血清HSP90α和VEGF在原发肝癌中的表达及临床意义

宋海涛 刘国香 盛玉龙 张丹丹 胡佳璐 路中

血清HSP90α和VEGF在原发肝癌中的表达及临床意义

宋海涛 刘国香 盛玉龙 张丹丹 胡佳璐 路中

目的研究血清人热休克蛋白90α（HSP90α）和血管内皮生长因子（VEGF）在原发肝癌患者中的表达水平及对原发肝癌早期诊断的临床意义。方法通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定53例原发初诊肝癌患者、40例肝硬化患者及50例健康体检者的血清HSP90α和VEGF水平，用受试者工作特征曲线（ROC）比较HSP90α和VEGF相对于AFP诊断原发性肝癌的价值。结果相较于肝硬化组和对照组，血清HSP90α和VEGF在肝癌组中的表达水平较高（P＜0．05）；相较于对照组，同期住院的肝硬化组患者血清HSP90α和VEGF的水平较高（P＜0．05）。血清HSP90α和VEGF诊断原发性肝癌的敏感度均高于甲胎蛋白（AFP）。两种联合检测的敏感度和特异性为0．823和0．731，较其中任一种均有提高。ROC曲线表明联合检测的曲线下面积（AUC），高于其中一种肿瘤标记物检测的AUC。结论血清HSP90α与VEGF在肝癌的诊断中敏感度跟特异性均高于AFP；血清HSP90α与VEGF的联合检测可协助AFP提高检出原发性肝癌的可能性。

原发性肝癌；人热休克蛋白90α；血管内皮生长因子

过去二十年里，与肝癌相关的年度死亡率增加，肝癌已成为第二大全球癌症相关死因[1]。在我国，每年约有近四十万人死于肝癌，占全球因肝癌死亡总人数的半数以上，男性死亡率（37.4/100 000）高于女性（14.3/100 000）[2]。因此肝癌是不仅是全球更是我国的主要公共卫生问题。研究表明，约80%的肝癌患者曾有乙型肝炎病毒（HBV）或丙型肝炎病毒（HCV）感染史，特别是在确定的肝硬化或晚期纤维化的情况下[3]。因此按时对肝硬化患者进行肝癌筛查，是很有必要的。甲胎蛋白（alphafetoprorein，AFP）作为肝癌的肿瘤标志物使用最为广泛，但因其灵敏度和特异度不高，并且不推荐用于肝癌的高危人群[4]，寻找弥补或替代AFP不足的肝癌肿瘤标志物已成为肝癌早期诊断的重要工作。本研究通过检测原发肝癌患者血清中AFP，人热休克蛋白90α（HSP90α）和血管内皮生长因子（VEGF）浓度水平，研究血清HSP90α和VEGF在原发肝癌的表达及其相关临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集潍坊医学院附属医院2016年1月—2017年1月原发性肝癌住院患者53例纳入肝癌组，其中男性40例，女性13例；年龄30～75岁，平均（50.3±8.1）岁。肝硬化组为40例同期住院的肝硬化患者；对照组为50例同期住院的健康体检者。肝硬化组患者男性21例，女性19例；年龄36～80岁，平均（46.4±7.8）岁。对照组男性31例，女性19例；年龄18～80岁，平均（48.0±7.5）岁。肝癌组患者均为初治，并经肝穿刺或术后病理诊断明确诊断为原发性肝癌。3组临床资料之间比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有入组患者于清晨空腹抽取静脉血5 ml，存于乙二胺四乙酸（EDTA）试管，人工摇匀，在4℃离心机2 500 R离心15 min，取2 ml上层血清置于冷冻管。完成上述操作后，放置于-80℃冰箱以备后续使用。为使平衡温度，所有血清标本于测试开始前放置于4℃～8℃的冰箱内进行复温。AFP检测采用罗氏E601电化学发光检测系统及配套试剂。HSP90α和VEGF采用酶联免疫法（ELISA）检测，HSP90α与VEGF试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.3 统计学方法

所得数据采用SPSS 24.0软件进行统计分析，非正态分布数据用P50（P25～P75）表示，多组间比较采用秩和检验进行比较，并采用Kruskal-Wallis检验进行两两比较，ROC曲线用于确定HSP90α、VEGF诊断肝癌的阈值，并比较其在肝癌诊断中的敏感度和特异性，P＜0.05，提示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3种血清标志物在3组血清中的浓度比较

肝癌组患者血清AFP、HSP90α和VEGF的浓度高于肝硬化组和对照组（P＜0.05）；肝硬化组患者血清HSP90α和VEGF浓度高于对照组（P＜0.05），AFP的浓度在肝硬化组患者和对照组患者间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 三组肿瘤标志物的血清浓度比较P50（P25～P75）

2.2 4种肿瘤标志物诊断原发性肝癌的价值比较

3种标志物对诊断原发性肝癌的敏感度依次分别为HSP90α（0.811）VEGF（0.755）和AFP（0.698）；特异性由高到低依次为 VEGF（0.660）、HSP90α（0.720） 和 AFP（0.580）。 其 中HSP90α和VEGF的敏感度和特性高于AFP（P＜0.05）。两种标记物联合检测的敏感度和特异性为0.823和0.731，高于任何一种标志物（P＜0.05），见表2。通过绘制ROC曲线计算联合检测的曲线下面积（AUC）为0.817，高于其中单独任一种肿瘤标志物的AUC，见图1。

表2 4种肿瘤标志物诊断原发性肝癌的价值比较

图1 4种肿瘤标志物检测原发性肝癌的ROC曲线

3 讨论

肝癌是第六大全球常见癌症，占男性第五位（占总数的7.5%），女性第九位（占总数的3.4%）。每年诊断出约78 200例新病例。肝癌预后非常差（总体死亡率为发病率的95%）。最为常见肝癌病理类型是肝细胞癌（HCC），还有其他类型的肝癌，如肝胆管细胞癌和混合型肝癌。约80%的肝癌病例是由乙型肝炎病毒（HBV）和（或）丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的，特别是在有肝硬化或晚期肝纤维化的情况下，发生肝癌可能性增大。肝硬化是肝癌发展的最大最直接风险因素，合并肝硬化的患者占肝原发性肝癌患者的70%～90%。因此，肝癌的早期诊断非常重要。

AFP是目前对原发性肝癌筛选、检测和随访最常用的指标。但有充足的研究分析表明，AFP检测缺乏足够的敏感性和特异性[5-7]。AFP水平尤其是在肝癌早期呈现低敏感性，而在肝硬化患者或慢性肝炎或胆管癌等情况下AFP却可为阳性。因此AFP对原发性肝癌的诊断、特别是早期诊断，是不让人满意的。VEGF在血管生成中起了刺激内皮细胞的增殖和迁移，增加血管通透性的重要作用。而实体肿瘤的发展与血管生成密切相关[8]。HSP90α参与PI3KAkt信号通路和许多其他癌症相关途径，并与肝癌转移行为密切相关。HSP90α具备作为肝癌的潜在生物标志物的潜质[9]。

本研究通过检测53例原发性肝癌患者血清AFP、HSP90α和VEGF的水平 ，结果显示，相比于健康对照组，3种肿瘤标志物在肝癌患者血清中均出现升高，其中HSP90α和VEGF的诊断敏感度和特异性较高。在肝硬化患者的血清中，血清AFP、HSP90α和VEGF水平也出现了升高，但是与健康对照组患者比较，只有HSP90α和VEGF的升高与对照组比较差异具有统计学意义，而AFP的升高无统计学意义。ROC曲线分析表明HSP90α和VEGF的AUC均高于AFP，分别达到0.746和0.776，通过联合2种标志物检测，可增加其诊断优势，曲线下面积达到0.817，可见HSP90α和VEGF联合检测提高了原发性肝癌的检出率。

综上所述，血清HSP90α和VEGF的检测可协助AFP诊断原发性肝癌，联合HSP90α和VEGF可提高原发性肝癌的检出率。HSP90α和VEGF对肝硬化也具有一定的诊断价值。

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The Expression and Clinical Significance of Serum HSP90 Alpha and VEGF in Primary Liver

SONG Haitao LIU Guoxiang SHENG Yulong ZHANG Dandan HU Jialu LU Zhong Department of Oncology, Affiliated Hospital of Weifang Medical University, Weifang Shandong 261031, China

ObjectiveTo study the expression level of HSP90 alpha(HSP90 alpha) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in patients with primary liver cancer and the clinical significance of early diagnosis of primary liver cancer.MethodsSerum HSP90 alpha and VEGF levels were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in 53 patients with primary liver cancer, 40 patients with cirrhosis and 50 health checkers, and the value of HSP90 alpha and VEGF in the diagnosis of primary hepatocellular carcinoma was compared with receiver operatingcharacteristic curve(ROC).ResultsCompared with the liver cirrhosis group and the control group, serum HSP90 alpha and VEGF were markedly higher in the primary liver cancer group (P ＜ 0.05). Compared to the control group, the serum HSP90 alpha and VEGF were markedly higher in the patients with liver cirrhosis in the same period (P ＜ 0.05). In the sensitivity of the diagnosis of primary liver cancer, serum HSP90 alpha and VEGF were better than the AFP. The sensitivity and specificity of the joint detection of two tumor markers were 0.823 and 0.731, which were higher than any of them. The ROC indicates that the area under the curve (AUC)of the combined assay was significantly higher than that of one of the tumor markers.ConclusionThe sensitivity and specificity of serum HSP90α and VEGF in the diagnosis of hepatocellular carcinoma were higher than that of AFP. The combination of serum HSP90 alpha and VEGF can help AFP significantly improve the likelihood of detection of primary liver cancer.

primary liver cancer; HSP90α; VEGF

R575

A

1674-9316（2017）22-0044-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．22．021

山东省潍坊市科技发展计划项目（名称：骆驼蓬碱调控PPARγ途径逆转慢性肝病肝纤维化的机制研究 编号：B17112-068）

山东省潍坊医学院附属医院肿瘤内科，山东 潍坊 261031通信作者：路中