复方降血脂丸质量标准研究

于士龙 ，张汉道 ，程 越 ，韩瑞贝 ，汪 宇

（1.中国人民解放军第四六三医院，辽宁 沈阳 110042； 2.中国人民解放军沈阳军区空军七 五医院，辽宁 沈阳 110040； 3.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110046）

复方降血脂丸质量标准研究

于士龙1，张汉道2，程 越2，韩瑞贝3，汪 宇1

（1.中国人民解放军第四六三医院，辽宁 沈阳 110042； 2.中国人民解放军沈阳军区空军七 五医院，辽宁 沈阳 110040； 3.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110046）

目的建立复方降血脂丸的质量标准。方法对方中丹参、决明子、何首乌、山楂等进行薄层色谱（TLC）鉴别；采用高效液相色谱（HPLC）法对方中君药决明子所含药效成分大黄酚进行含量测定。结果TLC法斑点显色清晰，重复性、分离度均较好；大黄酚质量浓度在 1.91～122.28 g／mL 范围内与峰面积线性关系良好，r＝0.999 6（n＝7）；平均加样回收率为 108.01% ，RSD 为 1.16% （n＝6）。结论该研究中确立的定性、定量检测方法简便易行，重复性好，结果准确可靠，可用于复方降血脂丸的质量控制。

复方降血脂丸；丹参；决明子；何首乌；山楂；大黄酚；薄层色谱鉴别法；高效液相色谱法；含量测定；质量标准

复方降血脂丸为中国人民解放军沈阳军区空军七○五医院研制的院内制剂，由决明子、丹参、何首乌、山楂等中药组方，具有清肝明目、滋阴降火、消食解郁功效，临床主要用于降低血胆固醇、三酰甘油水平和降血压。但该制剂的现有质量标准未对其质量进行有效控制，为加强制剂的质量控制，确保患者用药安全有效，笔者对方中全部成分进行了薄层鉴别研究，最终选取了5种分离度高、重复性好的成分列入质量标准。此外还建立了君药决明子中大黄酚含量的测定方法，作为本制剂的定量指标。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦1260型高效液相色谱仪，二极管阵列检测器（DAD），Chemstation工作站（安捷伦公司）；KX －1730型超声清洗器（北京科玺超声波清洗机有限公司，功率为 40 kHz）；MS105DU型电子分析天平（Mettler Toledo公司，精度为0.1 mg）；JA5003型电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司，精度为 0.01 mg）；EYELA N－2100型旋转蒸发仪（日本东京理化株式会社）。

1.2 试药

大黄酚对照品（批号为110773－201313）、山楂对照药材（批号为120947－201210）、决明子对照药材（批号为 120945－201206）、何首乌对照药材（批号为120925－201107）、丹参对照药材（批号为 121204－201302）均购自中国食品药品检定研究院；复方降血脂丸（水丸，中国人民解放军沈阳军区空军七○五医院自制，批号分别为 20160901，20160915，20161012）；乙腈、磷酸为色谱纯（国药试剂），水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 何首乌[1－2]

取复方降血脂丸5 g，粉碎后加入50 mL乙醇，超声提取60 min，过滤后水浴浓缩至3 mL，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材2 g，粉碎后加20 mL乙醇，同法制得对照药材溶液。按制剂各成分比例取除何首乌药材饮片外的其余药材共5 g，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。取以上3种溶液各20 μL，点于硅胶H薄层板上，分别以二氯甲烷－甲醇（15∶3和20∶1）为展开剂展开，展距分别为3.5 cm和7 cm，在365 nm波长紫外光灯下检视。供试品溶液色谱中，与对照药材溶液色谱相应位置上显相同荧光斑点，阴性对照无干扰。详见图1。

图1 何首乌薄层色谱图

2.1.2 决明子[3－4]

取复方降血脂丸5 g，粉碎后加入30 mL正己烷，超声提取30 min，过滤后水浴浓缩至3 mL，作为供试品溶液。另取决明子对照药材粉末2 g，加15 mL正己烷超声提取30 min，同法制得对照药材溶液。另取何首乌的阴性对照药材、决明子阴性药材和决明子、何首乌双阴性对照药材各5 g，分别加30 mL正己烷超声提取30 min，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。将上述5种溶液各取20 μL，点于硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯 －甲酸（10∶1∶1）为展开剂的有机相展开，在365 nm波长紫外光灯下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同荧光斑点，阴性对照无干扰。详见图2。

2.1.3 山楂[5－7]

取复方降血脂丸5 g，加入20 mL无水乙醇，超声提取30 min，过滤后有机相水浴蒸干，残渣用1 mL无水乙醇溶解，作为供试品溶液。另取山楂药材粉末2 g，按供试品溶液制备方法制得对照药材溶液。按制剂各成分比例取除山楂药材饮片外的其余药材共5 g，同法制成阴性对照品溶液。取上述3种溶液各20 μL点于硅胶G薄层板上，以甲苯 －乙酸乙酯－甲酸（20∶4∶0.5）为展开剂，取出并挥干溶剂后喷以硫酸乙醇（10%）显色剂，加热显色。分别在365 nm波长紫外光灯和日光下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上相同荧光斑点，阴性对照无干扰。详见图3。

图2 决明子薄层色谱图

图3 山楂薄层色谱图

2.1.4 丹参[8－9]

取复方降血脂丸5 g，粉碎后加入70%乙醇30 mL，超声提取30 min，过滤并水浴蒸干，残渣加入15 mL水并用稀盐酸调pH至2，水相用乙酸乙酯振荡萃取（3次，每次15 mL），有机相水浴蒸干，残渣用1 mL无水乙醇溶解，作为供试品溶液。取丹参药材粉末2 g，按供试品溶液制备方法制得对照药材溶液。按制剂各成分比例取除丹参药材饮片外的其余药材共5 g，同法制得阴性对照品溶液。取上述3种溶液各20 μL点于硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（8∶10∶1）为展开剂展开，取出并挥干溶剂后，用3%三氯化铁乙醇溶液显色。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同荧光斑点，阴性对照无干扰。详见图4。

2.2 大黄酚含量测定[9－10]

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 －1 mL ／L 磷酸溶液（72 ∶28）；检测波长：254 nm；流速：1.0 mL ／min。

图4 丹参薄层色谱图

2.2.2 溶液制备

对照品溶液：取大黄酚对照品约2.5 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混匀，即得大黄酚对照品溶液（244.56 μg ／mL）。

供试品溶液：取本品丸剂（批号为20160901）1.5 g粉碎，精密称定，置茄型瓶中，加入50 mL甲醇，称定总质量，将茄型瓶于70℃下加热回流2 h，室温冷却，用甲醇补足减失的质量，摇匀后过滤，取25 mL滤液，30℃下减压浓缩至干，向瓶中加入30 mL稀盐酸，并于100℃加热回流1 h，冷却，向瓶中加入30 mL氯仿，于80℃加热提取30 min，冷却后分液，水相用氯仿萃取（每次30 mL，共4次），合并有机相并减压浓缩至干，残渣加甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，即得。

阴性对照品溶液：取复方降血脂丸处方中缺决明子的其他药材，按本制剂的制法制备阴性样品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验：取 2.2.2 项下 3 种溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，色谱图见图5。结果供试品溶液在与对照品溶液相同保留时间（21 min）处，有相应的色谱峰出现，而阴性对照品溶液无此色谱峰出现，阴性对照无干扰。

线性关系考察：按对照品溶液制备方法制得对照品贮备液（244.56 μg ／mL），精密量取 2.5 mL，置 5 mL 容量瓶中定容，制得标准溶液1；精密量取2.5 mL标准溶液1，置5 mL容量瓶中定容，制得标准溶液2；以此类推，同法制得标准溶液 3，4，5，6，7。标准溶液质量浓度依 次 为 122.28，61.14，30.57，15.29，7.64，3.82，1.91 μg ／mL。分别取各标准溶液 10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标建立线性回归方程，得 Y＝38 076 X ＋74.16，r＝0.999 6（n＝7）。结果表明，大黄酚质量浓度在 1.91 ～122.28 μg／mL 范围内与峰面积线性关系良好。

图5 大黄酚含量测定高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取2.2.2项下同一对照品溶液10 μL，按拟订色谱条件连续进样 6次，测定。结果的RSD为0.17%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取复方降血脂丸样品，依法制备供试品溶液，室温下于 0，1，2，6，12，24 h 时进样 4 次，记录色谱图，计算大黄酚峰面积。结果的 RSD为 1.50%（n＝6），表明供试品溶液在室温下24 h内稳定性较好。

重复性试验：取批号为20160915的复方降血脂丸样品 5份，每份约 1.5 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制成5份样品溶液，滤过，分别精密吸取滤液10 μL，测定大黄酚含量。结果的 RSD 为 0.46%（n ＝5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取质量浓度为 7.7 μg／mL的样品5 mL，共6份，置10 mL容量瓶中，分别加入质量浓度为 30.57 μg／mL 的大黄酚对照品溶液 1 mL，用甲醇定容至10 mL，制成供试品溶液，各精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 大黄酚加样回收试验结果（n＝6）

2.2.4 样品含量测定

取 3批样品各 1.5 g，精密称定，按 2.2.2项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果批号为20160901，20160915，20161012的样品中大黄酚的含量依次为8.28，7.05，8.90 μg ／g。

3 讨论

高脂血症因体内脂质代谢紊乱引起，可直接引起一些严重危害人体健康的疾病。传统中医认为，高脂血症属于中医“污血”病范畴。污血者，不洁之血，乃饮食水谷之浊气、水谷不化之痰湿、癖滞不通之血液结于脉中而成[11－12]。

复方降血脂丸为纯中药制剂，由决明子等4味药材组方。现代研究显示，蒽醌类化合物是决明子的主要成分之一，此类成分能有效抑制肠道吸收胆固醇，增加其排泄，并通过反馈调节低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）代谢的方式，达到降低血清胆固醇水平的目的[13－14]。故本研究中选择决明子中的蒽醌类成分大黄酚作为定量检测指标，以实现对本制剂的质量控制。此外，方中何首乌也含有蒽醌类成分，按常规方法进行鉴别，阴性对照干扰较严重。因此，参考文献[15]及药典所载清脑降压片中决明子的鉴别方法，采用双阴性对照的方法进行鉴别，在有效排除何首乌干扰的同时，可同时鉴别何首乌和决明子2味药材，大大提高了效率。

在鉴别丹参的过程中，首先参照2015年版《中国药典(一部)》，对其中的丹参酮ⅡA进行鉴别，但由于丹参酮ⅡA稳定性较差，在加热提取过程中会造成分解损耗，导致鉴别结果重复性较差。因此参考文献[8]选用丹参中另一成分原儿茶醛进行特征鉴别，通过调整展开剂比例，鉴别结果符合要求。

综上所述，本研究中对中药复方降血脂丸处方中4种成分（决明子、丹参、何首乌和山楂）进行了定性鉴别，同时采用高效液相色谱（HPLC）法对君药决明子中的大黄酚进行了定量分析，操作简便、快速，检测结果符合要求，结合原有质量标准可更好地实现对复方降血脂丸的质量控制。

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Quality Standard of Fufang Jiangxuezhi Pills

Yu Shilong1， Zhang Handao2， Cheng Yue2， Han Ruibei3， Wang Yu1
（ 1.Hospital 463 of PLA， Shenyang， Liaoning， China 110042； 2.No.705 Hospital of Shenyang Military Area Air Force Command of PLA， Shenyang，Liaoning，China 110040； 3.Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang， Liaoning，China 110046）

Objective To establish the quality standard of Fufang Jiangxuezhi Pills.Methods TLC method was adopted for the qualitative identification of Salvia miltiorrhizae， Catsia tora， Fallopia multiflora and Crataegus pinnatifida.HPLC method was adopted to determine chrysophanolin Catsia tora.Results TLC spotswere clearwith good reproducibility and separation.The linearrelationship of chrysophanol content was good in the range of 1.91 － 122.28 μg ／mL， r＝ 0.999 6(n ＝ 7），the average recovery was 108.01% ，and the RSD was 1.16% （n ＝ 6）.Conclusion The qualitative and quantitative method is simple，accurate and reliable，which can be used for quality control of Fufang Jiangxuezhi Pills.

Fufang Jiangxuezhi Pills；Salvia miltiorrhizae； Catsia tora； Fallopia multiflora； Crataegus pinnatifida；chrysophanol；TLC；HPLC；content determination；quality standard

R284.1；R285.5

A

1006－4931(2017)20－0025－04

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.007

于士龙，男，满族，硕士研究生，主管药师，研究方向为药物分析，（电话）024－28845262（电子信箱）264305216＠qq.com。

汪宇，女，汉族，博士研究生，主任药师，研究方向为药学，（电话）024 － 28845259（电子信箱）ysl.ufo＠ qq.com。

2017－05－10；

2017－06－28)