头孢泊肟酯中有机溶剂残留的测定方法

张清国　周芳　郭树兴

[摘要] 目的 建立适合头孢泊肟酯中有机残留溶剂的测定方法。 方法 采用Agilent DB-624毛细管柱（30.0 m×0.25 mm×1.4 μm），顶空气相色谱法，FID检测器，运用外标法、内标法、标准加入法和加校正因子的标准加入法测定分析头孢泊肟酯中乙醛、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、异丙醚、丁酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷、吡啶、甲苯和乙酸正丁酯的残留量。 结果 有效分离上述各有机溶剂，在考察的浓度范围内各方法的结果线性均良好，r值在0.9980～1.0000之间；各残留溶剂的检出限在0.0250～0.3284 μg/mL之间。残留溶剂间回收率差异显著，乙醛回收率最低，为39.7644%～42.1885%，环己烷回收率最高，为125.3627%～132.2517%。 结论 标准加入法分析适用于头孢泊肟酯有机溶剂残留的测定。

[关键词] 头孢泊肟酯；残留溶剂；乙醛；丁酮；乙酸乙酯；气相色谱法

[中图分类号] R961 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）08（a）-0037-05

[Abstract] Objective To establish a suitable method for determination of residual solvents in Cefpodoxime Proxetil. Methods Agilent DB-624 capillary column （30.0 m×0.25 mm×1.4 μm） was used， with FID detector， thirteen residual solvents （acetaldehyde， methanol， ethanol， isopropanol， dichloromethane， isopropyl ether， butanone， ethylacetate， tetrahydrofuran， cyclohexane， pyridine， toluene， butyl acetate） in Cefpodoxime Proxetil were determinated and analyzed by external standard method， internal standard method， standard addition method and correction factor standard addition method. Results The results showed that all residual solvents could be separated， and good linear relationships were obtained in their respective concentration ranges in the methods （r = 0.9980-1.0000）， the detection limits were between 0.0250 to 0.3284 μg/mL. And significant differences recovery rates between all kinds of residual solvents， with the lowest recovery rates in acetaldehyde （39.7644%-42.1885%） and with the highest recovery rates in cyclohexane （125.3627%-132.2517%）. Conclusion The standard addition method is the most suitable determination method for the residual solvents in Cefpodoxime Proxetil.

[Key words] Cefpodoxime Proxetil； Residual solvent； Acetaldehyde； Butanone； Ethylacetate； Gas chromatography

头孢泊肟酯是第三代头孢菌素，临床中具有很好的抗菌效果，需求量大[1-2]。其合成过程常需使用乙醛、甲醇等多种有机溶剂[3-4]。秦立等[5]采用DB-624毛细管柱（30.0 m×0.53 mm×3.0 μm）顶空气相色谱法建立了8种有机溶剂的检测方法。《中国药典》2010版开始收录头孢泊肟酯[6-7]，录入有关残留溶剂18种。对福建古田药业有限公司（以下简称“我司”）最近5年的头孢泊肟酯检验结果进行统计分析，结果显示，所有批次均检出乙醛和甲醇，部分批次中检出异丙醚等。目前，《中国药典》2015版中头孢泊肟酯残留溶剂项下并未收录乙醛和异丙醚[7]，文献中较多同时检测甲醇、乙醇、丙酮、吡啶等多种物质的研究[8-12]，尚未见同时检测药物中乙醛、甲醇、丁酮和乙酸乙酯的报道，因此，探索有效分离乙醛和甲醇的同时并测定头孢泊肟酯中有机溶剂残留是对其检验标准的进一步完善探讨以及对其检测结果有效性和可靠性的必要提升。本文根据我司检验结果统计，对其所有检出的有机溶剂及其最难分离物质共计13种进行系统的研究，旨在建立一个简便、可靠的头孢泊肟酯中有机溶剂的测定方法，为其检验标准进行补充探讨，同时为其用药安全及相关研究提供一个新的思路和实验基础。

1 仪器与试药

岛津GC-2010plus气相色谱仪，FID检测器，Labsolutions DB 6.70工作站；DANIHSS86.50PLUS顶空进样器；Agilent DB-624毛细管色谱柱（30.0 m×0.25 mm×1.4 μm）；梅特勒·托利多（AB204-N）万分之一电子天平。甲醇（批号：20150422）、乙醇（批号：20160808）、正丙醇（批号：T20110727）、乙酸乙酯（批号：20121204）、环己烷（批号：20160902）、乙酸丁酯（批号：20161020）和二甲基亚砜（批号：20151228）为国药集团化学试剂有限公司生产；异丙醇（批号：20140802）、甲苯（批号：20150110）为天津市科密欧化学试剂有限公司生产；二氯甲烷（批号：130618）、四氫呋喃（批号：090731）为上海试一化学试剂有限公司生产；丁酮（批号：20100520）为上海森灏精细化工有限公司生产；吡啶（批号：0705101）为上海申博化工有限公司生产；乙醛（批号：P56251）、异丙醚（批号：B2315-3）为山东西亚化学工业有限公司生产；其中甲醇和异丙醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。头孢泊肟酯为国内某公司提供（批号：1611028）。endprint

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent DB-624毛细管色谱柱（30.0 m×0.25 mm×1.4 μm），程序升温，起始温度40℃，维持22 min，以每分钟100℃的速率升温至120℃，维持10 min。色谱柱流量为1.0 mL/min，分流比为20︰1，柱前压76.5 kPa。进样口温度为200℃，检测器温度为250℃。氮气为载气，顶空气化室温度为70℃平衡30 min，定量环温度为90℃，样品传输管温度为100℃，进样时间1 min。

2.2 溶液配制

2.2.1 内标溶液

精密称取正丙醇83.9 mg，用二甲基亚砜稀释至500 mL。

2.2.2 对照物质储备溶液

精密称取乙醛507.4 mg、甲醇300.9 mg、乙醇491.7 mg、二氯甲烷63.2 mg、异丙醇500.7 mg、异丙醚499.2 mg、丁酮521.5 mg、乙酸乙酯501.6 mg、四氢呋喃68.5 mg、环己烷391.5 mg、甲苯93.4 mg、吡啶29.0 mg、乙酸丁酯507.3 mg，用内标溶液稀释至50 mL作为对照物质储备溶液。

2.2.3 梯度标准对照物质供试溶液

精密量取“2.2.2”项下储备溶液1、2、3、4、5、6 mL分别置50 mL容量瓶中，用内标溶液稀释至刻度，混匀，分别标记为标1、标2、标3、标4、标5和标6溶液，其中标5溶液各有机溶剂浓度约为规定限度浓度。

2.2.4 头孢泊肟酯样品供试溶液

取头孢泊肟酯0.20 g置顶空瓶中，精密加入内标溶液1 mL，密封，使溶解。

2.2.5 加樣的梯度标准对照物质供试溶液

分别取头孢泊肟酯0.20 g置顶空瓶中，精密加入标1、标2、标3、标4、标5和标6溶液各1 mL，密封，使溶解。

2.3 方法学验证

2.3.1 系统适用性试验

取“2.2.5”项下标5溶液1 mL置顶空瓶中，密封，进样，记录色谱图。残留溶剂最难分离物质对乙醛和甲醇的分离度为2.39，丁酮和乙酸乙酯的分离度为2.18。结果见图1。

2.3.2 线性关系考察

2.3.2.1 精密量取“2.2.3”项下梯度标准对照物质供试溶液各1.0 mL置顶空瓶中，密封，顶空进样，重复三次，记录色谱图。使用外标法分析，各物质在上述浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，r值在0.9983～0.9999之间；使用内标法分析，各物质峰面积与内标物质峰面积之比与浓度呈良好的线性关系，r值在0.9983～1.0000之间。结果见表1。

2.3.2.2 取“2.2.4”项下样品供试溶液和“2.2.5”项下加样的梯度标准对照物质供试溶液，顶空进样，重复三次，记录色谱图。样品供试溶液和加样的标5溶液的色谱图见图2。

使用标准加入法分析，各物质峰面积与浓度呈良好的线性关系，r值在0.9989～0.9999之间；使用加校正因子的标准加入法分析，各物质峰面积和内标物质峰面积之比与浓度间呈良好的线性关系，r值在0.9980～0.9999之间。结果见表2。

2.3.3 回收率考察

根据“2.3.2”项下标准溶液回归方程与标准加入法结果分别计算各浓度的回收率，以各浓度的回收率平均值作为该溶剂的回收率，并计算RSD。结果见表3。其中，乙醛的回收率最低，约为40%，环己烷的回收率最高，约为130%。

2.3.4 检出限和稳定性考察

精密量取标5溶液1 mL，置顶空瓶中，密封，进样，记录色谱图，重复12次。以CL=KSC/X计算方法的检出限[13]，式中CL为方法的检出限；K为置信因子，取3；S为样品测量读数的标准偏差；C为样品含量值；X为样品测量读数平均值。稳定性以12次检测结果的RSD表示。标准加入法和加校正因子的标准加入法的检出限分别以外标法和内标法的检出限除以各物质的回收率。结果见表4。

2.3.5 样品的测定

取“2.3.2.2”项下头孢泊肟酯样品溶液和加样的标准溶液检测结果，采用外标法、内标法、标准加入法和加校正因子的标准加入法进行计算，供试头孢泊肟酯中检出乙醛、甲醇、异丙醇、乙酸乙酯、环己烷和甲苯6种溶剂残留，结果见表5。

3 讨论

残留溶剂种类多、成分复杂以及基质效应显著影响头孢泊肟酯溶剂残留检验结果的准确性，标准加入法常用于性质不稳定的物质或基质效应显著的样品的气相色谱法分析[14-16]，本研究显示，标准加入法结果较可靠，加校正因子有利于检测结果的稳定性和提高检出能力，但内标物质不易确定，本文使用正丙醇为内标物质，其与异丙醚分离度较小，对仪器性能要求较高，因此，通用方法建议使用标准加入法。《中国药典》尚无乙醛和异丙醚的限度规定，但乙醛对机体毒性明显[17-19]，且和甲醇不易分离；异丙醚尚无足够毒理学资料，残留限度需进一部论证[7]。本研究同时对其加以分离测定，提高了头孢泊肟酯残留溶剂检测的准确性，并为其有关物质、用药安全以及相关研究建立检测基础。

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（收稿日期：2017-04-17 本文编辑：李亚聪）endprint