芩香清解口服液的急性毒性和长期毒性研究

黄娟萍，和 芳，白音夫，顾 凯，朱 明，黄夏梦，邓湘俊，王显著#

(1.广州一品红制药有限公司研发中心，广东 广州 510765； 2.北京创立科创医药技术开发有限公司研发部，北京 100029； 3.内蒙古中蒙医研究所药理室，内蒙古 呼和浩特 010020)



芩香清解口服液的急性毒性和长期毒性研究

黄娟萍1*，和 芳2，白音夫3，顾 凯3，朱 明3，黄夏梦1，邓湘俊1，王显著1#

(1.广州一品红制药有限公司研发中心，广东 广州 510765； 2.北京创立科创医药技术开发有限公司研发部，北京 100029； 3.内蒙古中蒙医研究所药理室，内蒙古 呼和浩特 010020)

目的：探讨芩香清解口服液对小鼠的急性毒性和对大鼠的长期毒性。方法：(1)采用最大给药剂量测定法进行小鼠急性毒性试验。(2)选取大鼠80只进行长期毒性试验，随机分为低、中、高剂量组和对照组，每组20只。于每日上午10点左右给药，低、中、高剂量组大鼠分别给予芩香清解稠膏40、60、80 g/kg，对照组大鼠给予相同体积的蒸馏水，连续灌胃给药4周，停药2周进行恢复性观察。观察大鼠体征、血液分析、脏器系数、肝肾功能及组织切片。结果：急性毒性试验中，小鼠给药后活动减少，未见其他症状。长期毒性试验中，大鼠体征、血液分析、脏器系数、肝肾功能及组织切片均未见明显改变。结论：芩香清解口服液在本研究条件下未发现急性毒性和长期毒性反应，提示该药毒性小，安全性高。

芩香清解口服液； 急性毒性试验； 长期毒性试验

芩香清解口服液是在内蒙古中蒙医院小儿科临床应用多年经验方的基础上研制的中药复方制剂，主要由黄芩、广藿香等12味药材组成，具有疏散风热、清泻里热、解毒利咽的功效，主要用于小儿上呼吸道感染表里俱热证，症见发热、鼻塞、流涕、咳嗽、咽红肿痛、便秘、口渴烦躁、舌红苔黄、脉洪数等。本研究探讨了芩香清解口服液对小鼠的急性毒性和对大鼠长期毒性，以便为临床用药提供依据，初步探讨其临床用药安全性。

1 材料

1.1 仪器

显微镜(北航医学图象分析管理系统)；BP211D型电子天平(德国Sartorius公司)；TGL-20M型高速冷冻离心机(长沙维尔康湘鹰离心机有限公司)；BC-5380贝克曼全血细胞分析仪(美国Bekman-Clouter公司)；42型半自动生化分析仪(英国Bekman公司)。

1.2 药品与试剂

芩香清解稠膏(含生药量5 g/ml，由内蒙古中蒙医院制剂室提供，批号：20010901；20 kg儿童每日服用量以生药量算为20 g)；其他相关试剂由北京生物工程高技术公司生产。

1.3 动物

昆明种小鼠32只，体质量19～21 g，雌雄各半，动物号：京动字8806M35；Wistar种大鼠80只，体质量54～72 g，鼠龄4～5周，雌雄各半，动物号：京动字8806R011；均内蒙古大学实验动物中心提供。

2 方法

2.1 急性毒性试验

(1)毒性预测定：取12只小鼠(禁食6 h)均分为三组，分别灌胃给予芩香清解稠膏0.2、0.3、0.4 ml/10 g，1日3次，给药1 d，给药后观察14 d内小鼠死亡情况。(2)日最大给药量测定：取20只小鼠(禁食6 h)，灌胃给予芩香清解稠膏0.4 ml/10 g、1日3次，给药后观察7 d，每日给药后观察小鼠的表现，主要包括自主活动、毛发生长、饮食量、有无异常分泌物、胀气等，并在给药后第1、3、5、7、14日测定小鼠体质量[1-6]。

2.2 长期毒性试验

选取大鼠80只，随机分为低、中、高剂量组和对照组，每组20只。每笼饲养5只，给药前观察1周，确认每只大鼠均无异常。于每日上午10点左右给药，低、中、高剂量组大鼠分别给予芩香清解稠膏40、60、80 g/kg，对照组大鼠给予相同体积的蒸馏水，1日1次，连续给药4周。给药后观察大鼠的表现，主要包括自主活动、毛发生长、粪便性状、颜色、饮食量、有无异常分泌物、胀气等。每周测定体质量1次。研究期间保持室内温度18～22 ℃，相对湿度40%～75%。给药4周后由尾尖采血，做血液分析，然后用乙醚吸入麻醉、解剖，从腹主动脉采血，测定肝、肾功能，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、子宫、卵巢、脑等形态、颜色、大小等情况，并测定有关脏器系数，最后做不同组织的病理切片检查[5-10]。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 小鼠急性毒性试验结果

(1)毒性预测定结果：14 d内无小鼠死亡。因浓度和体积限制，半数致死量(median lethal dose，LD50)无法求出。(2)小鼠一般临床体征：给药后，小鼠活动相对减少，1 h左右恢复；毛发生长光滑亮泽，肤色正常，无异常分泌物；行为、饮食均正常、无胀气；未见其他不良反应，14 d内无死亡。(3)小鼠体质量：给药期间，小鼠体质量无明显变化；给药后常规饲养2周观察，体质量生理性略有增长，表明芩香清解稠膏对小鼠体质量增长无明显促进和抑制作用，见表1。(4)日最大给药量：结果表明，1日内连续累计给药600 g/kg时，无小鼠死亡，也未见明显不良反应。(5)儿童服用剂量推断：耐受倍数=(小鼠每日累计服用量/小鼠平均体质量)/(儿童每日用量/儿童平均体质量)=600倍。经计算，给予儿童(体质量20 kg；服用剂量以生药量计算为20 g)服用剂量的600倍，不会有明显不良反应。

表1 小鼠体质量变化

3.2 大鼠长期毒性试验结果

(1)大鼠一般临床体征：低、中、高剂量组大鼠在给药30 min后，粪稀色黑，1 h后恢复正常；四组大鼠毛发生长光滑亮泽，肤色正常，均无异常分泌物，行为、饮食均正常、无胀气。表明，芩香清解稠膏对大鼠一般临床体征无明显不良影响，且停药2周后也未见不良反应。(2)大鼠体质量：服药期间及停药2周后，四组大鼠体质量的差异无统计学意义(P>0.05)。表明芩香清解稠膏对大鼠体质量无明显促进和抑制作用，也无因停药使大鼠体质量增加异常或生长抑制作用，见表2。(3)大鼠血液情况：治疗后，四组大鼠血液分析结果基本一致，停药2周后也未发现异常。表明芩香清解稠膏对大鼠血液情况无明显不良影响，见表3。(4)大鼠肝功能：用酶法测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、胆固醇(CHO)，用比色法测定血清白蛋白(ALB)，用重氮法测定胆红素(BIL)。结果表明，该药对大鼠肝功能无明显影响；停药2周后也未见肝功能有异常变化，说明该药长期服用是安全的，见表4。(5)大鼠肾功能：用终点法测定血尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)。结果表明，该药对大鼠肾功能无明显不良影响；停药2周后也未见肾功能有异常变化，见表5。(6)大鼠解剖观察：给药4周后及停药2周后，四组大鼠均用乙醚吸入麻醉，并立刻解剖，从腹主动脉插管放血使其死亡。按消化、泌尿、生殖、内分泌、呼吸、循环、中枢系统进行肉眼观察；消化系统重点察看肝、脾、胃、十二指肠、胰腺；泌尿系统察看肾脏；生殖系统察看睾丸、附睾、前列腺、精囊腺、子宫、卵巢；内分泌察看肾上腺、甲状腺、胸腺；呼吸循环系统察看肺心；中枢系统察看大脑、小脑、脑干。主要察看大小、颜色、形态、黏连、瘀血、溃疡、积液、异常肿物、胀气。结果表明，四组大鼠均未发现明显病理改变。(7)大鼠脏器系数测定：对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、甲状腺、卵巢、子宫、睾丸、附睾指数测定。结果表明，该药对大鼠不同脏器及腺体组织无损害作用而引起的肥大或萎缩，也无生长促进或抑制作用，停药2周后四组大鼠均未见明显改变，见表6。(8)大鼠组织切片检查：取服药4周后及停药2周后的高剂量组、对照组大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、甲状腺、子宫、卵巢、睾丸、附睾、前列腺、胰腺、大脑、胃、结肠，进行病理切片检査。结果均未发现明显病理改变，高剂量组大鼠与对照组基本一致，组织切片结果见图1。由于高剂量组未做出与样品有关的毒性反应，故中、低剂量组免做组织病理切片检查。

表2 大鼠体质量变化

表3 四组大鼠血液分析情况比较

表4 四组大鼠肝功能情况比较

表5 四组大鼠肾功能比较Tab 5 Comparison of renal function of rats among

4 讨论

芩香清解口服液由黄芩[11-12]、赤芍[13]、甘草、大黄[14]、蝉蜕[15]、石膏、板蓝根[16-17]、桔梗[18]、山豆根、玄参等12味常用药材组成，有效成分明确。相关文献资料显示，上述药材及有效成分基本无明显毒副作用。

本研究取芩香清解稠膏80、60、40 g/kg(相当临床芩香清解口服液用量80、60、40倍)，给予大鼠灌胃，1日1次，连续给药4周。对大鼠进行体质量、饮食量、活动、外周血象、肝肾生化功能检查、脏器解剖检查、相关组织病理学切片检查，结果显示,均未发现因药物引起的中毒反应。对停药2周的恢复期大鼠观察上述指标，也未见药物引起的迟发性毒性反应。芩香清解口服液由芩香清解稠膏稀释后加入适量惰性辅料蔗糖和吐温80,定容至相应体积灭菌后即得，芩香清解稠膏毒性研究可间接反映芩香清解口服液相关安全性。实验结果表明，芩香清解口服液毒性低，在规定剂量下服用安全。同时在医师指导下提高服用量一般不会出现不良反应。

表6 四组大鼠脏器系数比较

1.对照组，心，×20；2.高剂量组，心，×40；3.对照组，肝，×20；4.高剂量组，肝，×20；5.对照组，脾，×20；6.高剂量组，脾，×20；7.对照组，肺，×20；8.高剂量组，肺，×20；9.对照组，肾，×40；10.高剂量组，肾，×40；11.对照组，肾上腺，×20；12.高剂量组，肾上腺，×20；13.对照组，甲状腺，×40；14.高剂量组，甲状腺，×40；15.对照组，胸腺，×20；16.高剂量组，胸腺，×20；17.对照组，子宫，×20；18.高剂量组，子宫，×20；19.对照组，卵巢，×20；20.高剂量组，卵巢，×20；21.对照组，睾丸，×20；22.高剂量组，睾丸，×20；23.对照组，附睾，×20；24.高剂量组，附睾，×20；25.对照组，结肠，×20；26.高剂量组，结肠，×40；27.对照组，胃，×20；28.高剂量组，胃，×20；29.对照组，大脑，×20；30.高剂量组，大脑，×20；31.对照组，前列腺，×20；32.高剂量组，前列腺，×20；33.对照组，胰腺，×20；34.高剂量组，胰腺，×401.control group, heart, ×20; 2.high dose group, heart, ×40; 3.control group, liver, ×20; 4.high dose group, liver, ×20; 5.control group, spleen, ×20;6.high dose group, spleen, ×20; 7.control group, lung, ×20； 8.high dose group, lung, ×20；9.control group, renal, ×40; 10.high dose group, renal, ×40; 11.control group, adrenal gland, ×20; 12.high dose group, adrenal gland, ×20; 13.control group, thyroid, ×40; 14.high dose group, thyroid, ×40; 15.control group, thymus, ×20; 16.high dose group, thymus, ×20; 17.control group, uterus, ×20; 18.high dose group, uterus, ×20; 19.control group, ovary, ×20; 20.high dose group, ovary, ×20; 21.control group, testis, ×20; 22.high dose group, testis, ×20; 23.control group, epididymis, ×20; 24.high dose group, epididymis, ×20; 25.control group, colon, ×20; 26.high dose group, colon, ×40; 27.control group, stomach, ×20; 28.high dose group, stomach, ×20; 29.control group, cerebrum, ×20; 30.high dose group, cerebrum, ×20; 31.control group, prostate, ×20; 32.high dose group, prostate, ×20; 33.control group, pancreas, ×20; 34.high dose group， pancreas, ×40图1 不同组织苏木精-伊红染色切片图Fig 1 Figure of different organizations HE staining slice

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Study on Acute and Long-term Toxicity of Qinxiangqingjie Oral Solution

HUANG Juanping1, HE Fang2, BAI Yinfu3, GU Kai3, ZHU Ming3, HUANG Xiameng1, DENG Xiangjun1, WANG Xianzhu1

(1.Research and Development Center, Guangzhou Yipinhong Pharma-ceutical Co. Ltd., Guangdong Guangzhou 510760, China; 2.Dept.of Research and Development, Beijing Supertrack Medical Technology Develop Co. Ltd, Beijing 100029, China; 3.Dept.of Pharm-acology, Inner Mongolia Institute of Traditional Chinese-Mongolian Medicine, Inner Mongolia Hohhot 010020, China)

OBJECTIVE: To probe into the effects of Qinxiangqingjie oral solution on acute toxicity in mice and long-term toxicity in rats. METHODS: (1)Maximum dosimetry was adopted to conduct the acute toxicity test. (2)80 rats extracted for the long-term toxicity test were randomly divided into low, medium and high dose group and control group, with 20 cases in each. Drugs were given at 10:00 am everyday, low, medium and high dose group were respectively treated with Qinxiangqingjie oral solution of 40 g/kg, 60 g/kg and 80 g/kg, yet the control group

the same volume of distilled water; continuous gastric infusion were given for 4 weeks, with drug withdrawal for 2 weeks. Rats’ signs, blood analysis, organ coefficient, liver, renal function and tissue slice were observed. RESULTS: During the acute toxicity test, the mice decreased the activity after administration, yet there were no other symptoms. During the long-term toxicity test, there was no significant changes in rats’ signs, blood analysis, organ coefficient, liver, renal function and tissue slice. CONCLUSIONS: Under this experiment condition, there are no acute and long-term toxicity fund in Qinxiangqingjie oral solution, which indicates that Qinxiangqingjie oral solution is safe and reliable.

Qinxiangqingjie oral solution; Acute toxicity; Long term toxicity

R99

A

1672-2124(2017)07-0934-04

2017-03-12)

*工程师，硕士。研究方向：新药研发。E-mail：390447099@qq.com

#通信作者：高级工程师，硕士。研究方向：新药研发。E-mail：wxz971509@163.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.07.026