核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用比较分析

李鑫 季玲 季宇凡 余倩

核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用比较分析

李鑫 季玲 季宇凡 余倩

目的对比核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用。方法收集10 000份无偿献血者血液标本作为测试对象，制作成三管标本，均在4小时内进行离心处理，实施酶联免疫检测技术和核酸检测技术。结果10 000份血液标本中，NAT（＋）为61份，NAT（-）为9 939份，EIA（＋）为57份，EIA（-）为9 943份，其中5份为EIA（-）NAT（＋），且均HBV DNA定量检测，可发现大部分结果＜3．0×104拷贝/ml，且经NAT试剂再次检测后，仍为阳性。结论核酸检测技术在血液筛检中诊断价值性更高，能够提高HBV检测灵敏度。

核酸检测技术；酶联免疫检测技术；血液

血液传染病是采血机构重点监测项目，也是血液安全的最后一道防线。早期在检测血液标本时，常使用酶联免疫吸附测定法，其能够降低输血途径传播病毒风险，但近年来，随着诊断技术的改进，核酸检测技术也开始广泛用于临床，其能够缩短血液感染病毒检测的“窗口期”，但目前尚未统一具体检测方式，且不同学者存在较大争议[1-2]。为了促使血液筛查工作的顺利实施，本文对比了不同技术在血液筛检中的临床意义，具体见下文。

作者单位：张家港市红十字血站血液检验科，江苏 张家港 215600

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月12日—2016年1月12日收集的10 000份无偿献血者血液标本作为实验对象。每个献血者共收集三管标本，1管为EDTA-K2抗凝的PPT真空采血管，用于核酸检测；2管为分离胶促凝真空采血管用于EIA检测与谷丙转氨酶检测：3管为EDTA-K2抗凝真空采血管用于血型检查。在收集血液样本后，均在4小时内进行离心处理。

1.2 方法

方法和结果判定：使用全自动酶免后处理仪对献血者实施HbsAg、HCV、HIV、TP的ELISA检测，再进行样本的核酸检测，核酸检测主要有以下几个步骤：（1）使用Hamilton MICROLAB STAR混样仪对样本进行混样以及分装质控品；（2）利用核酸提取仪CAP实现全自动提取样本核酸和预备PCR反应体系；（3）利用核酸扩增仪CTM实现全自动核酸扩增和PCR产物的实时监测和鉴别。结果可以通过罗氏核酸检测系统的软件直接进行读取。

核酸试剂（NAT）阳性样本拆分：由于核酸标本的检测是采用混样检测模式，为了找到真正的阳性血液样本，就必须进行混合样本拆分。拆分设计方法为：将混样阳性原始管所包含的6个样本挑出（罗氏核酸检测采用6样本混样），然后采用次级混样通过Hamilton MICROLAB STAR混样仪进行拆分，次级混样后每个混样中仅包含一个样本。以此方式找出反应性的单个样本。

试剂质量控制：（1）每批试验都包含一个阴性质控（MPX（-）C，v2.0）以及三个阳性质控（MPX M（+）C，v2.0，MPX O（+）C，v2.0和MPX 2（+）C，v2.0）。

（2）如果该批试验质控有效，则指认其该批试验“完整，有效”。如果某批试验中任一质控品无效，则整批次试验均无效，且必须重做。核酸检测系统的软件会根据质控失败自动认定结果为无效。

（3）样本设有内参（IC）：①对非反应性的样本，其内参必须有效，否则此样本的试验结果无效。②对反应性的样本，其内参可以有效也可无效。该样本需按相关要求处理。

2 结果

2.1 分析EIA和HbsAg NAT检测结果

10 000份血液标本中，5份为EIA（-）NAT（＋）。如表1所示。

2.2 5份样本核酸定量检测结果

经NAT试剂再次检测后，仍为阳性，且通过HBV DNA定量检测结果＜3.0×104拷贝/ml。如表2所示。

表1 分析EIA和HbsAg NAT检测结果

表2 5份样本核酸定量检测结果

3 讨论

荧光定量PCR技术能够提高检测特异性，降低污染扩增产物机会，属于一种将光化学、分子杂交、基因扩增融为一体的新型技术，是直接检测核酸的方式，能够更为精准的测定扩增产物[3-4]。PCR仪的线性范围较宽，敏感度高，在范围内定位较为准确，且能够反映HBV病毒复制水平，其灵敏度明显高于斑点杂交法[5-6]。酶联免疫检测方法以抗原、抗体为检测对象，有较长的“窗口期”，特别是以抗体为检测对象的感染标志物，从病毒进入体内刺激产生抗体，到抗体足以被检出需要更长的时间，因此“窗口期”漏检是目前酶联免疫检测最重要的漏检因素[7-8]。而核酸检测技术是检测病原体核酸，与现行的酶联免疫检测方法相比，核酸检测平均可将HBV、HCV和HIV的“窗口期”分别缩短40%、89%和50%。

在本次实验中，可发现HBV ELISA漏诊率为0.05%（5/10 000），经随访1个月后，可发现为ELISA阳性，5份为EIA（-）NAT（＋）中，大部分定量结果为＜3.0×104拷贝/ml，其可能为隐秘性HBV感染，因此NAT检测存在较大意义。同时本次实验中，可发现ELISA和阳性样本中拆分结果是一致的，由此说明，此项检测方式具有较高的敏感性，而核酸的HBV-DNA检出可将乙型肝炎的“窗口期”缩短6～15天，正常情况下，酶联免疫吸附检测HBsAg检出平均时间为56天，NAT与ELISA相比，更灵敏，检测的“窗口期”更短[9-10]。

综上所述，酶联免疫检测技术和核酸检测技术均具有诊断意义，但在血液筛查中，核酸检测技术能够及时发现血液传播的病毒，保证输血安全性。

[1]何子毅，余霖，王庆，等.核酸检测技术在不同血液安全筛查模式的应用分析[J].中国输血杂志，2016，29（7）：693-695．

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[9]吕学琴，刘燕，尹向丽，等.核酸扩增检测技术和酶联免疫吸附在人类免疫缺陷病毒检测中的应用价值[J].兵团医学，2013，35（1）：27-29．

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读者 作者 编者

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Nucleic Acid Detection Technology and Enzyme-linked Immune Detection Technology in the Initial Application of Comparative Analysis of Blood Screening

LI Xin JI Ling JI Yufan YU Qian Hematology Laboratory, Zhangjiagang Red Cross Blood Station, Zhangjiagang Jiangsu 215600, China

ObjectiveTo compare the application of nucleic acid detection technology and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in blood screening.MethodsA total of 10 000 blood samples from blood donors were collected and tested as three test specimens. The samples were collected and centrifuged in 4 hours. Enzyme-linked immunoassay and nucleic acid detection were performed.ResultsThe results of 10 000 blood samples, NAT (+) 61 samples, NAT (-) 9 939 samples, EIA(+) 57 samples, EIA (-) 9 943 samples, of which 5 samples were EIA(-) NAT (+), and HBV DNA quantitative detection, which can be found in most of the results 3.0×104copies/ml. After the NAT reagent test again, it is still positive.ConclusionNucleic acid detection technique is more valuable in blood screening, it can improve the sensitivity of HBV detection.

nucleic acid detection technology; enzyme-linked immunosorbent assay; blood

R446

A

1674-9308（2017）21-0056-02

10．3969/j．issn．1674-9308．2017．21．027