炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9水平与脑微出血的相关性研究*

卢俏丽，李 晨△，贾志荣

(1.天津市第五中心医院神经内科,天津 300450；2.北京大学第一医院神经内科，北京 100034)

论著·临床研究

炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9水平与脑微出血的相关性研究*

卢俏丽1，李 晨1△，贾志荣2

(1.天津市第五中心医院神经内科,天津 300450；2.北京大学第一医院神经内科，北京 100034)

目的探讨炎症介质高敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素6(IL-6)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平与脑微出血(CMB)的关系。方法收集非急性缺血性脑血管病患者201例，均行头磁共振成像(MRI)+磁敏感加权成像(SWI)检查，根据SWI结果分为CMB组49例和非CMB组152例，记录两组患者临床资料，检测炎症介质hs-CRP、IL-6及 MMP-9的水平。采用Logistic回归分析hs-CRP、IL-6和MMP-9水平与CMB的关系。结果CMB组患者炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9水平均明显高于非CMB组(P<0.05)。Logistic多元回归分析显示调整了年龄、性别及传统危险因素的影响，炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9[OR值(95%CI)分别为1.745(1.342～2.270),1.223(1.018～1.533),1.284(1.082～1.423),P<0.05)]同样是CMB发生的危险因素。结论炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9水平与CMB密切相关，参与了CMB的发生。

脑出血；C反应蛋白质；白细胞介素6；基质金属蛋白酶9；脑微出血；危险因素；炎症介质

脑微出血(cerebral microbleeding,CMB)是脑内微小血管病变所致的，以含铁血黄素沉积为主要特征的一种脑实质亚临床损伤[1]。以往的报道认为，高血压血管病变、脑淀粉样血管病、既往缺血性脑损伤等造成的脑内微小血管病变是CMB形成的主要原因[2]。高血压血管病变导致的CMB多发生在基底节区，脑叶CMB多与脑淀粉样血管病变有关[1]。研究显示，合并CMB的卒中患者卒中复发风险显著增高[2]。有研究认为CMB灶数量较多时，在运用抗凝、抗血小板、溶栓治疗时自发性出血的风险较高[3]。近一些研究显示炎性反应是导致动脉粥样硬化最重要的机制，且与腔隙性脑梗死及脑白质疏松密切相关，参与了小血管病变的过程[4]。目前炎症过程与微出血的关系研究尚少。本研究旨在分析CMB的相关危险因素，为以后卒中的预防及治疗提供临床依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2013年6月至2015年12月天津市第五中心医院神经内科收治的非急性缺血性脑血管病患者201例。根据磁敏感加权成像(SWI)结果分为两组，CMB组49例，平均年龄(68.6±7.8)岁；无CMB 组152例，平均年龄(61.8±11.1)岁。纳入标准：(1)所有患者均符合中华神经科学会2010年制订的缺血性脑血管病诊断标准；(2)经头颅磁共振成像(MRI)证实，且弥散加权成像(DWI)排除新发脑梗死；(3)年龄在45岁以上；(4)签署知情同意书。排除标准[5]：(1)伴有严重意识障碍、失语的脑梗死后遗症患者；(2)颅脑创伤史；(3)既往脑出血病史；(4)恶性肿瘤;(5)风湿及胶原病；(6)严重内科疾病(脏器功能衰竭)；(7)感染性疾病或服用抗炎药物；(8)高敏C反应蛋白(hs-CRP)>8 mg/L；(9)不同意参加。

1.2方法

1.2.1临床资料收集 记录年龄、性别、体质量、身高、血压、血糖、血脂及有无吸烟史、饮酒史、心脏病史等资料。收缩压大于140 mm Hg或舒张压大于90 mm Hg，或既往有高血压史或正在服用抗高血压药物即诊断为高血压。吸烟史、饮酒史包括过去曾经吸烟、饮酒已戒除或未戒除者。高脂血症：三酰甘油(TG)≥1.7 mmol/L；低度脂蛋白胆固醇(LDL-C)≥3.64 mmol/L；总胆固醇(TC)≥5.7 mmol/L。空腹血糖水平大于或等于7.0 mol/L和(或)餐后血糖大于或等于11.1 mol/L诊断为糖尿病；抗血栓药物包括抗血小板药物及抗凝药物。

1.2.2SWI检查及CMB诊断 采用Philips Achieva 3.0T超导型MRI扫描仪，头颅8通道矩阵线圈,SWI主要参数:三维梯度回波(3DFFE)序列，重复时间(Act TR) 17 ms,回波时间(TE) 24 ms,翻转角5°,视野183 mm×230 mm，矩阵256×203，激励次数1，层厚1 mm，层数100,敏感性因子1.5，扫描时间114 s。SWI图像重建:原始图像层厚1 mm，实时在线技术自动最小密度投影(mIP)重建。重建层厚5 mm，常规扫描直接显示图像，所有图像在工作站上进行对比分析。采用随机双盲法由经验丰富的影像科及神经科医师同时阅片，并参考微出血解剖评定量表(MARS)对微出血进行评价，取得一致意见后记录[6]。CMB的诊断标准[7]：SWI及梯度回波加权成像(GRE-T2WI)序列上表现为1～10 mm低信号，形状为圆形或卵圆形，排除铁、钙沉积，骨影，血管流空信号。腔隙性脑梗死诊断标准:FLAIR序列3～15 mm边界清楚的低密度影像，而T2序列表现为高信号影像，T1序列表现为低信号影像。脑白质病变诊断标准：参照Wahlund 评分分级方法,每侧大脑半球均被划分为5个区域，即额叶、顶枕叶、颞叶、幕下区域(包括小脑和脑干)、基底节区(包括纹状体、苍白球、丘脑、内囊、外囊、岛叶)，每个区域单独评分(0～3分，4个等级)，基底节区域0分为无损伤，1分为1个局限性损伤，2分为多于1个局限性损伤，3分为融合损伤，最终得分为双侧大脑半球各区域评分的总和。

1.2.3炎性标志物检测 (1)hs-CRP水平测定：采用乳酸比浊免疫法检测，于患者入院24 h内取空腹肘静脉血3 mL,注入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，室温下静置0.5～1.0 h后以3 000 r/min离心15 min，离心半径10 cm，分离血清，-20 ℃冰箱保存，定期分批检测。(2)白细胞介素6(IL-6)水平测定：采用双抗体夹心酶联免疫法检测，于患者入院后24 h内取空腹肘静脉血2 mL，凝固后分离血清，于20 ℃保存待测，将血清于测定前置冷水中复融混匀，4 ℃时予3 000 r/min离心15 min，离心半径10 cm，分离血清，-20 ℃冰箱保存，定期分批检测。(3)基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平测定：采用Quantikine试剂盒，ELISA方法检测，于患者入院后24 h内取空腹肘静脉血3 mL,尽快分离血清，低温保存，检测前复融。为保证检测结果准确可靠，每次检测均由检验科同一医师操作，每次检测前同一质控物矫正仪器。

2 结 果

2.1两组临床资料比较 CMB组患者年龄、高血压患病率、收缩压水平、冠心病患病率、腔隙性脑梗死发生率、抗血栓药物使用率及脑白质疏松评分均高于非CMB组(P<0.05)，见表1。

2.2两组炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9水平比较 CMB组患者炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9水平均明显高于非CMB组(P<0.05)，见表2。

表2 两组炎症介质水平比较[M(Q1，Q3)]

2.3CMB与炎症介质hs-CRP、IL-6、MMP-9水平关系的Logistic回归分析 以有无CMB为因变量，将炎症介质hs-CRP、IL-6、MMP-9水平为自变量进行Logistic多元回归分析，结果显示，调整了年龄和性别的影响，炎症介质hs-CRP、IL-6、MMP-9是CMB发生的危险因素。调整了年龄、性别及传统危险因素BMI、吸烟、饮酒、高血压、收缩压及舒张压水平、糖尿病、高脂血症、冠心病、腔隙性脑梗死、抗血栓药物的使用及脑白质疏松评分的影响，炎症介质hs-CRP、IL-6、MMP-9仍是CMB发生的危险因素，见表3。

表3 Logistic回归分析

CMB1：调整了年龄与性别；CMB2：调整了年龄、性别及传统危险因素

3 讨 论

CMB不仅常见于缺血性、出血性卒中患者，而且见于正常老年人群，更为重要的是，CMB可以预测未来缺血性卒中的再发及抗栓患者的出血性卒中的发生[8],因此探寻其发病机制已成为研究热点。既往研究证实炎性反应与脑微血管病变、腔隙性脑梗死和脑白质病变密切相关。本研究进一步明确炎症介质hs-CRP、IL-6和 MMP-9与CMB的关系。

既往研究显示炎症介质hs-CRP、IL-6、IL-18在CMB患者中明显高于非CMB患者，与CMB的位置无关，与小血管病变的严重程度相关，提示炎性反应是微出血的重要的发病机制[5]。有研究发现血清MMP-9水平升高与CMB 密切相关，并且血清MMP-9水平与CMB 呈正相关[9]。又有研究显示卒中患者中hs-CRP、MMP-9与CMB密切相关，同时MMP-9是神经损伤的独立危险因素[10]。本研究结果显示调整了年龄、性别及传统危险因素的影响，炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9仍是CMB发生的危险因素，与上述结果一致。大量研究证实内皮功能障碍和血脑屏障(BBB)的破坏是脑小血管病的主要起始病理表现。IL-6是一种在炎性反应中起重要作用的细胞活素，与脑微出血及脑小血管病密切相关[11]。有研究发现老年人的含铁血黄素沉积于毛细血管周围，外渗的含铁血黄素经扩大的血管间隙迁移，促进炎性反应，导致腔隙梗死的形成，这些发现在某种程度上支持炎性过程，反映了炎性机制导致小血管病和CMB的发生[12]。动物实验结果显示，MMP-9表达增加与慢性血脑屏障损伤关系最为密切[13]。脑缺血再灌注后，MMP表达增加，尤其是MMP-9增加更为显著，MMP-9通过降解细胞外基质，使血脑屏障破坏，血脑屏障通透性增加[14]。上述研究均支持炎性反应参与内皮功能障碍和血脑屏障破坏，导致CMB的发生。

综上所述，炎症介质hs-CRP、IL-6和MMP-9水平升高与CMB密切相关，同时炎性反应参与了CMB的发生。CMB与缺血性卒中及出血性卒中密切相关，CMB病灶越多，患者脑卒中复发风险越高。考虑使用抗血小板聚集、抗凝治疗或溶栓治疗时，最好行常规头MRI+SWI及血炎性标志物检测，判断有无CMB及CMB的严重性，用以指导临床用药及评估出血转化的风险。

[1]Chung CP,Chou KH,Chen WT,et al.Strictly lobar cerebral microbleeds are associated with cognitive impairment [J].Stroke,2016,47(10):2497-2502.

[2]Charidimou A,Kakar P,Fox Z,et al.Cerebral microbleeds and recurrent stroke risk:systematic review and meta-analysis of prospective ischemic stroke and transient ischemic attack cohorts[J].Stroke,2013,44(4):995-1001.

[3]Yamashiro K,Mori A,Shimada Y,et al.Gradient echo T2-weighted magnetic resonance imaging revealing cerebral microbleeds in a patient with microscopic polyangiitis complicated by cerebrovascular disease[J].J Stroke Cerebrovasc Dis,2012,21(8):904.

[4]Hoshi T,Kitagawa K,Yamagami H,et al.Relation between interleukin-6 level and subclinical intracranial large-artery atherosclerosis[J].Atherosclerosis,2008,197(1):326-332.

[5]Miwa K,Tanaka M,Okazaki S,et al.Relations of blood inflammatory marker levels with cerebral microbleeds[J].Stroke,2011,42(11):3202-3206.

[6]Gregoire SM,Chaudhary UJ,Brown MM,et al.The microbleed anatomical rating scale(Mars):reliability of a tool to map brain microbleeds[J].Neurology,2009,73(21):1759-1766.

[7]Charidimou A,Gager HR,Werring DJ.Cerebral microbleed detection and mapping:principles,methodological aspects and rationale in vasculardementia[J].Exp Gerontol,2012,47(11):843-852.

[8]Biffi A,Halpin A,Towfighi A,et al.Aspirin and recurrent intracerebral hemorrhage in cerebral amyloid angiopathy[J].Neurology,2010，75(8):693-698.

[9]杜宇平，张敏，诸兴明.急性缺血性脑卒中患者脑微出血与基质金属蛋白酶9相关研究[J].中华老年心脑血管病杂志，2013，15(1)：90-91．

[10]Koh SH,Park CY,Kim MK,et al.Microbleeds and free active MMP-9 are Independent risk factors for neurological deterioration in acute lacunar stroke[J].Eur J Neurol,2011,18(1):158-164.

[11]Shoamanesh A,Preis SR,Beiser AS,et al.Inflammatory biomarkers,cerebral microbleeds,and small vessel disease:framingham heart study[J].Neurology,2015,84(8):825-832.

[12]Schrag M,Mcauley G,Pomakian J,et al.Correlation of hypointensities in susceptibility-weighted images to tissue histology in dementia patients with cerebral amyloid angiopathy:a postmortem MRI study[J].Acta Neuropathol,2010,119(3):291-302.

[13]Jin R,Yang G,Li G.Molecular insights and therapeutic targets for blood-brain barrier disruption in ischemic stroke:critical role of matrix metalloproteinases and tissue-type plasminogen activator[J].Neurobiol Dis,2010,38(3):376-385.

[14]Turner RJ,Sharp FR.Implications of MMP-9 for blood brain barrier disruption and hemorrhagic transformation following ischemic stroke[J].Front Cell Neurosci,2016(10):56.

Studyoncorrelationbetweenlevelsofhs-CRP,IL-6andMMP-9withcerebralmicrobleeding*

LuQiaoli1,LiChen1△,JiaZhirong2

(1.DepartmentofNeurology,TianjinFifthCentralHospital,Tianjin300450,China；2.DepartmentofNeurology,FirstHospital,PekingUniversity,Beijing100034,China)

ObjectiveTo discuss the correlation between levels of hs-CRP,IL-6 and MMP-9 with cerebral microbleeding(CMB).MethodsA total of 201 of non-acute ischemic cerebrovascular were collected and performed heal MRI+susceptibility-weighted imaging(SWI).The patients were divided into the CMB group(49 cases) and non-CMB group(152 cases) according to the SWI examination results.The clinical data were recorded in the two groups.The levels of inflammatory mediators high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP),interleukin-6 (IL-6) and matrix metalloproteinase-9(MMP-9) were tested.The Logistic regression analysis was used to analyze the relation between the levels of hs-CRP,IL-6 and MMP-9 with cerebral microbleeding.ResultsThe levels of inflammatory mediators hs-CRP,IL-6 and MMP-9 in the CMB group were significantly higher than those in the non-CMB group (P<0.05).The logisticMultivariate logistic regression analysis showed that the levels of hs-CRP,IL-6 and MMP-9[ORvalue(95%CI):1.745(1.342-2.270),1.223(1.018-1.533),1.284(1.082-1.423),P<0.05)] were the risk factors of CMB after adjusting the influence of age,sex and traditional risk factors.ConclusionThe levels of inflammatory mediators hs-CRP,IL-6 and MMP-9 are closely associated with CMB,which participate in CMB occurrence.

cerebral hemorrhage；C-reactive protein；interleukin-6；matrix metalloproteinase 9；cerebral microbleeding;risk factor;inflammatory mediator

R741

A

1671-8348(2017)26-3629-03

2017-02-18

2017-06-13)

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.26.010

天津市卫生局科技基金(2013KZ021)；天津市滨海区卫生局科技项目(2013BWKY025)。

卢俏丽(1983-)，住院医师，硕士，主要从事脑血管病及神经免疫方面研究。△

，E-mail：lichenokk@163.com。