大七厘散中大黄及当归薄层色谱鉴别方法改进*

温 馨，江耀伦，陈素珍，涂玉蓉，李美娣，武 力△

（1．广州华农大实验兽药有限公司，广东 广州 510642； 2．广东省兽用中药与天然药物工程技术研究中心，广东 广州 510642）

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大七厘散中大黄及当归薄层色谱鉴别方法改进*

温 馨1，2，江耀伦1，2，陈素珍1，2，涂玉蓉1，2，李美娣1，2，武 力1，2△

（1．广州华农大实验兽药有限公司，广东 广州 510642； 2．广东省兽用中药与天然药物工程技术研究中心，广东 广州 510642）

目的 对大七厘散质量标准中的大黄、当归的薄层色谱鉴别法进行改进。方法 在大黄的薄层色谱鉴别条件中，选用羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶H薄层板，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（30∶10∶0．5）为展开剂，分离大黄含有的5种有效成分；在当归薄层色谱条件的选择上，改用正己烷－乙酸乙酯（4∶1）为展开剂。结果 改进后能得到斑点清晰、分离度好的薄层色谱图，且易观察，无干扰。结论 改进后的薄层色谱鉴别方法更适合于大七厘散中大黄、当归的鉴别，符合质量控制要求，值得关注并推广。

大七厘散；大黄；当归；薄层色谱鉴别；质量标准

大七厘散由大黄（酒制）、当归尾（酒制）、血竭、三七、骨碎补等11味药组方，有化瘀消肿、止痛止血功效，现收载于2015年版《中国药典（一部）》[1]，可内服也可外敷，古代述其“散者散也，去急病用之”。因散剂比表面积较大，易分散，起效快，故本药对跌打损伤、瘀血疼痛、外伤止血等病症有独特疗效。关于大七厘散质量研究的文献中，大多采用高效液相色谱法测定方中血竭的有效成分血竭素含量[2－5]，也有学者检测方中三七的有效成分人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Rb1和三七皂苷 R1的含量[6－7]，却少有对大七厘散质量标准改进或提高的研究。为此，笔者在参考2015年版《中国药典（一部）》大七厘散质量标准的基础上，研究了该药的鉴别、检查和含量测定项，发现处方中的大黄和当归的薄层鉴别图谱特异性较差，经反复研究，对其薄层色谱鉴别法进行改进，最终得到斑点清晰、分离度好的薄层色谱图，且阴性样品无干扰，符合质量控制要求。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：JP－020型超声波清洗机（深圳市洁盟清洗设备有限公司）；WFH－203B型三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；DHG－9070A型电热恒温鼓风干燥箱（上海申贤恒温设备厂）；DFY－500型粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；HWS－24型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）；SHIMADZU AUW120D型电子天平（日本岛津公司）。

试药：大黄对照药材（批号为120984－201202），芦荟大黄素对照品（批号为110795－201308），大黄酸对照品（批号为110757－200206），大黄素对照品（批号为110756－201512），大黄素甲醚对照品（批号为110758－201415），大黄酚对照品（批号为 110796－201520），当归对照药材（批号为120927－201516），均购自中国食品药品检定研究院；大七厘散（厦门中药厂有限公司，批号为151104，规格为每袋1．5 g）；其他试剂均为分析纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2．1 大黄

溶液制备：取大七厘散6 g，研细，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，再加盐酸2 mL，加热回流30 min，冷却，用乙醚振摇提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺大黄的阴性对照品溶液。取大黄对照药材0．5 g，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液。取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄素甲醚对照品和大黄酚对照品，加甲醇制成每1 mL各含0．5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

药典鉴别方法：照薄层色谱法（2015年版《中国药典（四部）》通则0502）试验，吸取供试品溶液及阴性对照品溶液各10 μL，对照药材溶液及对照品溶液各5 μL，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶6∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上，显相同颜色的5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品溶液色谱相应位置上，显相同的橙黄色荧光主斑点。结果见图1 A。对照药材和对照品在相应位置上，不能很好地显相同的5个橙黄色荧光主斑点，未能达到分离要求；供试品则斑点不清晰，只能模糊显示3个橙黄色斑点。试验结果与2015年版《中国药典（一部）》大七厘散大黄薄层色谱鉴别项下描述的“在供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点”有差异。

改进方法：同法，吸取供试品溶液及阴性对照品溶液各10 μL、对照药材溶液及对照品溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂硅胶H薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（30∶10∶0．5）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，在日光下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上，显相同的5个红色主斑点；在与对照品溶液色谱相应位置上，显相同的红色斑点，斑点清晰，分离度好，且阴性对照品溶液无干扰。结果见图1 B。

图1 大黄薄层色谱图

2．2 当归

溶液制备：取大七厘散10 g，加乙醚30 mL，加热回流1 h，滤过，乙醚液60℃挥干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺当归的阴性对照品溶液。另取当归对照药材0．5 g，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液。

药典鉴别方法：照薄层色谱法（2015年版《中国药典（四部）》通则0502）试验，吸取供试品溶液、阴性对照品溶液及对照药材溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图2 A。可见，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，但斑点分离度较差，拖尾严重，对照药材和供试品的斑点对不齐，且阴性对照品溶液有干扰，结果难以判定。

改进方法：同法，吸取供试品溶液、阴性对照品溶液及对照药材溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下检视。结果见图2 B。可见，供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点，斑点清晰，阴性对照品溶液无干扰。

3 讨论

中药质量直接关系人类健康，鉴别中药常采用的手段有性状、理化和色谱鉴别等。薄层色谱鉴别法广泛应用于中药成分分析，可同时鉴别多个样品，具有成本较低、分析时间较短，分析结果直观性强等优点。然而，被分离物质的复杂程度可能会使成分之间相互干扰，色谱效果较单一药材的色谱效果差。且也易受外界环境因素的影响，供试品的预处理、展开剂、薄层板等因素均会影响薄层色谱图的效果。因此，需要研究者根据具体处方调整薄层色谱鉴别的条件。

图2 当归薄层色谱图

传统中医认为，筋脉受损，气血无以运行，血不循经，溢于脉外，故发为肢体肿胀、疼痛。大七厘散方中主以血竭入血分，可活血散瘀、收敛止血；三七活血止血，消肿止痛；辅以乳香、没药、祛瘀行气、活血消肿；大黄酒制则加强其破血散瘀之力，尤对损伤瘀血更为有效；当归有活血补血止痛之效；骨碎补、自然铜、土鳖虫既活血消瘀，又接筋续骨；冰片、硼砂静心养气，以助诸药发挥药力。由此可见，大七厘散内服还是外敷，均对多重病症有确切疗效。国内很多报道也证实，大七厘散配合其他疗法不仅能缩短急性踝关节损伤的治疗时间[8－10]，还对慢性累积性劳损引起的肱骨外上髁炎有明显疗效[11]。王秉慧等[12]认为，大七厘散与频谱联合使用，可扩张皮肤毛囊，加强药物的渗透和吸收，同时大七厘散有化瘀消肿和止痛止血功效，可明显改善局部血液循环，消肿止痛，加速损伤组织恢复。此外，张明兴[13]研究发现，采用大七厘散口服及外敷治疗带状疱疹能快速止痛，阻止新疱疹产生。王守信[14]曾报道，使用抗生素治疗血尿效果不满意，后口服大七厘散，并用青霉素和链霉素，血尿症状痊愈，随访1．5年未见复发[14]。

大七厘散质量研究中关于大七厘散薄层色谱鉴别的报道较少[5－6，15]，且鉴别方法均与《中国兽药典》类似。大七厘散为纯中药制剂，成分较复杂，在大七厘散质量标准研究的过程中，对方中大黄和当归的薄层色谱鉴别方法进行了改进。对大黄的研究中，先用药典方法对其的5种有效成分进行分离，结果，有芦荟大黄素与大黄酸的斑点大部分重叠，未能分离，且大黄素甲醚的橙黄色斑点没有显示。在改进方法中，探索了薄层板和展开剂的选择，分离大黄含有的5种有效成分，结果，供试品溶液、对照药材溶液以及5种对照品混合溶液均得到满意的分离效果，斑点清晰。改进方法所用的展开剂与李蒙蒙等[16]用薄层色谱法鉴别三黄片中的有效成分一致，并可以得知，薄层色谱图中大黄有效成分从上到下依次为大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素。尹丽等[17]也曾用正己烷－乙酸乙酯－甲酸（30∶10∶0．5）为展开剂，但芦荟大黄素和大黄酸的斑点仍有部分重叠，分离效果不佳。这可能与薄层板的种类有关。

本研究中，大黄薄层色谱鉴别的改进方法使用了羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板，能使大黄5种成分达到分离要求。另外，在当归薄层色谱展开剂的选择上，减少了正己烷与乙酸乙酯的比例，增加了展开剂极性，更有利于斑点的显示，减少了非主斑点的干扰，色谱图斑点清晰，且阴性样品无干扰。经改进，大七厘散中当归的薄层色谱鉴别方法所使用的展开剂比例与止痛紫金丸的一致[18]，而且在大七厘散的处方组成中，除了三七、冰片和硼砂外，其余8味药均为止痛紫金丸的处方组成，说明使用正己烷－乙酸乙酯（4∶1）为展开剂更有利于当归在这2个成方制剂中的薄层色谱鉴别。

综上所述，经过改进大七厘散中大黄、当归薄层色谱鉴别方法，在不增加工作量的前提下，能获得比药典法分离效果更好的图谱，斑点清晰，阴性对照无干扰，适应性较强，符合质量控制要求，值得推广。

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Improvement of TLC Identification ofRheum Palmatum and Radix Angelicae Sinensis in Daqili San

Wen Xin1，2，Jiang Yaolun1，2，Chen Suzhen1，2，Tu Yurong1，2，Li Meidi1，2，Wu Li1，2
（1．Guangzhou Huanongda Experimental Veterinary Drug Co．，LTD．，Guangzhou，Guangdong，China 510642； 2．Guangdong Province Modern Pig Data EngineeringTechnology Research Center，Guangzhou，Guangdong，China 510642）

Objective To improve the TLC identification of Rheum Palmatum and Radix Angelicae Sinensis of Daqili San．M ethods Silica gel H with sodium carboxymethylcellulose as adhesive was used as stationary phase，with normal hexane－ethyl acetate－formic acid（30∶10∶0．5）as developing solvent to separate 5 constituents of Rheum Palmatum in TLC．Hexane－ethyl acetate（4∶1）was used as expansion agents in TLC of Radix Angelicae Sinensis．Results The chromatographic picture was clear，distinct，easy to identify and no interference after improvement．Conclusion The improvement of TLC identification of Rheum Palmatum and Radix Angelicae Sinensis in Daqili San is more adaptable and controllable，it can reach the quality control requirements，which is worthy of promotion．

Daqili San；Rheum Palmatum；Radix Angelicae Sinensis；TLC；quality standard

R284．1

A

1006－4931(2017)14－0007－03

2017－01－29；

2017－02－14)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．14．003

2015年广东省广州市天河区科技计划项目[201508YG066]。

温馨（1989－），女，硕士研究生，主要从事新兽药开发工作，（电子信箱）171034171＠qq．com。

△通讯作者：武力（1970－），男，博士研究生，高级兽医师，主要从事新兽药开发工作，（电子信箱）1187131629＠qq．com。