穿山龙提取物薯蓣皂苷对TNBS诱导的IBS大鼠VIP表达的作用

赵旭，张宁，刘国良，周艳丽，代丽娟

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

穿山龙提取物薯蓣皂苷对TNBS诱导的IBS大鼠VIP表达的作用

赵旭，张宁，刘国良，周艳丽，代丽娟*

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

目的：探讨血管活性肠肽在三硝基苯磺酸诱导的肠易激综合征大鼠中的表达量及中药穿山龙提取物薯蓣皂苷的干预作用。方法：TNBS诱导大鼠肠易激综合征模型，第 2、7、14和28天对大鼠体质量、髓过氧化物酶活力、疼痛阈值、VIP含量进行测定。结果：TNBS诱导的肠易激综合征大鼠体质量降低，髓过氧化物酶活力增加，疼痛阈值降低，模型大鼠中性粒细胞内炎症标记物过氧化物酶的表达比正常大鼠明显升高，证实TNBS处理后诱导了大鼠的炎症，TNBS处理大鼠后血浆VIP浓度比对照组显著增加(P<0.05)，穿山龙提取物薯蓣皂苷处理后显著下调。结论：VIP表达的改变在肠易激综合症中可能起着重要作用，穿山龙提取物中药薯蓣皂苷对TNBS诱导的IBS大鼠具有治疗作用。

穿山龙；肠易激综合征；血管活性肠肽；三硝基苯磺酸；薯蓣皂苷

肠易激综合征(IBS)是一种病因不明的慢性胃肠道紊乱性疾病，其特点是腹痛和排便改变[1]。在中国其患病率为成年人中10%～20%，尽管这种疾病的发病率相对较高[2]，但其确切的病理仍然未知，阐明其发病机制是现在面临的一个挑战。

现有文献表明，肠易激综合征是多因素疾病[3-4]。细菌、病毒、寄生虫感染导致的炎症可能改变胃肠蠕动和内脏敏感性而在IBS发病中发挥着重要作用[5-7]。感染肠易激综合征患者中的36%症状将持续8～10年，这些患有肠易激综合征患者表现出各种症状；排便被视为一个主要的胃肠道症状，但最痛苦的相关症状是腹痛[8]。当肠易激综合征发生时，腹胀、腹泻、腹痛等症状通常在首次发病后数周内消失，但炎症消失后内脏高敏感性仍可持续存在[9]。此外，与普通胃肠病相比，IBS患者除了胃肠道症状外还有消化系统症状，IBS患者内脏过敏增加，皮肤对热刺激敏感[10]，很明显，患有肠易激综合征的患者有着更为复杂的症状。

穿山龙(RhizomaDioscoreaeNipponicae)为薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣的干燥根茎，是黑龙江省道地的中药材，其味甘、苦，性温，归肝、肾、肺经[11]。其功效为舒筋通络、祛风除湿、活血止痛；临床主要用于风湿痹病、关节肿胀、疼痛麻木、咳嗽气喘等[12]。我们前期研究结果表明其具有抗炎、镇痛作用，对肠易激综合征具有良好的治疗作用[13-14]，但其起作用有效成分研究尚未清楚，本实验在前期基础之上，应用穿山龙主要成分薯蓣皂苷作用于腹泻型肠易激综合征大鼠探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

雄性SD大鼠(300～350 g)60只，随机分为3组，每组20只，保持在12 h光/暗周期,标准啮齿动物食物和水。所有试剂都是购自Sigma公司。

1.2 造模

三硝基苯磺酸诱导腹泻型肠易激综合征模型，3%异氟烷氧气麻醉大鼠，50%乙醇溶解TNBS，取1 mL(15 mg/mL)，使用无菌聚乙烯管肛门插入直肠7 cm处灌肠给药。在TNBS处理2、7、14、21天进行检测。

1.3 造模前后体质量变化

大鼠开始造模后2、7、14、21天称体质量，计算每组体质量变化。

1.4 疼痛阈值检测

第7、14、21 、28天3%异氟烷麻醉大鼠后进行直肠扩张，检测疼痛阈值。

1.5 髓过氧化物酶活力检测

第2、7、14、28天沿着肠系膜边境切开取大鼠结肠组织100～200 mg，液氮中冷冻保存，供测定结肠组织MPO之用。检测时，按试剂盒说明书操作。

1.6 VIP含量测定

血浆VIP检测，具体步骤按试剂盒说明操作。

1.7 数据统计

数据处理统计分析应用SPSS23.0软件，组间比较应用单因素方差分析，组间多重比较应用LSD-t检验；当P<0.05时，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 体质量相对增长率变化

TNBS诱导大鼠结肠炎模型有几个指标，其中之一是处理后体质量变化。与正常组相比，TNBS组第一次灌肠处理大鼠2～7天后体质量降低(13.7±3.2)g ，14天后体质量增加，21天后正常组和TNBS 组体质量无明显差异,见表1。

表1 TNBS造模后大鼠体质量变化比较(g)

注：与正常组相比，*P<0.05

2.2 疼痛阈值与MPO活力检测

与正常组相比，在第7天14天和21天疼痛阈值降低(P<0.05)，28天疼痛阈值无明显差异(P>0.05)。MPO是一个炎症的标志物，是中性粒细胞的功能标志和激活标志，与正常组相比，TNBS处理大鼠2、7、14和28 d后MPO的水平活性显著升高(P<0.05),见表2。

表2 疼痛阈值(mmHg)与MPO活力(μg)测定

注：与正常组相比，*P<0.05

2.3 VIP含量测定

与正常组相比，TNBS处理2 h后VIP含量显著增加，14天后下降(P<0.05)。与TNBS组相比，薯蓣皂苷组VIP含量显著下调(P<0.05),见表3。

表3 VIP含量测定(ng/mL)

注：与正常组相比，*P<0.05;与TNBS组相比，#P<0.05

3 讨论

肠易激综合征是以持续或间歇发作的腹痛、腹泻、腹胀等消化道症状为主的肠功能紊乱性疾病。分为腹泻型、便秘型、混合型、不确定型4种，我国腹泻型肠易激综合征最常见，约占74.1%[15]，因此建立一个良好的腹泻型肠易激综合征动物模型可以促进对该疾病的深入研究，模型的建立是否成功需经过相应指标的评价，目前现有的肠易激综合征模型评价指标大体分为内脏敏感性、肠道动力学、粪便情况及病理组织学四类。其中，内脏敏感性增加和肠道动力学改变是核心的评价指标，我们的研究发现三硝基苯磺酸造模后内脏敏感性，MPO含量增加证明造模成功。然而TNBS-诱导的IBS模型并非没有的局限性，一是大多数胃肠道标志物自发的缺失。另外，这种模式的再现性高度依赖TNBS剂量使用[16]。

穿山龙资源丰富，在我国已有数千年的应用历史，具有较高的药用价值。近几年，现代药理学研究穿山龙的镇痛、降糖、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等作用[17-18]，其中镇痛、抗炎药效作用明显[19]。我们对肠易激综合症造模成功的大鼠研究发现VIP表达上调，Camilleri M等[20]研究同样发现与对照组相比，腹泻型肠易激综合征活检VIP mRNA表达增加，这些发现说明VIP可能在肠易激综合症发病中起重要的作用[21]。穿山龙提取物薯蓣皂苷处理后VIP降低，说明中药穿山龙有效成分薯蓣皂苷具有治疗肠易激综合征的疗效。

总之，我们的动物实验数据显示血管活性肠肽含量的改化可能在慢性胃肠道功能紊乱中发挥着重要作用。这些数据为更好的理解VIP表达、生理和药理性质，为有选择地调节胃肠功能提供了一个出发点。通过本研究能够初步确定薯蓣皂苷对TNBS诱导的IBS大鼠的治疗作用，但未能从更多层次和角度进行深入研究，今后仍需进行深入探究。

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The Effect of Dioscin fromRhizomaDioscoreaeNipponicaseon VIP Expression in IBS Rats Induced by TNBS

ZHAO Xu, ZHANG Ning, LIU Guo-liang, ZHOU Yan -Li, DAI Li-Juan

(HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China)

Objective: To investigate the vasoactive intestinal peptides (VIP) expression in irritable bowel syndrome (IBS) rats induced by trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS), and the intervention effects of dioscin fromRhizomaDioscoreaeNipponicase. Methods: IBS models were established by TNBS induction. The weight, myeloperoxidase (MPO) activity, pain threshold, and VIP content were detected on the days of 2nd, 7th, 14th, and 28th. Results:TNBS induced IBS in rats was confirmed with weight loss, increased MPO activity, and decreased pain threshold. VIP plasma concentration was significantly increased in rats following TNBS intervention compared to that of the control group(P<0.05), and it was regulated downwards significantly. Conclusion: VIP expression may play a role in IBS. Therefore, dioscin has therapeutic effect on IBS rats induced by TNBS.

RhizomaDioscoreaeNipponicase; Irritable bowel syndrome; Vasoactive intestinal peptide; Trinitrobenzene sulfonic acid; Dioscin

2017-03-12

2017-04-11

国家自然科学基金(81274035)；黑龙江省中医药科研项目(ZHY16-034)；黑龙江中医药大学科研基金(201516)

赵旭(1980-)，女，硕士，讲师，主要从事胃肠病的研究。

*通讯作者：代丽娟(1980-)，女，硕士，副主任医师，主要从事中西医结合治疗慢性肾病研究。

R285.5

A

1002-2392(2017)04-0013-03