瘦素与妊娠期肝内胆汁淤积症的相关性研究*

单 莉，周海燕，何菊仙，王咏梅，邱洪涛

西北妇女儿童医院妇产科 (西安 710068)

瘦素与妊娠期肝内胆汁淤积症的相关性研究*

单 莉，周海燕△，何菊仙，王咏梅，邱洪涛

西北妇女儿童医院妇产科 (西安 710068)

目的：观察瘦素(Leptin)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者血清及蜕膜组织中的表达，并探讨其与ICP的相关性。方法：将80例肝功能正常ICP患者、80例肝功异常ICP患者及100例正常妊娠妇女 ( 对照组) 作为研究对象，采用放射免疫法和Western blot法检测三组孕妇产前、产后、脐带血血清及蜕膜组织中Leptin的表达水平。结果：两组ICP患者产前血清Leptin表达水平明显高于产后 (P<0．05)；肝功异常组产前血清Leptin表达水平及蜕膜组织Leptin表达水平明显高于肝功正常组 (P <0．05)，两组分别高于对照组 (P<0．05)；而产后血清及脐带血Leptin表达水平三组间无明显差异 (P>0．05)。肝功异常ICP组、肝功正常ICP组孕妇羊水粪染、胎儿窘迫、低体重儿发生率均较对照组高，差异有统计学意义(P<0．05)，且两组间相比，差异也具有统计学意义(P<0．05)；新生儿窒息、产后出血发生率肝功异常ICP组比对照组高，差异有统计学意义(P<0.05)；但肝功异常ICP组与肝功正常ICP组、肝功正常ICP组与对照组相比，差异无明显统计学意义(P>0．05)。结论：Leptin可以作为评估1CP患者病情严重程度的实验室检测指标，也可以在临床上指导ICP的预防及治疗，从而改善ICP对孕妇及胎儿造成的严重影响，提高产科质量。

妊娠期肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是发生在妊娠期特有的并发症，发病率0.1 %～15.6 %不等，临床上以妊娠中晚期皮肤瘙痒、黄疸及血清胆汁酸盐水平升高为主要表现，可出现严重的母儿并发症：产后出血、早产、羊水胎粪污染、胎儿窘迫、胎死宫内、新生儿窒息、颅内出血等，对母儿造成严重威胁，从而影响产科质量[1-4]。 瘦素(Leptin)是一种由肥胖基因编码的蛋白产物，通过其受体作用于外周多个组织器官，对机体许多生理系统及代谢通路产生一定影响。研究显示，瘦素可能与ICP的发生发展有一定的相关性。本研究通过观察瘦素在ICP患者血清及蜕膜组织中的表达，探讨其与ICP发生发展的相关性，为我们在临床上预防及治疗ICP提供新思路、新方法，从而降低母儿并发症。

资料与方法

1 一般资料 选择2009年6月至2016年6月期间在我院产科住院拟行剖宫产的肝功异常ICP 患者80例、肝功正常ICP患者80例及正常妊娠妇女100例(对照组) 作为研究对象。ICP诊断依据《妊娠期肝内胆汁淤积症诊疗指南》的标准：空腹检测甘胆酸水平升高≥10.75 μmol/L(正常值5.61 μmol/L)或总胆酸水平升高≥10.75 μmol/L，可诊断为ICP。肝功异常ICP组80例，年龄(29.4±3.8)岁，孕周(36.8±4.0)周，产前BMI(19.9±1.6) kg/m2；肝功正常ICP组80例，年龄(28.4±4.4)岁，孕周(37.4±3.6)周，产前BMI(20.2±2.1) kg/m2；对照组100例，年龄(28.8±3.1)岁，孕周(37.7±3.8)周，产前BMI(20.3±1.8) kg/m2。三组孕妇均为单胎、初产，在年龄、孕周、产前体重指数( BMI) 方面比较，差异均无明显统计学意义(P>0. 05)，具有可比性。

2 标本采集 三组孕妇均在产前(剖宫产前)24 h、产后(剖宫产后)72 h采集外周静脉血5 ml，产时(剖宫产时)采集新生儿脐静脉血5 ml。在无菌条件下于胎盘娩出后30 min内避开钙化区及坏死区，采集近脐根部蜕膜组织(即母面胎盘组织)，大小约1.5 cm×1.5 cm×1 cm，-80 ℃冰箱保存。

3 实验试剂 放射免疫检测试剂盒(Leptin)购自中国原子能科学研究院同位素研究所；鼠抗人Leptin多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司；羊抗鼠第二抗体IgG、DAB试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司。

4 血清Leptin的检测 对采集的血液进行离心处理(3000 r/min)，15 min后吸取上层血清，置-20℃冰箱保存，应用放射免疫法同一批测定三组孕妇产前、产后及脐带血Leptin的表达水平。

5 蜕膜组织Leptin检测(采用Western blot法) 各组孕妇分别称取0.1 g蜕膜组织，剪碎，按1∶1比例加入组织裂解液，均浆至浑浊无组织块，离心机离心(10000 r/min,)，10 min后取上清；采用分离胶对组织样品予以SDS-PAGE电泳，然后将蛋白物质转移到PVDF膜上；将PVDF膜放入1∶200稀释的一抗中40C过夜，清洗后放入1∶750稀释的二抗室温轻摇1 h；最后采用DAB试剂盒显色处理。

Bandscan 软件对显影条带进行灰度分析，将瘦素灰度值分别与内参GAPDH灰度值的比值作为Leptin蛋白的相对表达水平。

结 果

1 三组血清leptin表达水平比较 两组ICP患者产前血清Leptin表达水平明显高于产后， 差异有统计学意义(P<0．05)；肝功异常组产前血清Leptin表达水平明显高于肝功正常组， 差异有统计学意义(P<0．05)，两组分别与对照组相比较， 差异有统计学意义(P<0．05)；肝功异常组与肝功正常组产后血清及脐带血Leptin表达水平比较差异无统计学意义(P>0．05)，与对照组比较(P>0．05)，见表1。

表1 三组血清及脐带血Leptin表达水平的比较(ng/ml)

2 蜕膜组织Leptin表达水平比较 肝功异常组蜕膜组织的Leptin表达水平(1.43±0.37) ng/ml明显高于肝功正常组(0.92±0.51)ng/ml，差异有统计学意义(P<0．05)；且两组分别与对照组(0.74±0.11)ng/ml相比较，差异有统计学意义(P<0．05)。

3 三组孕妇的母儿情况 肝功异常ICP组、肝功正常ICP组孕妇羊水粪染、胎儿窘迫、低体重儿发生率均较对照组高，差异有统计学意义(P<0．05)；且两组间相比，差异有统计学意义(P<0．05)。新生儿窒息、产后出血发生率肝功异常ICP组比对照组高，差异有统计学意义(P<0. 05)；但肝功异常ICP组与肝功正常ICP组、肝功正常ICP组与对照组相比，差异无明显统计学意义(P>0．05)，见表2。

表2 三组孕妇母儿情况的比较[例(%)]

讨 论

瘦素主要由脂肪细胞合成分泌，经血循环到达全身，与其受体结合而发挥作用。国内外研究发现除脂肪细胞外，胎盘合体滋养层细胞也可合成分泌瘦素，与生殖活动关系密切，对维持妊娠及胎儿生长发育有着重要作用。妊娠是一种同种半异体移植，正常妊娠的维持有赖于母胎间建立稳定的免疫平衡。相关性研究发现，瘦素通过调节滋养细胞入侵、胎盘血管形成及生长，维持了胎盘正常生理功能，从而有利于正常妊娠过程的进行。瘦素水平在妊娠期高于妊娠前，并随着妊娠的进行而升高。由于妊娠期孕妇体内存在瘦素抵抗现象，故使孕妇不受瘦素的影响，仍能摄入所需的营养物质以维持妊娠及胎儿生长发育。有些学者研究报道，当瘦素水平发生异常时，体内辅助性T淋巴细胞( Th) Th1/ Th2 型细胞因子平衡Th2 向Th1 偏移，细胞免疫功能及排斥反应均增强，母胎间的免疫平衡就会被破坏，从而可能导致ICP 的发生[5]。

据相关文献研究报道，ICP 患者血清胆汁酸水平升高，引起胎盘绒毛血管痉挛，从胎盘间隙流经的含氧血量明显减少，导致胎盘氧灌注及氧交换亦明显下降，从而使胎盘处于一种相对缺氧状态，合体滋养层细胞增多，同时合体滋养层细胞合成分泌瘦素增加，并随着ICP 患者病情的加重，其瘦素水平也明显增加。我们的研究结果也说明了这一点：两组ICP患者产前血清及蜕膜组织中瘦素表达水平均明显高于对照组；肝功异常组明显高于肝功正常组。当妊娠终止后，胎盘合体滋养层细胞不再合成分泌瘦素，以及分娩后体重、体重指数、空腹胰岛素及甘油三脂的下降，使产后血清瘦素水平迅速恢复[6]。我们的研究结果显示三组孕妇产后血清瘦素表达水平无明显差异。ICP可以对母儿造成一定影响，严重的威胁着母儿健康，影响产科质量。从我们的研究三组孕妇母儿情况来看：ICP组羊水粪染、胎儿窘迫、低体重儿发生率比对照组明显增加，而且随着肝功能异常的出现，亦明显增加；新生儿窒息、产后出血发生率也增高，肝功异常ICP组与对照组有明显差异，而肝功异常ICP组与肝功正常ICP组、肝功正常ICP组与对照组相比无明显差异，这可能和我们在临床上对于ICP患者加强产前胎儿监护、积极采取一定的措施进行治疗和把握适时终止妊娠时机有着密不可分的关系，从而降低了新生儿窒息及产后出血的发生。

本研究结果表明，瘦素在ICP 患者血清及蜕膜组织中表达水平明显增高，并随着肝功能异常而增加，与ICP的发生发展有着密切的相关性。我们可将瘦素作为监测ICP患者病情严重程度的一个重要指标，反映胎盘功能，以便在临床上指导ICP的预防及治疗，从而改善ICP对孕妇及胎儿造成的严重影响，降低母儿并发症，提高产科质量。

[1] Gabzdyl EM,Schlaeger JM. Intrahepatic cholestasis of pregnancy: a critical clinical review[J]. J Perinat Neonatal Nurs，2015,29(1): 41-50.

[2] Williamson C,Geenes V. Intrahepatic cholestasis of pregnancy[J].Obstet Gynecol，2014，124(1):120.

[3] Dixon PH，Williamson C. The pathophysiology of intrahepatic cholestasis of pregnancy[J].Clin Res Hepatol Gastroenterol，2016，40(2): 141.

[4] Rezai S，Lam J，Henderson CE. Intrahepatic cholestasis of pregnancy: maternal and fetal outcomes associated with elevated bile acid levels[J]. Am J Obstet Gynecol，2015，213(1): 114.

[5] 张群锋，瘦素在妊娠期肝内胆汁淤积症患者血清及胎盘组织中的表达及意义[J]. 广东医学，2013,18(34):2838-2840.

[6] 闫 时，妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠子代胆固醇代谢与胰岛素抵抗及相关基因在肝脏中的表达[J]. 中国妇幼保健，2016，31(2) : 386-390.

(收稿：2017-03-18)

The relationship between Leptin and Cholestasis of Pregnancy (ICP)

Shan Li，Zhou Haiyan，He Juxian,et al.Department of Gynecology & Obstetrics,

Northwest Women’s and Children’s Hospital in Shaanxi Province(Xi’an 710068)

Objective: to explore the expression of leptin in the serum and decidual tissues in patients suffering ICP and the potential relationship between leptin and ICP. Methods: 80 ICP patients with normal hepatic function were from group1; and 80 ICP patients with abnormal hepatic function were listed in group 2; 100 healthy pregnant women were enrolled as comparison group. With the help of ELISA and Western blot，the concentrations of Leptin in the serum from umbilical vessels of these 3 groups before and after delivery were detected. Moreover，the expression of Leptin in decidual tissues from these groups was also determined. Results: In both group 1 and group 2，significantly higher expression of Leptin in the serum (P<0.05) before delivery was observed. There were significantly elevated expression of Leptin expression in the serum and decidual tissues in ICP patients with abnormal hepatic function (group 2) when compared with ICP patients with normal hepatic function (group 1). Significantly difference were detected in the expression of Leptin in both group 1 and group 2 (P<0.05) comparing with group 3，respectively. However，there were no significant differences in the expression of Leptin after delivery among these 3 groups (P>0.05) . The occurrence of fetal distress，infant of low-birth weight were much higher in group 1 and group 2 (P<0.05) comparing with group 3，also，there were significant difference (P<0.05) between group 1 and group 2 in the occurrence rate of these complications. There were obviously higher occurrence rate of neonatal asphyxia and after-delivery bleeding in group 2 than group 3 (P<0.05)，however，there were no significant difference in when comparing the occurrence rated of neonatal asphyxia and after-delivery bleeding between group 1 and group 2，as well as between group 1 and group 3 (P>0.05). Conclusion: Leptin can be an important parameter to evaluate the progression of ICP. Thus，it can be much useful in the prevention and therapeutic guidance of ICP.

Cholestasis Pregnancy Leptin @Decidual tissues

*陕西省科技攻关项目(2007K15-02)

胆汁淤积 妊娠 瘦素 @蜕膜组织

R714.25

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.08.006

△通讯作者