一起鸡棘沟赖利绦虫病的诊断

张 鼎，刘晶英，宁官保，高文伟，马海利，闫 芳，赵宇军，高诗敏，田文霞*

(1.山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801；2.山西医科大学基础医学院，山西太原 030001)

一起鸡棘沟赖利绦虫病的诊断

张 鼎1，刘晶英2，宁官保1，高文伟1，马海利1，闫 芳1，赵宇军1，高诗敏1，田文霞1*

(1.山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801；2.山西医科大学基础医学院，山西太原 030001)

从临床症状、组织病理学变化、病原形态学鉴定等方面对一起鸡棘沟赖利绦虫病进行诊断。结果表明，病鸡生长缓慢，消化道增粗、肿大，肠内充满大量黄褐色液体。十二指肠有凸起的白色结节和散在出血斑，HE染色显示肠黏膜层脱落并伴有大量红细胞浸润。病鸡十二指肠、空肠和回肠发现大量绦虫虫体，体长5 cm～10 cm，头节四周有4个圆形吸盘，中央有1个突起的顶突，顶突上分布有两圈小钩。颈节节片生殖系统未发育成熟，染色不明显。成节节片有一组生殖系统，生殖孔交替开口于节片外缘上1/3处。雄茎囊位于排泄孔外侧，睾丸数目30个～40个。孕节子宫退化，被大量卵囊所取代，散在分布于节片中，每个卵囊内有1个已胚化的六钩蚴。综合以上结果判定病鸡所患寄生虫病为棘沟赖利绦虫病。

肉鸡；绦虫；病理学变化；病原体形态

赖利绦虫病是由隶属于扁形动物门(Platyhelminthes)绦虫纲(Cestoidea)圆叶目(Cyclophyllidea)戴文科(Davaineidae)的赖利属绦虫(Raillietina)寄生于家鸡、火鸡和雉鸡等多种家禽小肠中引起的寄生虫病。赖利绦虫病已经成为威胁鸡群健康和家禽养殖业的第二大寄生虫病[1]。常见的赖利绦虫由3种,即棘沟赖利绦虫、四角赖利绦虫和有轮赖利绦虫。3种绦虫的生活史均需要中间宿主的参与，其中棘沟赖利绦虫和四角赖利绦虫的中间宿主是蚂蚁，有轮赖利绦虫的中间宿主为苍蝇及甲虫。鸡可以单独感染一种绦虫，也可以遭受多种绦虫的混合感染，同时绦虫代谢物可能引起病鸡的中毒反应。对于鸡绦虫种类的鉴定，常用的方法是通过对不同绦虫虫体大小、头节形状、顶突和其上面包含的小钩数目以及孕卵节片结构等的细微差异加以区分[2]。目前关于赖利绦虫的形态学鉴定方面的文献，国外的报道比较多，国内则相对较少。随着研究数量的增加，关于赖利绦虫形态学的描述产生较大分歧，据报道世界上已发现的赖利属绦虫有200多种[3-4]。本研究针对山西省发现的绦虫感染肉鸡，从病鸡临床症状、病理学变化以及绦虫形态学方面进行研究，旨在了解山西省鸡绦虫感染状况，同时积累有关鸡赖利绦虫种类鉴定及绦虫病诊断要点的资料，为我国鸡绦虫病的防治提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 虫体收集 绦虫感染肉鸡，来自课题组肉鸡饲养过程中发现的病例。断颈处死病鸡，取出完整消化道，小心剪开肠道，将发现的绦虫与肠道一起置于清水中，待绦虫头节脱离肠黏膜，并充分舒展后转入生理盐水中清洗。清洗干净后将一部分虫体冻存于-80℃冰箱中备用，剩余的虫体用40 g/L的多聚甲醛固定。另取部分十二指肠病变部位于40 g/L甲醛中固定。

1.1.2 主要试剂 40 g/L多聚甲醛、中性树胶、苏木素-伊红染液，北京索莱宝科技公司产品；盐酸、酒精、二甲苯，山西农业大学动物科技学院预防兽医系生物制品实验室保存。

1.2 方法

1.2.1 组织切片的制备及染色 剪取合适大小的40 g/L多聚甲醛固定的十二指肠小块，经过梯度酒精脱水、二甲苯透明后进行石蜡包埋。修整蜡块进行切片，切片厚度为5 μm。将切好的组织片置于二甲苯中2次脱蜡，每次15 min。梯度酒精脱水，苏木素染色5 min，水洗后用10 mL/L的盐酸乙醇分化30 s，再次水洗后用5 mg/mL伊红染液染色2 min。梯度酒精脱水、二甲苯透明后用中性树胶封片，光学显微镜下观察。

1.2.2 虫体染色 剪取1 cm～2 cm用40 g/L多聚甲醛固定的虫体片段，自来水充分清洗后置于染色缸中，用苏木素-伊红染液染色虫体0.5 h～1 h，10 mL/L的盐酸酒精调色30 s，梯度乙醇脱水(700、800、950、1 000 mL/L)、二甲苯透明后用中性树胶封片，光学显微镜下观察并拍照。

2 结果

2.1 绦虫感染鸡临床症状和病理学变化

病鸡消瘦，发育受阻，体重约为同龄肉鸡重量的1/4。剖检发现病鸡十二指肠、空肠、回肠和盲肠等部位增粗、肿大(图1A1)。十二指肠、空肠和回肠内充满黄褐色液体并发现大量虫体(图1A2)。剖检发现病鸡十二指肠黏膜表面有多个凸起的白色结节和新鲜出血斑(图1B1箭头所示)。HE染色可见病变肠道肠黏膜脱落，毛细血管出现严重的充血和出血现象，并伴有炎性细胞浸润(图1B2)。

A1、A2、B1.消化道病理变化;B2.组织病理变化

A1,A2,B1.Intestinal lesion;B2.Histopathological lesion

图1绦虫感染鸡消化道病理学和组织病理学观察

Fig.1 Observations of pathological and histopathological lesions in intestinal tract of chicken infected with tapeworm

2.2 病原体形态特征

寄生于病鸡肠道中的虫体较小，体长5 cm～10 cm，呈乳白色，不透明。头节呈圆球形，四周有4个圆形吸盘，中央有1个可伸缩的顶突，顶突上分布有两圈交替排列的小钩，每圈小钩数目约22个～25个(图2C1和图2C2)。颈节较短，起始部与头节等宽，向后逐渐增宽。颈节节片宽大于长，外形呈梯形，内部生殖系统尚未发育成熟，染色不明显。成节呈长方形，长度略大于宽度，节片内有一套生殖系统，生殖孔左右交替排列于节片外缘上1/3的位置。雄性生殖系统雄茎囊位于排泄管外侧，睾丸数目30个～40个，分布于节片前段的两侧，卵巢的上方(图2D1和图2D2)。雌性生殖系统中受精囊发达，呈梨性，位于排泄管内侧，睾丸下方(图2D2)。卵巢呈分叶状，位于节片中央，卵黄腺位于卵巢后方。孕节肥厚，节片长大于宽，内无子宫，被卵囊所取代(图2E1)。卵囊呈圆形或椭圆形，散在分布于孕节各处，数量约200个～400个，每个卵囊内包含1个胚化的六钩蚴(图2E2)。综合病鸡的病理学变化及绦虫形态学特征，判定病鸡感染的是棘沟赖利绦虫。

C1、C2.光镜下绦虫头节(sc)、吸盘(su)、吻突(r)和小钩(h)；D1、D2.成节生殖孔(gp)、雄茎囊(cp)、睾丸(t)和受精囊(sp)；E1、E2.孕节卵囊(ec)和六钩蚴(on)

C1 and C2 present scolex (sc),suckers (su),rostellum (r) and hooks (h) of tapeworm;D1 and D2 present genital pore (gp),cirrus pouch (cp),testis (t) and spermatheca (sp) in mature segment;E1 and E2 present egg capsule (ec) and oncosphere (on) in gravid segment of tapeworm

图2绦虫的形态结构特点

Fig.2 Morphological characteristics of tapeworm

3 讨论

棘沟赖利绦虫主要寄生于鸡小肠，造成鸡生长发育受阻，在十二指肠肠壁或有出血点和结核样结节，这与我们观察到的病理学变化相吻合[5]。对绦虫形态学的观察是鉴定绦虫种类最直观和最常用的方法，但随着研究数量的增加，逐渐出现了与绦虫经典形态学描述不一致的地方。有报道描述棘沟赖利绦虫是寄生于鸡的大型瑞绦虫，体长可达25 cm，而有文献描述棘沟赖利绦虫体长为3 cm～8 cm，后者与本试验观察到的结果一致[5]。Dasgupta S等[6]观察到棘沟赖利绦虫吻突深陷于头节中央一个凹坑中，凹坑四周布满数圈小钩，我们观察到的吻突凸起于头节，小钩缩于吻突内部。雄性生殖系统中雄茎囊位于排泄管的外侧，睾丸数目为20个～40个，这与已有报道结果相类似[7]。卵巢位置比较统一，位于节片中央，分左右两瓣，卵黄腺位于卵巢后方。棘沟赖利绦虫孕卵节片缺少子宫，卵囊散在分布于节片中。有报道称卵囊中包含的虫卵可达6个～12个，本试验观察到的卵囊中只含有1个胚化的六钩蚴[8-9]。这可能是由于孕节形成早期，子宫分支中虫卵数目较多，后期随着子宫的退化，虫卵被分散，形成卵囊，造成后期每个卵囊中只有1个六钩蚴的形态。为了能更准确的鉴定绦虫的种类，除了应用形态学观察的方法，越来越多的人借助分子手段进行对绦虫种类进行鉴定，以获得更快速、更可靠的结果。目前用于鸡绦虫种类鉴定的DNA序列包括绦虫16 S和第二内转录间隔区(ITS2)等。16 S rDNA是编码16 S rRNA的基因，其种类少，含量大，约占细菌RNA含量的80%，在结构与功能上具有高度的保守性。16 S常被用在细菌种类的鉴定上，近年来也开始在鉴定绦虫等寄生虫的种类上得到应用[10]。核糖体DNA内转录间隔区(ITS)基因序列是一类高变的且能提供不同种属间基因信息量的基因序列，被广泛用于物种鉴定、近似种属基因进化树分析上[2，11]。本研究在绦虫形态学鉴定的基础上，下一步将设计针对赖利绦虫16 S、ITS2 DNA序列的引物，从分子角度对病鸡感染绦虫的种类进行进一步确认，并做基因进化树分析，以了解该绦虫与已报道绦虫种类的关系。

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DiagnosisofChickenTapewormDiseaseCausedbyRaillietinaechinobothrida

ZHANG Ding1，LIU Jing-ying2， NING Guan-bao1，GAO Wen-wei1，MA Hai-li1， YAN Fang1，ZHAO Yu-jun1，GAO Shi-min1，TIAN-Wen xia1

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,Shanxi,030801,China; 2.CollegeofBasicMedicine,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan,Shanxi,030001,China)

The aim of this study was to diagnose a case of chicken tapeworm disease caused byRaillietinaechinobothridathrough ways of clinical symptom observation,pathological analysis and pathogen identification.The results showed that sick chickens grew slowly,intestines swelled and were filled with brown liquid.Sarcoidosis-like wihte nodules and hemorrhagic spots were observed in duodenum.HE staining showed extensive erythrocyte infiltration in intestine mucous.A large number of tapeworms were found in the duodenum,jejunum and ileum of the sick chickens.The adult tapeworm composed of proglottids,with a body length from 5 to 10 cm.Scolex has four round suckers around the surrounding and one stretchable rostellum in the center.There are two circles of hooklets in the rostellum.The reproductive system in immature proglottid is not entirely developed and failed to distinguish after the HE staining.Mature proglottid has a set of reproductive system and genital pore opens at upper one third of the outside edge of the mature proglottid.The male stem sac is located outside the drain hole and there are 30 to 40 testes in mature proglottid.Gravid proglottid has vestigial uterus which is replaced by oocysts.There is one oncosphere in each oocyst.The results showed that synthesizing all results of clinical symptom observation,pathological analysis and pathogen identification,sick chickens were infected withRaillietinaechinobothrida.

chicken;tapeworm;pathological lesion;morphology

2017-06-18

国家自然科学基金项目(31602116)；国家重点研发计划项目(2016YFD0500800);山西农业大学科技创新基金项目(2015YJ18)

张 鼎(1985-)，男，山西孝义人，博士，讲师，主要从事动物中毒病和传染病发病机理研究。*

S852.734;S858.31

:B

:1007-5038(2017)09-0133-04