醛 抗氧化酶 过氧化氢酶 谷胱甘肽过氧化物酶 抗氧化能力

短期快速失血常见于院前急救及院内救治，可引起失血性低血容量休克等急危重症，导致组织低灌注、再灌注损伤等[1，2]。现选择新西兰兔为研究对象，通过急性失血方式形成收缩压下降曲线，建立快速失血模型，以反映脂质过氧化程度的丙二醛（malondialdehyde，MDA）和抗氧化能力的过氧化氢酶（hydrogen peroxide enzyme CAT）及谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneoxidation reductase GSH-PX）为监测指标，探讨短期快速失血对机体脂质过氧化水平的影响，报告如下。

材料与方法

1 实验对象 随机选择新西兰兔（n=11），普通级，体重质量2～3 kg，雌雄不限，购于山东省济南实验动物中心（实验动物生产许可证：SCXK（鲁）2015-0001），普通环境中冲洗式饲养兔笼（苏州冯氏实验动物设备公司）内饲养，自由进食及饮水。

2 主要仪器与试剂 ZH-HX-2型无创尾动脉血压测量分析系统（安徽正华生物仪器设备有限公司）用于血流动力学指标监测，小动物人工呼吸机（上海奥尔科特生物科技公司）用于辅助呼吸等。

测定MDA、CAT、GSH-Px的主要仪器包括722型光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂，MDA检测波长532 nm、1 cm光径比色杯，CAT检测波长405 nm、0.5 cm光径比色杯，GSH-PX检测波长412 nm、1 cm光径比色杯）、5810R台式冷冻高速离心机（德国EPPendorf公司）等。测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

实验主要耗材：0.3%戊巴比妥钠溶液（自配），肝素钠注射液（上海上药第一生化药业有限公司，批号1507104），0.9%氯化钠注射液（山东齐都药业有限公司，批号2015092407），一次性使用塑料血袋（四川南格尔生物科技有限公司，批号150304）等。

3 实验方法

3.1 动物实验：新西兰兔适应性饲养4 d以上进行实验，实验前24 h禁食，2～3 h禁水。实验操作前，实验兔均先称重并记录，并采集血标本2 ml以上待检（常规方法迅速分离血清，–80℃保存）。

选择0.3%戊巴比妥钠麻醉，剂量为30 mg/kg体重，缓慢耳缘静脉注射。根据实验情况，麻醉过程中可逐步追加1/5量，实验中出现呼吸暂停者给予辅助呼吸至自主呼吸恢复。麻醉稳定后，将实验兔仰卧固定在解剖台上，用8%硫化钠脱毛暴露手术区皮肤后常规消毒，手术分离兔右侧颈总动脉，完毕后插入肝素化动静脉插管并用缝合线固定好，肝素化抗凝（500 U/kg），插管通过压力转换器与无创尾动脉血压测量分析系统相连，监测血压、心率等血流动力学指标变化。无菌操作下，按以上方式分离出右侧股动脉进行P E套管插管并用缝合线固定好以建立放血通路，并与一次性使用塑料血袋（带刻度定量收集管）相连，用于放血及血液标本留取。

3.2 实验模型制备：实验操作前，记录实验兔收缩压基础值（T1）等指标。

选择右侧股动脉建立放血通路进行放血，使用一次性使用塑料血袋收集，兔收缩压随放血量增加而逐步下降，形成收缩压下降曲线。当收缩压降至基础值2/3（T2）、1/2（T3）、1/3（T4）3个位置时，通过带刻度定量收集管分别留取血标本2 ml以上，按常规方法迅速分离血清，–80℃保存待检。

4 指标测定 严格按试剂盒操作说明书要求进行标准品处理和实验操作。MDA水平测定采用TBA法，532 nm波长测各孔吸光度A，检测范围为0.5～113 nmol/ml；CAT活性测定采用可见光法，405 nm波长测各孔吸光度A，检测范围为0.2～24.8 U/ml；GSH-PX活性测定采用DTND显色法，412 nm波长测各孔吸光度A，检测范围为20～330 U/ml。

结 果

1 11只实验兔在T1～T4共4个位置采集血样，检测血清MDA、CAT、GSH-PX，分别按A、B、C、D进行分组，A～D各组指标分别进行组间统计学分析。MDA、CAT、GSH-Px检测结果见表1，其中MDA检测B组低于C组、C组低于D组，CAT检测A组高于B组、B组高于C组、C组高于D组，GSH-PX检测A组高于B组、B组高于C组、C组高于D组。

2 重复测量因素为时间因素，有T1、T2、T3、T4共4个水平。MDA、CAT、GSH-PX的检测结果见表2；对重复效应进行方差分析（F检验），结果见表3；采用LSD法进行各时间水平间多重比较，结果见表4、5。

表1 各组MDA、CAT、GSH-Px检测结果

表2 球型检验结果

表3 方差分析结果

表4 CAT不同时间水平下LSD多重比较结果

表5 GSH-PX不同时间水平下LSD多重比较结果

讨 论

氧化应激是在损伤因素作用下，机体组织或细胞内氧自由基生成增多和（或）清除能力降低，导致氧自由基在体内或细胞内蓄积，出现脂质过氧化及造成细胞或组织氧化损伤[3，4]。MDA是脂质过氧化反应的最终产物，可间接反映细胞受自由基攻击后脂质过氧化的严重程度，以及间接反映氧自由基对细胞的损伤程度，MDA升高是机体氧自由基损伤标志。抗氧化酶CAT可有效清除自由基，减轻及阻断脂质过氧化反应，间接反映抗氧化酶的活性及机体清除自由基的能力；GSH-PX可还原体内不断生成的脂质过氧化物和过氧化氢，减少活性氧自由基及脂质过氧化物产生，防止脂质过氧化物对机体组织造成损害[5-9]。

本文实验数据表明：短期快速失血中随失血量增加，CAT组间比较T1-T2、T2-T3、T3-T4各组间差异均无统计学意义（P＞0.05），其余组间差异存在统计学意义（P＜0.05）；GSH-Px组间比较T1、T2间差异无统计学意义（P＞0.05），其余组间差异存在统计学意义（P＜0.05），表明失血增加对CAT、GSH-Px指标具有明显影响，失血量与CAT、GSH-Px指标的相关性有统计学意义，提示失血致机体氧自由基生成增多，过量自由基水平致CAT、GSH-Px消耗增加及活性显著下降，导致清除自由基能力及抗氧化能力下降；MDA组间比较各时间水平间差异无统计学意义（P＞0.05），MDA水平上升，表明快速失血对MDA指标具有一定影响，使脂质过氧化反应上调，促进并导致机体生物膜损伤。

通过急性失血方式建立快速失血模型，以反映脂质过氧化程度的MDA和抗氧化能力的CAT及GSH-PX指标监测，研究快速失血对脂质过氧化水平的影响，数据表明短期快速失血对CAT、GSHPx指标具有明显影响，可降低血清CAT、GSH-Px活性，致MDA水平上升但无明显影响，促进脂质过氧化反应上调，相关资料为院前及院内失血救治及相关研究提供了实验数据支持。今后有待于进一步增加实验研究数量，并在临床救治等工作中加以推广。

1 李维礁，陈媛，朱玮亚，等.家兔急性失血性休克及分组治疗的血压、微循环同步观测[J].昆明医学院学报，2011，32（5）：20-23.

2 吴健锋，管向东，陈娟，等.早期乳酸清除率评估与失血性低血容量休克预后的研究[J].中华普通外科学文献（电子版），2010，4（4）：332-335.

3 王轩，张展，董惠斌，等.双酚A对雄性大鼠抗氧化能力影响的初步研究[J].现代生物医学进展，2011，11（8）：1420-1423.

4 徐其岭，闫莉.富氢生理盐水对大鼠重度颅脑损伤后氧化应激保护作用的研究[J].重庆医学，2014，43（8）：943-948.

5 刘灵芝.丹红注射液对自然衰老大鼠心脏、大脑组织SOD、MDA及GSH-Px的影响[J].中国实用神经疾病杂志，2012，15（17）：73-74.

6 张歆薇，刘海强，徐胜龙，等.次生作用对大鼠血浆SOD、MDA、NO水平的影响[J].现代生物医学进展，2012，12（18）：3416-3419.

7 杨明聪，范小平，王春.低频超声对大鼠颊囊黏膜溃疡组织SOD、MDA含量的影响[J].重庆医学，2012，41（26）：2711-2713.

8 周峰.烟酰胺对甲基苯丙胺注射后小鼠脑组织中脂质过氧化的影响[J].江苏医药，2014，40（1）：13-15.

9 温啸，贺大方，倪雪勤，等.干酪乳杆菌与银杏叶提取物对肥胖小鼠血脂及抗氧化功能的影响[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2014，42（1）：1-12.17.

Experimental Study on the Change of Organism Lipid Peroxidation Level in Short Term Rapid Blood loss

LI Dapeng，LV Chun-lei，XU Hui-bin，et al. The 88th Hospital of PLA，Taian 271000

Objective Study on the changes of organism lipid peroxidation level in short term rapid blood loss.Methods The rapid blood loss model of the gradient decerease in the systolic blood pressure was eatablished in 11 new zealand rabbits on ordinary level. The arterial blood during the different phase of shock，i.e.when the systolic pressures were 2/3（T2），1/2（T3），1/3（T4）of the basis systolic blood pressure，was collected and malondialdehyde（MDA）、hydrogen peroxide enzyme （CAT）、glutathione oxidation reductase （GSH-P x）levels in the plasma were determined by the double antibody sandwich method of enzyme-labeled immunosorbent assay（ELISH），and the data be statistically analyzed. Results MDA ：Group B less than in group C，group C less than in group D，there was no significant difference between the time level（P＞0.05）. CAT ：Group A higher than in group B，group B higher than in group C，group C higher than in group D，there was no significant difference between the T1-T2，T2-T3，T3-T4（P＞0.05），there were significant differences between the other groups （P＜0.05）. GSH-Px ：Group A higher than in group B，group B higher than in group C，group C higher than in group D，there was no significant difference between the T1-T2（P＞0.05），there were significant differences between the other groups （P＜0.05）.Conclusion Short term rapid blood loss has a significant effect on the antioxidant enzyme CAT and GSH-Px of organism，can lead to significantly decrease in CAT and GSH-Px activity，MDA levels rise reflect the degree of lipid oxidation. There were significantly correlated between blood loss and CAT，GSH-Px index.

Lose blood Lipid peroxidation Malondialdehyde Antioxidant enzyme Hydrogen peroxide enzyme Glutathione oxidation reductase Antioxidant capacity

R446.11

A

1671-2587（2017）05-0430-04

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.005

*本课题受军队“十二五”后勤科研计划项目（No.CWS11J297）资助

271000 山东省泰安市解放军第88医院中心实验室

李大鹏（1964–），男，辽宁锦州人，副主任技师，主要从事医学实验工作，（E-mail）lidapeng1964@126.com。

吕春雷，男，主任医师，（E-m a i l）15653808901@163.com。

2017-06-02）

（本文编辑：王虹）