低分子酪氨酸磷酸酶表达水平与前列腺癌预后进展风险的相关性研究

王锋赵淼周大宏夏似龙倪少滨

低分子酪氨酸磷酸酶表达水平与前列腺癌预后进展风险的相关性研究

王锋1赵淼1周大宏1夏似龙1倪少滨2

目的 探讨原发性前列腺癌低分子酪氨酸磷酸酶（LMWPTP）表达水平及与前列腺癌预后的相关性。方法 通过微阵列数据采集低分子酪氨酸磷酸酶（LMWPTP）的表达水平，将获得的数据采用精准途径分析。采用免疫组织化学法制造组织芯片，芯片包含122例前列腺癌患者临床病理材料的信息，对所有患者组织芯片进行染色，根据染色密度判定细胞质内LMWPTP表达水平，将其分成高表达组（2～3分）及低表达组（0～1分），利用统计学软件研究两组患者在术后生化复发及疾病进展时间等指标是否存在差异。结果 在前列腺癌患者中低分子酪氨酸磷酸酶表达水平增高，其与肿瘤早期复发及降低患者生存率有相关性。结论 前列腺细胞中低分子酪氨酸磷酸酶的过度表达提示预后不良，预期随访应监测低分子酪氨酸磷酸酶过度表达的风险，及时采取有效的措施进行干预，改善患者预后。

磷酸酶；表达水平；前列腺癌；进展风险

前列腺癌是男性中常见的恶性肿瘤，尤其是在许多欧美国家，严重影响患者健康及生活。文献报道显示：早年间我国男性前列腺癌发生率较低，仅为2.4/10万，但是随着人口老龄化的日益加剧，导致前列腺癌发生率呈上升及年轻化趋势，严重影响我国男性健康。目前，临床上对于前列腺炎以前列腺癌根治术、放疗、化疗等为主，这些方法虽然能改善患者症状，但是长期疗效欠佳，再加上患者治疗过程中缺乏理想的预测指标，导致难以准确的评估患者预后[1]。同时，前列腺癌发病早期临床症状缺乏特异性，多数患者一旦确诊已经伴有不同程度的骨转移、淋巴结转移等，错过了最佳治疗时机。目前，临床上对于前列腺癌发病机制尚不完全知晓，其细胞的增殖、粘附、迁移及死亡等与细胞内磷酸化的激酶和磷酸酶水平有关。研究表明：致癌激酶的释放有助于癌症的发展。低分子量蛋白酪氨酸磷酸酶（LMWPTP）的增强表达与一些人类肿瘤的预后差异相关[2-3]。这可能与这种18-kDa蛋白酪氨酸磷酸酶与癌相关分子如血小板衍生生长因子受体，β-连环蛋白，ephrin-A型受体2（EphA2），Janus激酶2（JAK2）相互作用的事实有关。此项研究的目的是监测在前列腺癌细胞中低分子酪氨酸磷酸酶的表达水平与前列腺癌临床进展之间的关系[4-7]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年12月—2015年4月医院收治前列腺癌患者122例，年龄48～74岁，平均（63.24±3.12）岁，血清PSA术前浓度8.4～36.9 ng/ml，平均（15.42±2.14）ng/ml。患者均行前列腺癌根治性前列腺切除术治疗，采集切除肿瘤标本。临床分期分类：T2期73例；T3a期33例；T3b期16例；Gleason评分≤7的患者88例，Gleason评分＞7的患者34例；手术边缘呈阳性患者43例；阴性患者79例。对入组122例患者均进行20～24个月随访，平均（21.81±2.31）个月，2例死于前列腺癌，2例死于其他原因，118例未死亡。在随访期间，122例患者中有25例患有生化复发（BCR），32例疾病进展。

1.2 方法

取切除的肿瘤标本，放置在福尔马林溶液中浸泡，浸泡完毕后制备4 μm切片，使用手动码放装置（MTA-1比彻仪器公司，太阳牧场，WI），安装21.00 mm组织核心。使用自动IHC染色程序（Techmate 500 Dako，Copenhagen，Denmark），将所有组织切片免疫组织染色LMWPTP（ACP1抗体，sc-100343，Santa Cruz Biotechnologies，Dallax，Tx）进行免疫组织化学（IHC）染色。简单地说，将4 μm厚的切片干燥，脱蜡，再水化，并在900、750、650和300 W的微波炉中，在每个能级上与标靶恢复液（pH 9.9；Dako）一起温育2 min。将切片与终浓度为0.2 μg/ ml LMWPTP的一抗孵育。过氧化物酶/DAB（Dako）用于与二抗孵育和可视化。苏木精用于抗细胞核染色。

1.3 评定标准

染色切片由2名经验丰富的临床病理学医生进行评估。细胞质染色强度分级为0~3，0为“无染色”，1为“弱染色”，2为“中度染色”，3为“强染色”。对于生存分析，根据评分情况LMWPTP表达被分为两组，高表达组（评分2和3）和低表达组（评分0和1）。假设增长的LMWPTP表达水平与肿瘤细胞侵袭性有关，进行χ2检验等方法进行验证，来确定是否可以通过增长的LMWPTP表达水平可以预测前列腺癌不良预后。生化复发（BCR）定义为PSA＞0.2 ng/ml，具有确认水平，临床进展包括BCR、穿刺活检阳性、影像学改变和前列腺癌导致死亡。术后血清PSA水平升高（生化复发，BCR）定义为血液中PSA浓度＞0.2 ng/ml，具有确认价值，广泛用于监测根治性前列腺切除术的结果。

1.4 统计学方法

采用Cox比例风险回归模型用于单变量和多变量分析。在计算风险比时，使用低染色强度作为指示类别。所有计算均使用SPSS 18.0软件进行分析。所有统计检验均为双侧，P＜0.05，表示差异具有统计学意义。

表1 根据LMWPTP的低表达和高表达，Cox对生化无复发和无进展时间的单变量和多变量分析

2 结果

研究LMWPTP表达是否与临床结果相关，使用无BCR的时间和临床无进展时间作为主要终点。在随访期间122例患者中，25例（20.4%）患者经历BCR，32例（26.2%）患有疾病进展。单变量分析显示LMWPTP表达是BCR[危险比（HR）0.597，95%CI：0.372～0.944，P=0.029]和临床进展（HR: 0.558，95%CI: 0.366～0.849，P=0.008）的重要预后因子。在多变量分析中，包括术前PSA水平的调整，Gleason评分，是否存在阳性手术边缘，LMWPTP仍然是生化无复发时间的独立预后因素（HR：0.489，95%CI：0.277～0.869，P=0.015）和临床无进展时间（HR： 0.469，95%CI：0.285～0.776，P=0.004）（见表1）。前列腺切除标本中肿瘤特异性LMWPTP表达水平低的患者与LMWPTP高表达患者相比，BCR和临床进展的结局明显较差。

多变量分析考虑参数包括术前PSA水平的调整，Gleason评分，是否存在阳性手术边缘。

3 讨论

LMWPTP的过度表达足以驱动上皮细胞的转化，且在成神经细胞瘤和乳腺癌中均有表达。研究表明：LMWPTP在成神经细胞瘤和乳腺癌中均呈高表达。本研究中报道了LMWPTP水平的升高，并表明LMWPTP高表达的患者与前列腺癌根治性前列腺切除术后生化复发和临床进展的时间缩短。大多数根治性前列腺切除术后，血清PSA浓度降低到不可检测的水平[8-12]。反映成功根除肿瘤组织，PSA水平的随后升高是肿瘤复发的标志物。不幸的是，目前的诊断和预后标志物，包括术前PSA水平和肿瘤的组织学分级，并没有充分区分那些患有疾病复发风险的患者[13-15]。因此，寻找新的分子标记物对于更好的前列腺癌患者的预后分层是重要的。本研究显示LMWPTP表达水平与BCR和临床进展的时间有相关性，并且多变量分析显示，当调整术前PSA水平，Gleason评分和存在时，LMWPTP仍然是独立的预测因子。我们得出结论，LMWPTP高表达可能作为识别肿瘤复发风险增加的前列腺癌患者的标志物，可有助于鉴定符合主动监测策略的患者。

综上所述，前列腺细胞中低分子酪氨酸磷酸酶的过度表达提示预后不良，预期随访应监测低分子酪氨酸磷酸酶过度表达的风险，及时采取有效的措施进行干预，改善患者预后。

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The Correlation Study of Low Molecular Tyrosine Phosphatase Expression With Risk of Prognosis in Patients With Prostate Cancer

WANG Feng1ZHAO Miao1ZHOU Dahong1XIA Silong1NI Shaobin21 Department of Urology, Heilongjiang Provincial Hospital, Harbin Heilongjiang 150001, China; 2 Department of Urology, The First Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Harbin Heilongjiang 150001, China

Objective To investigate the expression of low molecular tyrosine phosphatase (LMWPTP) in primary prostate cancer and its correlation with prognosis of prostate cancer. Methods The expression levels of low molecular tyrosine phosphatase (LMWPTP) were collected by microarray data, and the data obtained were analyzed by precise pathway. Manufacture of tissue microarray was determined by immunohistochemical method, the chip containing 122 cases of prostate cancer clinical pathological material information for all patients with tissue microarray were stained according to the staining density to determine the expression level of LMWPTP in the cytoplasm, they were divided into high expression group (2~3) and low expression group (0~1), based on statistical software, the differences of postoperative recurrence and disease progress time of biochemical indicators between two groups were analysed. Results The expression of low molecular tyrosine phosphatase in patients with prostate cancer was significantly higher, which was related to the early recurrence and the survival rate of patients with prostate cancer. Conclusion The over expression of prostate cancer cells with low molecular tyrosine phosphatase indicates poor prognosis, the expected follow-up should monitor the risk of low molecular tyrosine phosphatase expression, take timely and effective measures for intervention to improve the prognosis of patients.

phosphatase; expression levels; prostate cancer; progression risk

R737

A

1674-9316（2017）15-0060-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2017.15.035

1 黑龙江省医院泌尿外科，黑龙江 哈尔滨 150001；2 哈尔滨医科大学第一附属医院泌尿外科，黑龙江 哈尔滨 150001

倪少滨