拉萨市林周县牦牛乳样理化指标及乳房炎病原菌的分离鉴定

封家旺，金红岩*，李封赛，顾庆云，李 鼎，杨康林，达娃卓玛

(1.西藏职业技术学院，西藏拉萨 850030； 2.东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨 150030)

拉萨市林周县牦牛乳样理化指标及乳房炎病原菌的分离鉴定

封家旺1，金红岩1*，李封赛2，顾庆云1，李 鼎1，杨康林1，达娃卓玛1

(1.西藏职业技术学院，西藏拉萨 850030； 2.东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨 150030)

为研究西藏拉萨市林周县牦牛乳理化指标和乳房炎主要病原菌，采集牦牛乳样品100份，开展乳理化指标和主要病原菌检测。采用CMT法筛选隐性乳房炎病例，针对筛选出隐性乳房炎阳性乳样20份进行病原菌分离鉴定，共分离出11种52株细菌，通过鉴定，其中包含4株凝固酶阴性葡萄球菌，10株金黄色葡萄球菌，2株停乳链球菌，2株乳房链球菌，1株粪链球菌，8株无乳链球菌，6株大肠埃希菌，4株真菌。乳房炎63.5%的病例是由链球菌、葡萄球菌和大肠埃希菌引起，结果证实，链球菌、葡萄球菌和大肠埃希菌是导致林周县牦牛乳房炎的主要病原菌。

牦牛;乳；理化指标；乳房炎；病原菌

牦牛素有“高原之舟”之称，通常生活于海拔3 000 m左右的高寒地区。文献资料显示，全国牦牛存栏量1 420余万头，分布于西藏、甘肃、新疆、四川和青海等省区。牦牛乳是西藏各族人民重要的乳品原料和食品，营养丰富，因而为微生物的生长繁殖提供良好的条件，尤其是乳房炎致病菌[1]。但当前涉及牦牛生产性能及乳制品加工方面的报道相对较多，而关于牦牛乳成分和乳房炎致病菌的相关研究报道较少。本研究旨在探究西藏拉萨市林周县牦牛乳成分并针对病原菌开展深入研究，为牦牛乳的进一步开发和牦牛乳房炎的防控提供基础，也可为牦牛的科学养殖提供科学依据[2]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器 乳成分分析仪；超净工作台；立式压力蒸汽灭菌器；恒温培养箱；生化培养箱；电热鼓风干燥箱；冰箱；数控超生波清洗器。

1.1.2 培养基 CMT检测试剂盒；脱纤羊血琼脂；营养肉汤；血清肉汤；营养琼脂培养基；麦康凯培养基；伊红美蓝培养；高盐甘露醇培养基。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 分别于松盘、强嘎、卡孜、江热夏、旁多乡各采集乳样20份，共100份。采集乳样前，使用1 g/L新洁尔灭消毒乳头，750 mL/L酒精再次消毒，每个乳头先弃去前3把奶后采集乳样10 mL左右，收集于灭菌离心管内，经灭菌后加盖，标记编号，置于冷藏保温容器内，尽快送检[3]。

1.2.2 细菌分离培养 将乳样混合均匀，吸取乳样250 μL接种于6 mL血清肉汤培养基中，37℃恒温培养24h ～36 h。再用接种环将上述培养物接种于高盐甘露醇、营养琼脂、伊红美蓝、鲜血琼脂、麦康凯琼脂及TTC-沙堡罗等培养基中，恒温培养箱内37℃培养24 h～48 h。初步观察菌落形态后涂片染色镜检，细菌类属判定结合细菌溶血情况，区分为革兰阳性杆菌、革兰阴性杆菌、链球菌及葡萄球菌等[4]。然后将细菌进一步纯化，增菌备用，链球菌接种于50 mL/L血清营养肉汤[5]。

1.2.3 细菌鉴定 将菌株纯化培养，进行生化鉴定。通过染色和镜检，符合葡萄球菌特性的细菌，用标准金黄色葡萄球菌作为对照，开展兔血浆凝固酶试验，结合试验结果区分为凝固酶阴性葡萄球菌及金黄色葡萄球菌[6]；镜检形态符合链球菌的细菌，进行山梨醇、七叶普、马尿酸钠、乳糖和甘露醇等生化试验；将镜检形态符合革兰阴性杆菌的进行靛基质、硫化氢、VP、甘露醇和MR等试验鉴定[7]。

2 结果

2.1 乳理化指标

检测样本20个，乳样理化指标检测结果见表1。

2.2 细菌分离培养

结果表明，共分离出11种52株细菌，经鉴定，其中包含10株金黄色葡萄球菌，8株无乳链球菌，2株乳房链球菌，4株凝固酶阴性葡萄球菌，1株粪链球菌，2株停乳链球菌，6株大肠埃希菌，4株真菌，其中大肠埃希菌、葡萄球菌和链球菌为主。

表1 牦牛乳理化指标检测

2.3 生化试验鉴定

细菌鉴定结果表明，其中包含2株乳房链球菌、8株无乳链球菌，1株粪链球菌，2株停乳链球菌，合计13株链球菌，占到总数的25%；10株金黄色葡萄球菌，占19.2%；4株凝固酶阴性葡萄球菌，占到总数的7.7%；6株大肠埃希菌，占11.5%；4株真菌，占7.7%。63.4%的乳房炎病例由链球菌、葡萄球菌和大肠埃希菌所致(表2)。

表2 牦牛乳中微生物鉴定结果

3 讨论

评价牦牛乳营养价值的重要指标是乳理化性状，也是牦牛育种的重要参考指标，林周县牦牛乳理化指标检测结果表明，牦牛乳具有更高的乳脂肪、蛋白质、干物质、灰分和乳糖，更宜加工奶酪、酥油和酸奶等乳产品，具有较高的开发价值[8]。

乳样病原菌分离鉴定结果显示，无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和粪链球菌检出率最高，占25%，其次为金黄色葡萄球菌，占19.2%，大肠埃希菌，占总数的11.5%，再次为凝固酶阴性葡萄球菌，占到总数的7.7%。上述细菌占总细菌检出总数的63.4%，是导致林周县牦牛乳房炎的主要致病菌。值得一提的是其中两份隐性乳房炎乳样未检出病原菌，究其原因可能是因非病原微生物原因所致，也可能是由其他病原微生物所引起。致病菌的存在，表明林周县牦牛饲养管理还需加强，否则势必会影响乳制品质量和人民群众身体健康[9]。因此，进一步完善牦牛饲养管理制度，提高乳生产卫生标准十分必要，从源头上保证牦牛乳质量和卫生安全，同时为牦牛乳深度开发利用创造条件[10]。

[1] 席 斌,李维红,高雅琴.不同地区牦牛乳营养成分比较研究[J].安徽农业科学,2011,39(2):1045-1046.

[2] Blum S E,Leitner G.MastitisEscherichiacoli.Genotyping and virulence factors assessment[J].Vet Microbiol,2013,163(3-4):305-312.

[3] Yang J B ,Wen N,Win L F.Month-wise prevalence of subclinical mastitis in dairy cows in Guangdong province,China[J].J Integ Agri,2012,11(1):166-169.

[4] 王礼伟,施研进,屈勇刚,等.新疆石河子地区奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J].中国畜牧兽医,2014(1):203-206.

[5] Li H M,Ma Y,Li Q M.The chemical composition and nitrogen distribution of Chinese yak (Maiwa) milk[J].Int J Mol Sci,2011,12(8):4885-4895.

[6] 肜豪峰,谈重芳.青海湖区牦牛乳制品的微生物区系和营养成分的初步研究[J].食品工业科技,2008,29(7):225-227.

[7] 付连军，尹柏双,李 伟,等.临床型奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J].黑龙江畜牧兽医,2012(10下):76-77.

[8] 王海军,芮 艺,昌莉丽,等.徐州地区奶牛隐性乳房炎病原调查及药物敏感性检测[J].畜牧与兽医,2012,44(12):79-82.

[9] 刘 燕,苟来武,杨玉艾,等.昆明地区奶牛临床型乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验[J].中国草食动物,2012,32(1):74-76.

[10] 严作廷,王东升,王旭荣,等.我国奶牛主要疾病研究进展[J].中国草食动物,2011,31(6):69-72.

AnalysisandIdentificationofPhysicochemicalIndexesandMainMastitisPathogensinYakMilkofLinzhouCountyLhasa

FENG Jia-wang1,JIN-hong-yan1,LI Feng-sai2,GU Qing-yun1,LI-ding1,YANG Kang-lin1,DAWA Zhuo-ma1

(1.TibetVocationalTechnolgyCollege,Lhasa,Tibet，850030,China; 2.CollegeofVeterinaryMedicine,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin，Heilongjiang，150030,China)

For further study physicochemical indexes and main mastitis pathogens of yak milk in Linzhou county,Lhasa city of Tibet,100 samples of yak milk were collected to detect milk physicochemical indexes and main pathogens.Recessive mastitis was detected by CMT,the isolation and identification of the pathogens were carried out according to the screened 20 mastitis milk samples.The experiment isolated 11 species(52 strains)of microorganisms,and identified 10 strains ofStaphylococcusaureus,4 strains of coagulase negativeStaphylococcus,8 strains ofStreptococcusagalactiae,2 strains ofStreptococcusdysgalactiae,2 strains ofStreptococcusuberis,1 strain ofStreptococcusfaecalis,6 strains ofEscherichiacoliand 4 strains of fungi.The mastitis caused byStaphylococcus,StreptococcusandEscherichiacoliaccounted for 63.5% of the total.The results showed that the main pathogens of yak mastitis in Linzhou county wereStaphylococcus,StreptococcusandEscherichiacoli.

yak;milk; physicochemical index;mastitis;pathogen

2017-04-22

西藏自治区高校青年教师创新支持计划项目(QCZ2016-84);西藏自治区自然科学基金项目(2015ZR-14-57)

封家旺(1980-)，男，黑龙江肇东人，副教授，博士,主要从事兽医学研究。*

S858.23;857.26

:B

:1007-5038(2017)09-0125-04