非小细胞肺癌中叉头框蛋白Q1和β连环蛋白的表达及临床意义

胡余敏，朱君飞

（1.临海市第一人民医院，浙江 临海 317000；2.台州市中心医院，浙江 台州 318000）

非小细胞肺癌中叉头框蛋白Q1和β连环蛋白的表达及临床意义

胡余敏1，朱君飞2

（1.临海市第一人民医院，浙江 临海 317000；2.台州市中心医院，浙江 台州 318000）

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中叉头框蛋白Q1（FOXQ1）和β连环蛋白（β-catenin）的表达及其临床意义。方法采用免疫组化En Vision法检测60例NSCLC和对应癌旁组织中FOXQ1和β-catenin的表达情况，并结合NSCLC患者临床病理资料进行分析。结果NSCLC组织中FOXQ1和β-catenin阳性表达率分别为63.33%（38/60）和 71.67%（43/60），均明显高于对应癌旁正常组织的 13.33%（9/60）和 0.00%（0/60），差异均有统计学意义 （P＜0.05）；FOXQ1和β-catenin蛋白表达均与临床分期及淋巴结转移有关 （P＜0.05）；NSCLC组织中FOXQ1和 βcatenin之间的表达呈显著正相关（r＝0.662，P＜0.01）。结论NSCLC组织中FOXQ1和β-catenin表达升高，其异常表达与NSCLC的转移和临床分期密切相关，FOXQ1有望成为NSCLC新的治疗靶点。

非小细胞肺癌；叉头框蛋白Q1；β连环蛋白

非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer，NSCLC）约占肺癌的80%～85%[1]。尽管分子机制的研究和综合治疗取得了进展，但5年生存率仍然较低[2]。因此，有必要寻找可用于NSCLC临床诊断和治疗的新分子靶点。叉头框蛋白Q1（Forkhead box Q1，FOXQ1）是FOX家族的新成员，属一种肿瘤癌基因，参与多种信号通路，调节细胞增殖、血管生成和凋亡等，促进肿瘤的发生发展[3-4]。β-连环蛋白（βcatenin）是连环蛋白家族成员之一，参与Wnt信号通路，通过与Wnt靶基因作用，诱导其转录，在肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移过程中起着重要作用[4-5]。本研究采用免疫组化En Vision法检测FOXQ1和β-catenin在NSCLC和癌旁组织中的表达特点及其与NSCLC临床病理因素的关系，进一步分析两者的相关性，初步探讨FOXQ1和β-catenin表达与NSCLC发生、发展的关系，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2008年1月～2015年12月临海市第一人民医院20例和台州市中心医院40例手术切除的NSCLC标本，具有完整临床资料，均经病理明确诊断，术前未接受放疗和化疗。60例NSCLC中，男 35例，女 25例，年龄 30～80岁，中位年龄48岁，＜60岁20例，≥60岁40例。参照2004年WHO肺肿瘤组织学分类标准[6]：鳞癌24例，腺癌36例。高中分化42例，低分化18例。依据2010年国际抗癌联盟（UICC）肺癌TNM分期标准[7]：Ⅰ期19例，Ⅱ期20例，Ⅲ期21例。有淋巴结转移者27例，无淋巴结转移者33例。同时另取同期距离肿块边缘5cm外的癌旁正常组织60例作为对照。

1.2 方法 （1）主要试剂：兔抗人FOXQ1单克隆抗体（ab99536）购自英国Abcam公司，鼠抗人βcatenin单克隆抗体（M-0442）购自美国Santa Cruz公司，即用型羊抗兔和兔抗鼠免疫组化En VisionTM检测试剂盒和DAB显色剂均购自北京中杉金桥生物科技有限公司。（2）检测方法:所有标本均采用10%的中性甲醛固定，常规石蜡包埋、切片、染色。取石蜡组织常规连续切片，厚约4μm，采用免疫组化En Vision二步法，实验步骤按照试剂盒说明书操作。用已知阳性片作阳性对照，以PBS液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定 免疫组化染色阳性信号为出现黄色至棕黄色颗粒。FOXQ1阳性表达位于细胞浆。FOXQ1细胞浆染色阳性细胞数≥10%为阳性，＜10%为阴性。β-catenin≥90%细胞膜连续染色为正常表达，＜90%细胞膜着色或无表达或胞质或胞核染色为异常表达，β-catenin胞质或胞核染色阳性细胞数≥10%为阳性，＜10%为阴性。观察5个以上高倍视野（×400），每个视野计数≥200个细胞。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0软件对计数资料进行χ2检验，FOXQ1和β-catenin表达的相关性采用Spearman等级相关分析。

图1 FOXQ1在NSCLC组织中的阳性表达（En Vision×400）

表1 NSCLC和癌旁正常组织中FOXQ1和β-catenin的表达（n，%）

2 结果

2.1 NSCLC和癌旁正常组织中FOXQ1和βcatenin表达的比较 FOXQ1细胞浆出现黄色至棕黄色颗粒 （图1），β-catenin在NSCLC组织中主要于细胞质或细胞核内呈现黄色至棕黄色颗粒 （图2）。NSCLC组织中FOXQ1和β-catenin阳性表达率均明显高于对应癌旁组织，差异有统计学意义（均 P＜0.05）。 详见表 1。

图2 β-catenin在NSCLC组织中的阳性表达（En Vision×400）

2.2 FOXQ1和β-catenin表达与NSCLC临床病理因素的关系 随着NSCLC临床分期进展及发生淋巴结癌转移，FOXQ1和β-catenin蛋白阳性表达率进一步升高，差异有统计学意义（P＜0.05），而在不同年龄、性别、组织学类型及分化程度间的表达差异无统计学意义 （P＞0.05）。详见表2。

表2 FOXQ1和β-catenin表达与NSCLC临床病理因素的关系（n，%）

2.3 NSCLC组织中FOXQ1和β-catenin表达的相关性 60例NSCLC组织中FOXQ1和β-catenin表达共阳性者36例，共阴性者15例，NSCIC组织中FOXQ1 和 β-catenin 表达呈正相关（r＝0.662，P＜0.01）。

表3 NSCLC组织中FOXQ1和β-catenin表达的相关性

3 讨论

FOXQ1是FOX超家族的成员之一，广泛存在于人体的多种组织和器官，参与胚胎干细胞和脊椎动物的发育过程。FOXQ1定位于6p25.3，仅包含1个外显子，编码403个氨基酸残基的蛋白质。FOXQ1通过靶基因启动子区域的GC盒等核心元件，调节基因转录，参与细胞周期、细胞信号传导等多种生物学功能[8]。FOXQ1与肿瘤关系的研究近年来备受关注。研究证实，FOXQ1在大肠癌[9]、胃癌[10]等多种恶性肿瘤中呈高表达，与肿瘤的分化程度、TNM分期和淋巴结转移密切相关，并且FOXQ1高表达者预后差。Pei等[11]报道，与癌旁组织比较，FOXQ1在食道癌组织中呈高表达。FOXQ1过度表达促进食道鳞癌肿瘤细胞的增殖，而沉默FOXQ1表达能预防食管癌细胞增殖。FOXQ1可以作为转录抑制因子结合到CDH1启动子并阻止其转录。因此，FOXQ1可作为癌基因，通过负调节CDH1促进食管癌细胞的增殖和转移。本研究显示，NSCLC组织中FOXQ1表达率明显高于癌旁正常组织 （P＜0.05），与文献报道[10-11]一致。通过分析FOXQ1表达与NSCLC临床病理因素的关系，结果发现FOXQ1蛋白表达在NSCLC患者不同临床分期和淋巴结是否转移间的差异有统计学意义（P＜0.05），而在患者不同年龄、性别、组织学类型及分化程度上差异无统计学意义（P＞0.05）。与一些文献报道“FOXQ1表达与肿瘤的分化程度有关”不一致，可能与不同部位来源的肿瘤有关[9-10]。表明FOXQ1蛋白表达越高，肿瘤淋巴结相对更容易发生转移，且临床分期更高，预后较差。

β-catenin是一种连接蛋白，主要表达于细胞膜，参与细胞间的连接。由于游离的β-catenin在细胞质中经磷酸泛素化，进而被蛋白酶体水解，因此始终保持在较低水平[12]。而在病理情况下，Wnt信号通路被激活时，起着向细胞核传递信号的作用。β-catenin在细胞膜中的正常表达下降，而在细胞浆和细胞核中异常增多，参与肿瘤细胞增殖、侵袭和转移过程，分化程度越低的肿瘤组织中βcatenin的异常表达率越高[13]。本研究中β-catenin在NSCLC组织中的异常表达率显著高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。β-catenin异常表达在NSCLC患者不同临床分期和淋巴结是否转移间的差异有统计学意义（P＜0.05），而与患者年龄、性别、组织类型及分化程度无关。提示β-catenin在胞质或胞核的异常表达与NSCLC的发生、淋巴结转移及临床分期密切相关。

Spearman等级相关分析结果显示，NSCLC组织中FOXQ1和β-catenin表达呈正相关，是一对协同作用的因素，提示FOXQ1和β-catenin在NSCIC的发生、发展过程起正向调控作用。ChIP和荧光素报告实验显示[14]，TCF-4高度保守的结合区域（TCAAAG）可结合FOXQ1基因启动子区域，直接导致β-catenin启动FOXQ1基因的转录。故βcatenin通过调控FOXQ1在肿瘤的发生、进展中发挥作用，这也提示FOXQ1有望成为NSCLC新的治疗靶点。

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