HPLC法测定贞芪扶正胶囊中特女贞苷的含量

杨立勇

云南省曲靖市食品药品检验检测中心，云南 曲靖 655000



HPLC法测定贞芪扶正胶囊中特女贞苷的含量

杨立勇

云南省曲靖市食品药品检验检测中心，云南 曲靖 655000

目的：建立高效液相色谱法测定贞芪扶正胶囊中特女贞苷含量的方法。方法:色谱柱为Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱温为25℃；流动相为甲醇-水(36∶64)；流速为1.0mL/min； 检测波长为224nm。结果: 特女贞苷的进样量在0.328 3～4.924 4μg范围内与对应峰面积呈良好的线性关系(r=1.0000,n=8)；精密度、重复性、稳定性的RSD均<1.0%；平均加样回收率100.8%，RSD=0.67%(n=6)。结论:本方法专属性强、精密度高、分离度好,可用于测定贞芪扶正胶囊中特女贞苷的含量。

HPLC法；贞芪扶正胶囊；特女贞苷；含量测定

贞芪扶正胶囊是由女贞子、黄芪等药经加工而制成的胶囊剂，具有补气养阴之功效，用于久病虚损、气阴不足。女贞子为木犀科植物女贞LigustrumlucidumAit 的干燥成熟果实，具有扶正固本、滋补肝肾、明目乌发的功效。药理研究表明，女贞子有保肝[1-4]、免疫调节[5-6]、抗氧化抗衰老[7]、降血糖降血脂[1,8-10]、抗癌[1,5,11-13]、抗炎抑[5,14-15]等作用。贞芪扶正胶囊现行质量标准[16]为原卫生部颁标准(中药成方制剂第十七册)，其标准只对黄芪进行质控，由于中成药组方复杂，不能只控制其中一味药的质量，有必要对其它药物进行质量控制，才能发挥其应有疗效。笔者参照中国药典[17]及文献[18-23]，建立了HPLC法测定贞芪扶正胶囊中特女贞苷的含量的方法，为提升贞芪扶正胶囊的质量标准提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津LC-20A型高效液相色谱仪(真空在线脱气机，四元泵，自动进样器，柱温箱， VCD检测器，Chemstation化学工作站)；METTLER TOLEDO MS205DU型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2 材料 特女贞苷对照品(批号:111926-201404，购自中国食品药品检定研究院，含量：97.3%)，贞芪扶正胶囊(批号: 141036，150806，160422，甘肃扶正药业科技股份有限公司)。乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱温为25℃；流动相：甲醇-水(36∶64)；流速为1.0mL·min-1； 检测波长为224nm；进样量：10μL。

2.2 样品制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取特女贞苷对照品33.74mg，置100mL容量瓶中，加50%乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液储备液(质量浓度:0.3283mg/mL)，精密量取对照品储备液5mL，置10mL容量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品使用液(质量浓度:0.1642mg/mL) 。

2.2.2 供试品溶液的制备 取贞芪扶正胶囊10粒，混匀，称取约0.5g(相当于1.5粒的样品)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制法，制得除女贞子的阴性样品。按2.2.2项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 取2.2.1项下的对照品使用液, 用0.45μm的微孔滤膜滤过。分别精密吸取滤液2、4、6、8、10、15、20、30μL进样，记录峰面积。以特女贞苷的进样量(x)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标，进行线性回归，回归方程为y=1524503.7x-38125.1，r=1.0000(n=8)。结果表明，特女贞苷的进样量在0.3283～4.9244μg的范围内与对应峰面积呈良好的线性关系。特女贞苷对照品、供试品及阴性对照的色谱图见图1。

2.3.2 精密度考察 精密吸取2.2.1项下经0.45 μm的微孔滤膜滤过的对照品溶液10μL，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD为0.68%(n=6)。表明仪器精密度良好。

2.3.3 专属性考察 吸取2.2.3项下的阴性样品溶液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，结果阴性对照在与对照品保留时间相应位置上，没有相应的色谱峰，表明阴性对照不干扰测定。

2.3.4 重复性考察 取同一批样品(批号：160422)6份，按2.2.2项下制备，测定特女贞苷的含量，其含量的RSD为0.53%。

2.3.5 稳定性考察 取2.2.2项下制备的同一样品,分别在0、2、4、8、16、24、36h时进样10 μL，记录峰面积。结果，RSD为0.83%(n=7)。表明样品36h内稳定。

2.3.6 加样回收率考察 取已测定含量的贞芪扶正胶囊 (批号：160422)6份，每份约0.25g，精密称定，精密加入特女贞苷对照品储备液10mL，再精密加入50%乙醇40mL，按2.2.2项下操作。测得特女贞苷的加样回收率见表1。

表1 加样回收率试验结果 (n=6)

2.3.7 样品测定结果 取3批贞芪扶正胶囊，按2.2.2项下的方法操作，测定含量。结果见表2。

3 讨论

3.1 样品提取方法的选择 参考中国药典[17]及相关文献[18-23]，对用不同浓度的甲醇(50%、75%、100%)和乙醇(50%、75%、100%)作为提取溶剂，超声和回流两种提取方法，以及在以上基础上提取时间(30、45min，1、2h)上进行比较，发现用50%的乙醇回流提取1h效果最好。从而确定用50%的乙醇回流提取1h为本试验的提取方法。

3.2 检测波长的选择 取特女贞苷对照品溶液在200～500nm范围内进行紫外扫描，特女贞苷在224nm处有最大吸收。并考照中国药典[17]及文献[19-23]，将检测波长定为224nm。

3.3 流动相的选择 参考中国药典[17]及文献[19-21]，把流动相初步定为甲醇-水(40∶60)，但分离效果一般，对流动相比例进行反复调整，当流动相比例为甲醇-水(36∶64)时，分离良好，所以本实验的流动相最终为甲醇-水(36∶64)。

综上，该方法专属性强、精密度高、分离度好，可用于测定贞芪扶正胶囊中特女贞苷的含量。

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Determination of Specnuezhenide in Zhenqifuzheng Capsule by HPLC

YANG Liyong

Qujing Center for Food and Drug Control of Yunnan，Qujing 655000，China

Objective To develop a High Performance liquid chromatography (HPLC) method for the determination of Specnuezhenide in Zhenqifuzheng capsule. MethodS Separation was performed at 25°C on a Thermo SCIENTIFIC Hypersil GOLD C18column (4.6mm×250mm, 5μm) using methanol and water (36∶64) as mobile phase which was delivered at 1.0 mL·min-1. Ultraviolet detection was performed at 224nm. Results The linear range of Specnuezhenide were 0.328 3～4.924 4μg(r=1.0000,n=8)with an average recoveryof 100.8%(RSD=0.67%，n=6). TheRSDof precision， stability and reproducibility tests were lower than 1.0%. Conclusion The method was strong specificity, high precision and with good separation which can be applied in content determination for Specnuezhenide of Zhenqifuzheng capsule.

HPLC；Zhenqifuzheng Capsule；Specnuezhenide；Determination

杨立勇(1974-)，男，本科，主管药师，研究方向为食品药品检验检测、食品安全项目管理。E-mail:2443390891@qq.com

R282

A

1007-8517(2017)14-0044-03

2017-05-18 编辑：程鹏飞)