高效液相色谱法对β—地中海贫血及异常血红蛋白的检测价值

王林洁

【摘要】 目的：分析高效液相色谱法对检测地中海贫血及异常血红蛋白的检测价值。方法：选取笔者所在医院2013年11月-2016年11月3452例在门诊问诊患者进行地中海贫血基因检查，运用高效液相色谱法都患者的血红蛋白组分进行分析。根据地中海贫血基因检测结果将3452例患者分为α地贫、β地贫、αβ复合型地贫三组。分析血红蛋白检查联合高效液相色谱法对地中海贫血及异常血红蛋白检测的灵敏度及诊断精度。结果：3452例受检患者经高效液相色谱法对α型地贫检测灵敏度为28.08%（214/762），确诊率为28.08%（214/762），对β地贫检测灵敏度为98.98%（389/393），确诊率为98.98%（389/393）；对αβ复合型地贫检测灵敏度及确诊率均为100%（20/20）。结论：采用高效液相色谱法都对β-型地中海贫血患者进行筛查诊断精度较高，高效液相色谱法对发现异常血红蛋白也要重要的临床价值。

【关键词】 地中海贫血； β型； 异常血红蛋白； 高效液相色谱法； 检测精度

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.19.033 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2017）19-0067-02

地中海贫血也叫海洋性贫血，是一種遗传性贫血疾病[1]。地中海贫血的原因是因为身体无法制造出人体正常需要的血红蛋白，所以患有地中海贫血的患者会时常出现头晕、易怒、乏力、白色青白、睡眠不佳的临床症状[2]。地中海贫血已经严重影响了患者的生存质量。据数据显示全球携带地中海贫血基因的患者已经高达1.49亿[3]。由于地中海贫血是一种遗传性贫血疾病，基因检测也是确诊地中海贫血的最有效方式，但因为基因检测费用较高，不适合大面积会对地中海贫血进行筛查，本文主要研究高效液相色谱法对检测β-地中海贫血及异常血红蛋白的检测精度及临床价值。为保证本次研究的顺利完成，特将笔者所在医院2013年11月-2016年11月3452例在门诊问诊患者进行地中海贫血基因检查，详细情况如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年11月-2016年11月在笔者所在医院门诊问诊的3452例患者，对其进行地中海贫血筛查，患者年龄5～48岁，平均（27.3±3.6）岁，取患者静脉血2 ml并进行抗凝。纳入标准：（1）患者均同意筛查地中海贫血，并签署知情协议书；（2）均同意医护人员对其进行检查结果的调研与观察；（3）无焦虑或精神疾病。

1.2 方法

抽取各组受检者静脉血液2 ml，并使用乙二胺四乙酸（EDTA，江西长青医药科技有限公司）进行抗凝，用于地中海贫血基因检查及高效液相色谱法分析。

1.2.1 高效液相色谱法 采用高效液相色谱法对患者的血红蛋白进行分析，仪器选用（BIORAD VARIANT II）全自动血红蛋白分析仪，所有操作均严格依照仪器使用说明进行操作，并通过辨别锋形，检测患者的HbA2和HbF两项指标，判断患者是否血红蛋白出现异常。

1.2.2 血红蛋白分析筛查 使用血红蛋白HPLC分析系统及其配套试剂盒对3452例受检患者进行基因筛查分析。HPLC分析：严格按照操作说明进行操作，对所有研究对象的血液标本的血红蛋白进行检测。

基因检测：运用Gap-PCR方式对受检患者α3.7、α4.2、SEA（中亚人常见基因缺失点），三种缺失基因进行检测，并通过反向斑点杂交法检测α地贫，检测内容包括：α2球蛋白基因的改变及有无缺失，CAC CCGα→CAACAC[6]。运用RDB位点突变法检测β型地贫的常见的几个位点：CD41-42、IVS-2-654、id-28 （ A2→G6 ）、Cf278（G→PA）、CD71 -65 （+A、CD71）、CPD49（G6→T）、GPJ3-29（A32→6G） [7]，与九个极为少见的突编位点：ATG→AGG、RDS55-785 （98+ G9）、-PDC98（+ C）、PPAP-30 （T→C）-75（3C→AJH）、PHF-27-18 （DYG→T9）、LI64（+C6）、VFH+65-+ 75 （-AAAC）-32（9C→FA）IVS[8]。检测时的所有操作均严格按照仪器说明书进行操作。

1.3 判断标准

HbA2在2.5%～4.0%、HbF小于2.0%为正常；若HbA2>4.0%、HbF≥2.0%，则可确诊为β型地贫。诊断精度为：检查血红蛋白的含量，诊断灵敏度为：CD71-65（+A、CD71） 、CPD49（G6→T）指标，检测敏感度。

2 结果

2.1 地中海贫血基因检测结果

在本次3452例受检患者经基因检测后，发现地中海贫血基因携带者共有1175例，α型地贫基因携带者762例，占比64.85%（762/1175）；β地贫基因携带者393例，占比33.44%（393/1175）；复合型基因携带患者20例，占比1.7%（20/1175），非地中海贫血患者2277例。

2.2 高效液相色谱法检测结果

在762例α型地贫基因携带患者中检测结果阳性者214例；β地贫基因携带者393例，阳性389例；αβ复合型地贫基因携带者20例，阳性20例；由上述数据显示，高效液相色谱法对检测β型地中海贫血检测的灵敏度及确诊率分别为98.98%（389/393）、98.98%（389/393）；对αβ复合型地贫血检测灵敏度均为100%（20/20）。

2.3 对异常血红蛋白的诊断

3452例受检患者经高效液相色谱法分析后，中诊断出有13例患者出现血红蛋白异常病症，其中Hb E4例、电泳特性与正常的血红蛋白有差异患者3例、Hb Abruzzo患者3例、廉型红细胞贫血3例。endprint

3 讨论

地中海贫血主要致病原因有以下几点：（1）缺铁性贫血，因患者体内缺血所以导致患者血细胞生产降低。（2）患者体内造血功能障碍。（3）溶血性贫血，患者体内的血细胞破坏加速，而导致的地中海贫血。 β型地中海贫血是一种多发于婴儿的遗传性贫血综合症[7]，一般发病越早病情也越重，如不及时进行治疗病情会恶化为慢性进行性贫血，只能依靠输血维持生命，严重影响患者的生存质量，给患者家庭带来了极大的经济负担。β型地中海贫血多发病于新生儿出生后3～6个月，β型地中海贫血是最严重的血红蛋白病之一[8]。目前在临床上还没有具体治疗β型地中海贫血的方式，只能对该疾病进行预防[9]。因此，大面积筛查携带致病基因的工作就变得尤为重要。由于β型地中海贫血是遗传性溶血性贫血，所以在婚前对β型地中海贫血进行基因检测十分有必要，β型地中海贫血检测也成为了提升我国人口质量及优生优育的重要途径。传统用于检测 Hb A2的方法有碱性醋酸纤维膜电泳洗脱法、凝胶电泳/光密度扫描法、柱层析法等，而这些方法操作繁琐，变异范围大.严重的β-地贫患儿只能靠输血维持生命，给患儿带来极大的痛苦，同时也给患儿家庭带来沉重的家庭负担。大面积普查β-地中海贫血能减少社会负担，对于未出生的胎儿能起到优生优育的作用，可以通过中海贫血筛查阻止β-地中海贫血降生。

HPLC高效液相色谱法是2012年国际地中海贫血协会推荐的确诊方法，因高效液相色谱法操作简单、诊断精度较高、所需费用低廉更加适合大面积筛查，在此基础上还能弥补基因检查无法检测血红蛋白的漏洞。全自动高效液相色谱技术是一种新型的分析血红蛋白的技术，目前在临床上广为使用。在本次研究中，HPLC法对诊断各型地中海贫血都具有较好的临床效果，尤其对于β-地中海贫血及αβ复合型地贫的检测接近完美（20/20），诊断灵敏度也较高。建议在地中海贫血高发的地区，如我国广东、广西、四川等地，降低诊断标准采用高效液相色谱法对当地居民进行大面积的地贫普查，有助于有效控制β型地中海贫血的发生，值得临床推广运用。

综上所述，高效液相色谱技术比基因检测操作简单、所需资金少。更适合大面积普查地中海贫血，尤其高效液相色谱技术对检测β型地贫及αβ复合型地贫有高达百分之90以上的诊断精度。同时还能发现基因检测无法发现的血紅蛋白异常，弥补了基因检查的不足，对β-地中海贫血及异常血红蛋白的诊断有重要的临床价值。

参考文献

[1]谢建红，张永良，肖奇志，等.应用高效液相色谱法检测β-地中海贫血及异常血红蛋白[J].广东医学，2011，32（11）：1473-1476.

[2]毛良英，张晓华，于青清.高效液相色谱分析血红蛋白组分和血常规分析在地中海贫血筛查中的应用[J].检验医学与临床，2014，15（s2）：108-109.

[3]彭建宏，刘运科，肖春燕.离子交换高效液相色谱法血红蛋白分析筛查地中海贫血的研究[J].国际医药卫生导报，2012，18（4）：539-543.

[4]曾劲伟，杨光，崔金环，等.高效液相色谱法检测血红蛋白A_2诊断β-地中海贫血携带者的最佳阈值[J].中国循证医学杂志，2009，9（8）：828-831.

[5] Zeng J W，Yang G，Cui J H，et al.The Best Threshold Value of Hemoglobin Afor Diagnosis of β-Thalassemia Carriers by High Performance Liquid Chromatography[J].中国循证医学杂志，2014，31（4）：662-664.

[6]林建锋.育龄人群β地中海贫血筛查及血红蛋白A_2截断值的确定[J].中国医学工程，2015，14（8）：113.

[7]霍梅，吴文苑，刘妹，等.中国深圳地区孕妇毛细管血红蛋白电泳筛查地中海贫血截断值的探讨[J].中国实验血液学杂志，2016，24（2）：536-539.

[8]周远青，梁瑞莲，谢健敏，等.ROC曲线评价毛细管区带电泳用于α地中海贫血筛查的临床价值[J].国际医药卫生导报，2013，19（7）：907-910.

[9]周剑英，谢杏梅，李东至，等.亨氏小体和毛细管电泳联合筛查对α-地中海贫血的应用价值[J].热带医学杂志，2012，12（12）：1488-1489.

（收稿日期：2017-03-28）endprint