补肾化痰祛瘀中药对多囊卵巢模型大鼠胰岛素样生长因子-1及血清肿瘤坏死因子-α的影响

姬 霞 傅金英 周艳艳 曹俊红 李 琳 胡俊攀

(河南省中医院，河南 郑州 450002)

补肾化痰祛瘀中药对多囊卵巢模型大鼠胰岛素样生长因子-1及血清肿瘤坏死因子-α的影响

姬 霞 傅金英 周艳艳 曹俊红 李 琳 胡俊攀

(河南省中医院，河南 郑州 450002)

目的探讨补肾化痰祛瘀中医方剂对多囊卵巢模型大鼠卵巢组织中胰岛素样生长因子(IGF)-1及大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法使用皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)法诱导多囊卵巢综合征(PCOS)同种系雌性大鼠20只，分为模型组与中药组各10只，另取10只正常大鼠作为正常组。中药组大鼠给予补肾化痰祛瘀中药方剂灌胃4 w，治疗前后各取血一次，检验全血IGF-1及血清TNF-α的水平。结果实验前，模型组大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平〔(67.47±21.11)μg/ml、(1.78±0.31)ng/ml〕与中药组〔IGF-1(64.13±13.55)μg/ml、TNF-α(1.74±0.22)ng/ml〕比较无统计学差异(P>0.05)，而模型组和中药组的大鼠血中IGF-1和TNF-α水平均明显高于正常组〔(29.89±11.47)μg/ml〕、〔(1.03±0.27)ng/ml〕(P<0.05)；实验后模型组大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(63.16±24.24)μg/ml、(1.79±0.45)ng/ml〕明显高于正常组〔(28.64±10.13)μg/ml、(1.09±0.33)ng/ml〕(P<0.01),试验后中药组大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(31.13±13.55)μg/ml、(1.14±0.62)ng/ml〕低于模型组(P<0.05),而中药组大鼠IGF-1和TNF-α水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾化痰祛瘀方剂可有效降低PCOS模型大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平，稳定大鼠卵巢内分泌功能紊乱，改善大鼠生殖功能。

补肾化痰祛瘀；多囊卵巢综合征；胰岛素样生长因子-1；肿瘤坏死因子-α

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种以长期无排卵、雄激素过多、多毛、肥胖、月经失调等为主要特征的育龄期妇女常见的内分泌异常综合征〔1〕。我国传统医学并无此症的专有名词，将其归为“崩漏”“闭经”“不孕”等范畴，认为其根本在于肾，肾藏精，主生殖〔2〕。本实验拟探究补肾化痰祛瘀中医方剂对PCOS模型大鼠卵巢组织中胰岛素样生长因子(IGF)-1及血清肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响，旨在开辟治疗PCOS的传统中药新思路。

1 材料与方法

1.1动物 清洁级同种系雌性大鼠30只，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(黑)2013-004，使用许可证号：SYXK(黑)2013-012。平均体重(55±15)g，实验前于实验室内饲养1 w以适应环境，室温18℃～25℃。随机平均分为三组，每组10只，分别为正常组、模型组和中药组。

1.2药物及试剂

1.2.1补肾化痰祛瘀方剂组成 菟丝子、仙灵脾、肉苁蓉、枸杞、黄芪、党参、白术、茯苓、薏苡仁、厚朴、当归、川芎等，中药饮片购自河南省中医院中药房，剂量通过人-大鼠相关计算公式换算而进行转换。

1.2.2试剂 脱氢表雄酮(DHEA)：北京百灵威科技有限公司；注射用大豆油(药用级)，250 ml/瓶，上海阿拉丁生化科技股份有限公司C1526031。血清TNF-α放射免疫法分析试剂盒：上海酶研生物科技有限公司EK-R31092；大鼠IGF-1酶联免疫试剂盒：上海劲马实验设备有限公司201507。

1.3模型制作 参考相关文献〔3〕采用皮下注射DHEA的方法，在预实验中成功复制出PCOS大鼠模型，即模型组和中药组大鼠每天称重后，给予DHEA 6 mg/100 g体重+0.2 ml注射用大豆油经颈背部皮下注射，正常组在同一时间段注射大豆油0.2 ml/只，连续20 d。

1.4给药方案 于第21天起(即造模结束后1 d)，实验大鼠接受药物治疗，正常组和中药组的实验大鼠给予补肾化痰祛瘀中药方剂灌胃4 w，2次/d，模型组大鼠则正常饲养。

1.5检验指标 治疗前后各取血一次，离心分离血清后，使用放射免疫法检测全血IGF-1及血清TNF-α的水平。

2 结 果

实验前，模型组大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平〔(67.47±21.11)μg/ml、(1.78±0.31)ng/ml〕与中药组的〔(64.13±13.55)μg/ml、(1.74±0.22)ng/ml〕比较差异无统计学意义(P>0.05)，而模型组和中药组的大鼠血中IGF-1和TNF-α水平均明显高于正常组〔(29.89±11.47)μg/ml、(1.03±0.27)ng/ml〕(P<0.05)；实验后模型组大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(63.16±24.24)μg/ml、(1.79±0.45)ng/ml〕明显高于正常组〔(28.64±10.13)μg/ml、(1.09±0.33)ng/ml〕(P<0.01),试验后中药组大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(31.13±13.55)μg/ml、(1.14±0.62)ng/ml〕低于模型组(P<0.05),而中药组大鼠IGF-1和TNF-α水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

PCOS是育龄期妇女最常见疾病之一，患者的卵巢形态学改变主要表现为双侧卵巢增大，多个囊性卵泡被一层囊膜覆盖着，并呈囊性和硬化改变〔4〕。近年来，大量的临床研究表明PCOS 是由神经系统、内分泌系统和代谢系统机制调节失衡引起的恶性循环和多发反馈失调而引起的一系列症状〔5〕。

IGF-1是一种编码基因位于12号染色体的单链碱性蛋白，其功能和结构与胰岛素类似，主要由肝脏分泌，具有参与促进新陈代谢、加快细胞有丝分裂等胰岛素样生物学效应〔6〕，IGF-1亦可由卵巢合成，促进卵巢性激素分泌，尤其是雄性激素的分泌，调节卵泡发育，参与卵巢的正常生殖功能〔7〕。另外,IGF-1可活化细胞色素裂解酶，并协同胰岛素抑制肝脏合成，从另一条路径升高雄性激素〔8，9〕。而本实验结果说明IGF-1水平升高与PCOS具有一定的联系。其机制为胰岛素和IGF-1的过度作用,使卵巢对黄体生成素(LH)的敏感性增加,增加卵泡募集数,导致正常卵泡闭锁不发生或减少；另一方面，局部产生大量的雄激素，造成发育到一定阶段的卵泡发育停止或者延长,而高胰岛素和IGF-1对原始卵泡不断启动,从而促进多囊卵巢形成，无法产生优势卵泡并导致无排卵的持续化〔10〕，故推测胰岛素和IGF-1通过多种路径促进雄激素大量合成，并成为PCOS发病的机制之一。补肾化痰祛瘀方剂能有效降低大鼠血中IGF-1水平，减少IGF-1对卵巢内分泌的刺激。

TNF-α可影响卵泡膜细胞和卵巢颗粒细胞类固醇激素的分泌，调节卵细胞凋亡，是卵巢功能调节因子之一，并影响外周组织的胰岛素敏感性、升高局部雄性激素水平〔11〕。本实验说明PCOS发病时，TNF-α亦起到了一定的影响，且高水平的TNF-α可刺激白细胞介素(IL)-6的合成与分泌，IL-6可通过抑制颗粒细胞FSH诱导而生成的E2，从而影响卵泡发育，是卵巢内分泌的调解因子〔12〕。补肾化痰祛瘀方剂亦可降低大鼠血中TNF-α水平，是阻断卵巢内分泌紊乱的另一条路径。

综上所述，补肾化痰祛瘀方剂可有效降低PCOS模型大鼠血中的IGF-1和TNF-α的水平，稳定大鼠卵巢内分泌功能，改善大鼠生殖功能。补肾化痰祛瘀中药方剂有望成为临床治疗PCOS的另一种有效手段。

1Liu SY,Li X,Zheng Y.Study of combined use of clomiphene citrate and gonadotropins on the infertile patients with PCOS〔J〕.J Reprod Contracep,2012;23(3):159-68.

2王秀萍.补肾化痰活血法治疗PCOS不孕不育的临床效果〔J〕.光明中医,2016;31(20):2971-2.

3梁东辉，宗利丽.罗颂平教授治疗多囊卵巢综合征的临床经验〔J〕.环球中医药，2014;7(9)：719-21.

4Gladchuk IZ,Semenyuta OM,Onyshchenko YV.Clinical effectiveness of the various approaches for infertility treatment in women with PCOS and hyperprolactinemia〔J〕.中国现代医学杂志,2014;24(16):1-4.

5Wang Y,Li Y,Xu F,etal.Apolipoprotein B/Apolipoprotein A1 ratio is associated with sex hormone binding globulin and may be an indicator of metabolic syndrome in PCOS women〔J〕.J Reprod Contracep,2015;26(4):213-21.

6任小胖,刘梅梅,陈 亮,等.多囊卵巢综合征患者血清核因子-κB和转化生长因子β1的表达及其与胰岛素抵抗的相关性研究〔J〕.生殖与发育医学,2013;33(8):529-33.

7杨 芳.胰岛素、雄激素、胰岛素样生长因子、血管内皮生长因子对多囊卵巢综合征患者卵泡发育的影响〔J〕.生殖与发育医学,2013;33(6):413-7.

8裴刘成,赵 杰.胰岛素样生长因子在PCOS病人卵泡液及颗粒细胞中的表达〔J〕.内蒙古医学院学报,2012;34(3):225-8.

9Qian Y,Wu H,Xi XW.Is there a relationship between polycystic ovary syndrome and endometriosis〔J〕.J Reprod Contracep,2011;22(3):177-82.

10杨志华,赵淑萍,马德花.多囊卵巢综合征患者血清IGF-1水平与胰岛素抵抗〔J〕.中国优生与遗传杂志,2012;20(5):90-1.

11兰 楠,王 爽.复方麦芽丸对PCOS模型大鼠IL-6、TNF-α表达的影响〔J〕.中药药理与临床,2016;32(3):136-40.

12孙 林,王海燕,邵小光.卵泡液氧化应激指标对PCOS患者IVF结局的影响〔J〕.黑龙江医药,2016;29(1):49-52.

〔2016-12-19修回〕

(编辑 袁左鸣)

河南省中医药管理局科研课题(2014ZY02013)

傅金英(1968-)，女，主任医师，主要从事多囊卵巢综合征研究。

姬 霞(1968-)，女，副主任医师，主要从事生殖内分泌研究。

R28

A

1005-9202(2017)16-3927-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.16.008