西兰花叶保健茶萝卜硫素测定方法与含量分析

赵元寿，苏小红，杜喜梅，张生堂，高国强

(兰州工业研究院，兰州 730050)

西兰花叶保健茶萝卜硫素测定方法与含量分析

赵元寿，苏小红，杜喜梅，张生堂，高国强

(兰州工业研究院，兰州 730050)

用高效液相色谱法(HPLC)测定西兰花叶保健茶中的萝卜硫素含量，并通过测定发现，西兰花叶保健茶中含萝卜硫素20.848 mg/kg，达到了直接进行90 ℃干燥处理的西兰花中萝卜硫素含量的25%。

西兰花叶保健茶；萝卜硫素；高效液相色谱法

萝卜硫素对乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌有明显的阻断作用，是自然界存在的诱导Ⅱ型解毒酶能力最强的诱导物[1-3]。西兰花富含萝卜硫素，其叶中也含有较大量萝卜硫素[4-6]，在生产中往往废弃，而将其制成茶有效利用其功效成分萝卜硫素，大量减少废弃物，既可节约资源，降低成本，保护环境，同时能更好地开发利用绿色蔬菜西兰花。

作为西兰花叶保健茶的主要保健因子，萝卜硫素的测定方法较多，如荧光诱导毛细管电泳法、生物传感法、定量酶解法、化学测定法、色谱法等[7]。目前检测萝卜硫素及其前体化合物葡萄糖莱菔子苷的色谱方法主要有气相色谱(GC)法、高效液相色谱(HPLC)法和质谱联用法。由于HPLC法具有高分离度、高速度、高灵敏度的优势，被认定为测量萝卜硫素的有效方法。H liang等[8]利用合适的梯度洗脱模式，研究了高效液相色谱法测定花椰菜和甘蓝中的萝卜硫素。顾颖娟等[9]研究高效液相色谱法测定西兰花中萝卜硫素。而萝卜硫素本身性质不是很稳定[10]，拟采用HPLC法进行研究，旨在确定一种快速准确测定西兰花叶保健茶萝卜硫素含量的方法，为生产加工的质量控制和综合开发提供依据。

1 材料方法

1.1 材料、试剂与仪器

材料：在陇南梅园茶厂加工的西兰花叶茶。试剂：萝卜硫素标准品(CAS号4478-93-7，纯度95.0%)，Sigma公司；甲醇(色谱纯)，上海国药集团；其余化学试剂，上海国药集团；纯净水，研究中心自制。

仪器：液相色谱仪(Agilent 1260+UV)，美国安捷伦公司；超声波清洗(SK8200H)，上海科导超声仪器有限公司；电子天平(AB204-S/FACT)，上海利阳仪器有限公司；电热恒温水浴锅(HWS-12)，上海一恒；高速万能粉碎机，杭州汇尔仪器有限公司；真空干燥箱(DZF-6020)，上海精宏仪器有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 标准溶液配制 取5mg萝卜硫素标准品(精确至0.0002g)，移至10mL容量瓶，10%乙腈准确定容，得浓度为0.5mg/mL的萝卜硫素标准品溶液。再分别配制浓度为0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mg/ml的萝卜硫素标准液，待用。

1.2.2 萝卜硫素提取 取样本1g(精确至0.0002g)，研成粉末，用5mL正己烷脱脂3次，挥干，加入3mL去离子水，混匀后35℃水浴2h，加入1g氯化钠，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液并35℃旋转蒸发至黄油状液体(或蒸干)，用10%乙腈溶解残留液，移至10mL容量瓶，准确定容，过0.45μm滤膜，待用。

1.2.3 色谱条件 采用反相C18色谱柱分析，乙腈—水梯度洗脱，流速0.6mL/min，检测波长254nm。乙腈—水梯度洗脱时，采用浓度为10%、60%、100%，洗脱时间为0、25、30min，溶剂为10%乙腈。

1.2.4 含量计算 萝卜硫素含量(mg/g)=0.5(mg/mL)×95%×A样×样品体积(mL)/[A标×样品质量(g)]，式中：A样为样品峰面积、A标为标样峰面积。

2 结果与分析

如图1～3，采用1.2.3色谱条件，萝卜硫素出峰时间为16.7min。萝卜硫素标准品分离效果较为理想，对西兰花叶保健茶中的萝卜硫素和其他硫苷产物分离能有效分离，可用于其萝卜硫素含量测定。以采后直接进行90℃干燥处理[4]的西兰花为对照，按1.2.2中处理后上机测定其萝卜硫素的含量，采用1.2.4方法计算，结果表明，西兰花叶保健茶中含萝卜硫素20.848mg/kg，达到了花的25%(附表)。

图1 萝卜硫素标准品液相色谱图

图2 西兰花叶保健茶萝卜硫素样品液相色谱图

图3 西兰花(90℃干燥)萝卜硫素样品液相色谱图

附表 西兰花叶保健茶萝卜硫素含量

3 讨论

采用HPLC法测定西兰花叶保健茶中的萝卜硫素含量，确定其具有较好的分离效果，可用于萝卜硫素含量测定。但也存在色谱图杂峰多、基线过高等缺陷，可能是因为提取液中色素、蛋白等物质中存在其他硫苷水解物的干扰，预处理、洗脱方式等还有待于进一步的优化筛选。通过测定发现，西兰花叶保健茶中含萝卜硫素20.848 mg/kg，达到了直接进行90℃干燥处理的西兰花萝卜硫素含量的25%。考虑到萝卜硫素的不稳定性，以及西兰花叶保健茶加工环节多、时间长等因素，西兰花叶保健茶较好地保留了西兰花叶中的萝卜硫素。◇

[1]赖百塘.莱菔硫烷在肿瘤防治中的作用及其机制研究进展[J].中华预防医学杂志，2007，41(1)：68-72.

[2]王舒然，夏薇，吴坤.莱菔硫烷与肿瘤[J].疾病控制杂志，2004，8(5)：452-455.

[3]吕静，淘文沂，程景才，等.十字花科蔬菜提取物抗肿瘤作用的研究[J].食品与生物技术学报，2007，26(4)：105-109.

[4]谢淑琼，等.不同干燥方法对西兰花中萝卜硫素的影响[J].食品研究与开发，2013，34(13)：67-69.

[5]乔勇进，等.一种从花椰菜叶片中提取萝卜硫素的方法[P].中国专利：102102113，2011-06-22.

[6]万志祥，等.西兰花下脚料提取物及其制备方法[P].中国专利：103169749，2013-06-26.

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[9]顾颖娟，张亮，等，高效液相色谱法测定西兰花中萝卜硫素的测定[J].食品工业科技，2012(4)：81-82.

[10]王见冬，袁其朋，钱忠明.萝卜硫素研究进展[J].食品与发酵工业，2003，29(2)：76-80.

(责任编辑 李婷婷)

Determination Method of Sulforaphane in Broccoli Leaf Health Tea

ZHAO Yuan-shou，SU Xiao-hong，DU Xi-mei，ZHANG Sheng-tang，GAO Guo-qiang
(Lanzhou Industrial Research Institute，Lanzhou 730050，China)

The content of sulforaphane in broccoli leaf health tea was determined by high performance liquid chromatography(HPLC).The results indicated that the content of sulforaphane in broccoli leaf health tea was 20.848 mg/kg， accounting for 25%of the content of sulforaphane in directly dried broccoli at 90℃.

broccoli leaf health tea；sulforaphane；HPLC

兰州市科技计划项目(项目编号：2016-3-7)。

赵元寿(1977— )，男，硕士，工程师，研究方向：农产品贮藏与加工。

高国强(1966— )，男，学士，正高级工程师，研究方向：农产品加工。