大黄煎煮提取主要成分含量变化规律研究

李芳，田明，国紫薇，高士平，贾静丽，姚丽琴

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

中 药 研 究

大黄煎煮提取主要成分含量变化规律研究

李芳，田明*，国紫薇，高士平，贾静丽，姚丽琴

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

目的：对大黄水煎煮提取游离蒽醌、结合性蒽醌和鞣质类成分含量的变化规律进行研究。方法：采用分光光度法，测定大黄不同煎煮时间游离蒽醌、结合蒽醌和鞣质成分的含量。结果：随着大黄煎煮时间的延长，蒽醌类和鞣质成分含量均逐渐增加，120 min左右达峰值。结论：大黄久煎后，结合蒽醌含量较稳定，鞣质含量增加。

大黄；蒽醌；鞣质；含量测定

大黄味苦性寒，具有泻下导滞，清热泻火的功效，是临床常用中药。大黄中主要含有蒽醌类、鞣质类等多种成分[1-2]。研究表明，蒽醌类是大黄泻下作用的主要有效成分，其中结合型蒽醌作用最强[3]。但是，对其煎煮时间与有效成分的溶出有很多不同的认识[4-5]，本文采用紫外-分光光度法，对大黄不同煎煮时间蒽醌类和鞣质类成分含量的变化规律进行研究。

1 实验材料

1.1 药材与试药

大黄饮片购自哈尔滨华泰大药房，经鉴定为蓼科植物掌叶大黄(RheumpalmatumL.)的根和根茎。1,8二羟基蒽醌，购自中国医药上海化学试剂公司；没食子酸，购自中国药品生物制品鉴定所。其余试剂均为分析纯，实验用水为纯化水。

1.2 仪器

电子天平BSA224S(赛多利斯科学仪器北京有限公司)；旋转蒸发器RE-52A(上海亚荣生化仪器厂)；UV-1601PC紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)。

2 实验方法与结果

2.1 大黄不同煎煮时间样品的制备

取大黄饮片粉碎成最粗粉，称取20 g。取水200 mL，置于500 mL双口圆底烧瓶中，回流加热至沸腾，加入大黄粗粉，计时。分别在10、20、30、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300 min吸取提取液10 mL，并极时补充等量的水。分别将各取样点提取液滤过，收集滤液，密封保存。即得大黄17个不同煎煮时间点的样品。

2.2 样品中蒽醌类成分的含量测定

2.2.1 标准曲线的制备

精密称取干燥至恒重的1,8-二羟基蒽醌对照品1.05 mg，加甲醇定容在10 mL量瓶中，摇匀，得0.105 mg/mL的对照品溶液。分别精密量取对照品溶液0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL、1.4 mL、1.6 mL置10 mL容量瓶中，1%醋酸镁甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。以1%醋酸镁溶液作为空白对照，在510 nm处测定吸收值[6-7]，以浓度(μg/mL)为横坐标，吸收值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.042 2X+0.049 4，R2=0.999 4。

结果表明：1,8-二羟基蒽醌含量在2.10～16.8 μg/mL的范围内与吸收值呈良好线性关系。

2.2.2 游离蒽醌的含量测定

取2.1项下大黄不同煎煮时间点的样品2.0 mL，分别置于分液漏斗中，加入10%盐酸5 mL，加入三氯甲烷溶液萃取4次，每次10 mL，分取三氯甲烷层，剩余的溶液备用。合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，定量转移至10 mL容量瓶中。从中取2 mL于10 mL量瓶中，加1%醋酸镁甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。以1%醋酸镁溶液作为空白对照，在510 nm处测定吸收值。

2.2.3 结合蒽醌的含量测定

取2.2.2项下剩余的溶液，加入10%盐酸溶液5 mL，100 ℃水浴回流1 h，放冷，置分液漏斗中，加入三氯甲烷萃取4次，每次10 mL，分取三氯甲烷层，剩余的溶液备用。合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，定量转移至10 mL容量瓶中。从中取2 mL于10 mL量瓶中，加1%醋酸镁甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。以1%醋酸镁溶液作为空白对照，在510 nm处测定吸收值。

2.3 鞣质类成分的含量测定

2.3.1 标准曲线的制备

精密称定没食子酸对照品2.5 mg，加甲醇定容在50 mL量瓶中，制成0.05 mg/mL的溶液。分别精密量取对照品溶液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL至25 mL棕色量瓶中，加磷钼钨酸溶液1.0 mL，再加水11 mL、10 mL、9 mL、8 mL、7 mL，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。以随行溶液为空白，在760 nm处测定吸收值[8-9]，以浓度(μg/mL)为横坐标，吸收值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=0.042 4X+0.139，R2=0.999 4。

2.3.2 鞣质类含量测定

取2.2.3项下剩余的溶液分别置于50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，得贮备液。精密量取贮备液各2.0 mL，置于25 mL棕色量瓶中，加水10.0 mL，加磷钼钨酸溶液1.0 mL，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。以随行溶液为空白，在760 nm处测定吸收值。

2.4 实验结果

以上述实验测得的吸收度值，代入标准曲线，分别计算游离蒽醌、结合蒽醌和鞣质相对含量，累积折合计算各时间点每100 mL煎煮液中的总含量。总蒽醌含量是游离蒽醌和结合蒽醌含量的加和。计算结果如表1；不同提取时间各含量变化曲线如图1～2。

图1 大黄不同提取时间游离蒽醌、结合蒽醌及总蒽醌含量变化曲线图

图2 大黄不同提取时间鞣质含量变化曲线图

时间/min游离蒽醌含量结合蒽醌含量总蒽醌含量鞣质总蒽醌含量∶鞣质含量106.924.0410.96104.721∶9.6209.804.3614.16159.601∶11.33014.114.7618.87234.401∶12.44016.595.0721.66280.091∶12.96016.835.7022.53303.251∶13.58017.045.7722.81349.781∶15.310017.355.7723.12358.151∶15.512017.515.8623.37383.891∶16.414017.595.9823.57382.891∶16.216017.636.6924.32407.631∶16.718017.666.7924.45466.811∶19.120017.696.8224.51509.031∶20.822017.767.0724.83559.881∶22.524017.837.1224.95574.741∶23.026017.747.2725.01588.611∶23.528017.777.2425.01581.431∶23.230017.967.1125.07583.941∶23.3

3 讨论

现代药学研究表明：大黄中主要活性成分主要是蒽醌类和鞣质，蒽醌类成分是致泻下作用的主要成分，其中结合蒽醌作用最强。而鞣质确有止泻作用，长期服用使致泻作用减弱或致便秘[10]。由上述验结果可见，随着大黄煎煮时间的延长，游离蒽醌和结合蒽醌的含量逐渐增加，游离蒽醌含量从100 min后趋于平稳；结合蒽醌从160 min后趋于平稳；鞣质含量至240 min后趋于平稳。有些文献[11-12]或传统理论认为大黄久煎煮结合蒽醌不稳定，易水解生成游离蒽醌而使泻下作用减弱，所以要后下，短时间煎煮。本实验结果表明：结合蒽醌是比较稳定的，并没有水解而使游离蒽醌增加。大黄久煎使鞣质含量增加，可能是导致泻下作用减弱的原因，这还需要药效学进一步的验证，从大黄总蒽醌和鞣质随煎煮时间溶出比值来看，大黄后下煎煮20 min以内为好。

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Study on Variation Regularity of Main Components in Rhubarb Decocting

LI Fang, TIAN Ming, GUO Zi-wei, GAO Shi-ping, JIA Jing-li, YAO Li-qin

(HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China)

Objective:To study the contents of free anthraquinone, bound anthraquinone and tannin in water-coction extract. Methods: The contents of free anthraquinone, bond anthraquinone and tannin in rhubarb were determined by spectrophotometry. Results: The contents of anthraquinones and tannins increased gradually with the prolonging decocting time, and reached the peak in about two hours. Conclusion:The content of bound anthraquinone was stable in long-time decoction of rhubarb with increased tannin.

Rhubarb; Anthraquinone; Tannin; Content determination

2016-11-24

2016-12-15

李芳(1992-)，女，硕士研究生，研究方向：中药新药研究与开发。

*通讯作者：田明(1963-)，男，教授，硕士研究生导师，研究方向：中药新药研究与开发。

R284.1

A

1002-2392(2017)04-0062-02