二磷酸氯喹在血型鉴定和配血中的运用

李庆端，侯丽华

(漳州市中医院检验科，福建 漳州 363000)

二磷酸氯喹在血型鉴定和配血中的运用

李庆端，侯丽华

(漳州市中医院检验科，福建 漳州 363000)

目的 探讨红细胞自凝或直接抗人球蛋白Coombs试验阳性患者血型鉴定和交叉配血不符的临床用血策略。方法采用20%二磷酸氯喹在45℃条件下对患者红细胞进行热放散试验，制备裸细胞测定血型和交叉配血。结果 利用20%二磷酸氯喹处理过的患者裸细胞正定型与反定型血型相符；交叉次侧为阴性。结论 采用20%二磷酸氯喹在45℃条件下对患者红细胞进行热放散试验制备裸细胞鉴定血型和交叉配血是对红细胞自凝或直接抗人球蛋白Coombs试验阳性患者鉴定血型和交叉配血的一种补救方法，为解决临床疑难输血多一条路径。

血型鉴定；交叉配血；热放散试验；抗体筛查

临床输血的安全主要取决于正确的血型鉴定和交叉配血以及不规则抗体的筛查；在实际操作中，患者自身红细胞和血浆的问题干扰血型的正确鉴定和交叉配血，给临床用血提出挑战，为了解决这类问题，确保安全，必须拓开思路寻求合符临床安全输血的新对策。

1 资料与方法

1.1 2011年至2016年我院红细胞自凝患者13例，直接抗人球蛋白Coombs试验阳性患者21例。

1.2 试剂来源 血型鉴定卡和Coombs检测卡由德国Diagnostic Grifols，S.A公司生产提供，ABO正定型血型单克隆抗体、反定型检测用ABO标准红细胞由长春博迅生物制品有限公司生产提供，凝聚胺试剂盒由合肥天一生物技术研究所提供，抗体筛查标准红细胞Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ（三人份O红细胞）由上海血液生物医药制品有限公司提供。20%二磷酸氯喹[1]：（自备）取二磷酸氯喹20g，加生理盐水至100ml，用 1mol/L NaOH 调 pH 至 5.1，2～8℃冷藏备用。

1.3 仪器德国Diagnostic Grifols，S.A公司生产提供的卡式离心机和卡式孵育仪；可调控水浴箱由上海医疗器械有限公司提供，血库专用离心机有湖南湘雅医疗器械有限公司提供。

1.4 方法

1.4.1 卡式血型鉴定、试管法血型鉴定、凝聚胺交叉配血（MPT）、Coombs凝胶微柱交叉配血（MGT）、不规则抗体筛查、直接抗人球蛋白检测均严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4.2 裸细胞制备患者EDTA-K3抗凝红细胞1ml加入4ml20%二磷酸氯喹混匀置45℃水浴箱中，每隔10s钟混匀一次，孵育30min趁热1000g离心3min去除二磷酸氯喹再用生理盐清洗4次备用。取25μl配成2.5%的红细胞悬液直接涂片高倍镜下镜检，红细胞成单个分散；用Coombs凝胶微柱做直接抗人球蛋白试验，结果阴性说明裸细胞制备成功。

2 结果

2.1 红细胞自凝患者13例，直接抗人球蛋白Coombs试验阳性患者21例的血型不规则抗体检测均为阴性；用于交叉配血的供血血型不规则抗体检测均为阴性。

2.2 红细胞自凝患者13例，EDTA-K3抗凝血未经处理直接检测血型，正反定型不符12例，经20%二磷酸氯喹处理过的患者裸细胞正定型与反定型血型相符13例（见表1）；其中4例临床需用血的，未经处理直接用凝聚胺法和微柱凝胶法配血，凝聚胺法4例均出现次侧凝聚，微柱凝胶法出现1例次侧凝聚；经20%二磷酸氯喹处理过的患者裸细胞做次侧管交叉配血，凝聚胺法和微柱凝胶法均未出现凝集，4例患者输血后均未出现不良反应（见表 2）。

表1 13例红细胞自凝患者红细胞处理前后血型鉴定结果

2.3 直接抗人球蛋白Coombs试验阳性患者21例，EDTA-K3抗凝血未经处理直接检测血型，正反定型不符2例，经20%二磷酸氯喹处理过的患者裸细胞正定型与反定型血型相符21例；未经处理直接用凝聚胺法和微柱凝胶法配血，凝聚胺法3例均出现次侧凝聚，微柱凝胶法21例均出现次侧凝聚；经20%二磷酸氯喹处理过的患者裸细胞做次侧交叉配血，凝聚胺法和微柱凝胶法均未出现凝集，21例患者输血后均未出现不良反应 （见表2）。

3 讨论

利用抗原抗体结合的可逆性，通过改变温度和PH的方法使抗体从结合的红细胞表面解脱，暴露出原有血型抗原。采用20%二磷酸氯喹在45℃环境下对红细胞进行放散洗涤，充分去除红细胞表面的黏附物如红细胞自身IgG抗体和吸附在红细胞膜上冷凝素，最大限度上保持红细膜的完整和原有血型抗原的活性，用处理后的红细胞再进行血型正定型，结果可靠。13例红细胞自凝患者红细胞经处理后均能排除红细胞自凝的干扰，ABO正定型与反定型相符，且患者血浆在4℃和37℃环境下不与O型标准红细胞发生凝聚反应，可做出血型鉴定；同样用处理后的红细胞做交叉配血可以排除直接抗人球蛋白Coombs试验阳性患者的红细胞对次侧配血的干扰。红细胞自凝机理复杂，出现红细胞自凝的患者常伴有感染、自身免疫性疾病[8]、恶性肿瘤、妊娠、药物致敏[2]或化学损伤等因素存在，导致红细胞膜结构或膜外周的电子云改变，细胞之间容易发生黏连；或因血浆中存在大量异质性[10]大分子蛋白质（多数为IgM分子）吸附在红细胞膜上，血液离体后置于常温下易引发的红细胞自凝或多凝[7]；冷凝集素的存在是造成血型鉴定困难的主要原因之一[3]。另一方面这些蛋白分子可作为一种异抗原致敏机体产生针对自身红细胞的自身抗体，患者血清中含有大量游离的自身抗体在体外可使细胞凝聚[2]，干扰血型的正定型。自身抗体的存在导致患者直接抗人球蛋白试验阳性，这也是交叉配血时微柱法次管出现阳性结果的主要原因[3，5，6]。 细菌、肿瘤或药物的代谢产物黏附或作用红细胞膜表面，使红细胞抗原性发生改变，出现类血型抗原物质如类B抗原，与血型鉴定试剂中相应的抗血清反应，出现凝聚反应，干扰血型正定型鉴定[4，6，9，11]。 且这些代谢产物在体内多数为分子量较小，以半抗原形式存在，黏附在红细表面，在血流的冲击下不易使红细胞出现凝集反应，在体外适当的条件（静置、离心或其他介质）下出现凝聚反应，干扰血型正定型和次侧配血。采用20%二磷酸氯喹在45℃条件下对患者红细胞进行热放散和生理盐水充分清洗，其目的是彻底去除红细胞表面吸附的自身抗体和外来物质如药物分子、肿瘤、细菌代谢产物等，充分暴露其原始血型抗原。本实验中，需要输血的25例患者的血型不规则抗体均为阴性，所用于交叉的供者血型不规则抗体均为阴性，可排除因血液中存在血型不规则抗体引起的交叉配血不符[12，14]。用处理后的红细胞做血型正定型和交叉次侧配血，能达到预期的结果，血型鉴定正反相符，交叉配血主次相容，输血后无出现不良反应[13，15]。用20%二磷酸氯喹处理后的红细胞做血型正定型和交叉配血试验可以减少因血型鉴定出现正反定型不合和交叉配血主次侧不符的困惑。本方法简单实用，成本低，可作为解决日常临床疑难输血另一佐证。

表2 患者红细胞处理前后次侧交叉配血结果

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R457.1+1

A

1674-1129(2017)05-0812-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.064

2017-04-17；

2017-08-09)