紫外-可见分光光度法测定紫草油中羟基萘醌总色素的含量Δ

苗 颖，李英男，李 栋，梁莹莹，张淑君，陆 进，赫 军，马秉智#，杨 丽

(1.中日友好医院药学部，北京 100029； 2.清华大学医院药剂科，北京 100084； 3.北京市食品药品监督管理局注册处，北京 100053)

紫外-可见分光光度法测定紫草油中羟基萘醌总色素的含量Δ

苗 颖1*，李英男2，李 栋1，梁莹莹1，张淑君1，陆 进1，赫 军1，马秉智1#，杨 丽3

(1.中日友好医院药学部，北京 100029； 2.清华大学医院药剂科，北京 100084； 3.北京市食品药品监督管理局注册处，北京 100053)

目的：建立紫外-可见分光光度法测定紫草油中羟基萘醌总色素含量的方法。方法：羟基萘醌总色素的含量以左旋紫草素计，溶剂为乙醇，检测波长为516 nm。结果：左旋紫草素质量浓度在8.08～40.40 μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0.999 9，n=5)，平均加样回收率为97.97%(RSD=1.70%，n=5)。结论：该方法简便、准确，回收率与精密度高，重现性好，可用于紫草油中羟基萘醌总色素含量的测定。

紫外-可见分光光度法； 紫草油； 左旋紫草素； 羟基萘醌总色素； 含量测定

紫草油是一种外用油状中药搽剂，最早收载于1984年版《北京市医疗单位制剂规程》[1]，处方主要成分为紫草，辅料为花生油，具有清热解毒、凉血止痛之功能，临床上用于治疗烫伤、溃疡、湿疹等。现行2014年版《北京市医疗单位制剂规程》[2]对紫草油质量标准进行了改进，主要增加了薄层鉴别项。本研究在紫草油质量标准改进研究[3]的基础上，采用紫外-可见分光光度法对其中羟基萘醌总色素进行含量测定，以完善该制剂的质量标准。

1 材料

1.1 仪器

UVmini 1240型紫外分光光度计(日本岛津公司)；L-200SM型电子天平(日本岛津公司)。

1.2 药品与试剂

紫草油(由首都医科大学附属北京安贞医院生产，批准文号：京药制字Z20083001，批号：120910)；左旋紫草素(由中国食品药品检定研究院提供，批号：110769-200405)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

准确称取于105 ℃干燥至恒质量的左旋紫草素对照品20.20 mg，置于500 ml容量瓶中，用乙醇溶解并定容，摇匀，即得40.4 μg/ml的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取紫草油1.0 g，精密称定，精密加入乙醇50 ml，超声3 min，溶解，离心(转速为5 000 r/min，时间为5 min)，精密量取续滤液2 ml置于5 ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 测定波长的选择：

精密量取“2.1”项下左旋紫草素对照品溶液6.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加入乙醇至刻度，并以乙醇为空白在波长为400～800 nm范围内进行扫描。同理，测定空白花生油。结果显示，左旋紫草素在波长为(516±1)nm处有最大吸收峰，与《中华人民共和国药典：一部》(2015年版)[4]“紫草”项下对应检测波长一致，而空白花生油在此波长处无吸收，故对测定无干扰。紫外吸收光谱见图1。

1. 左旋紫草素对照品；2.紫草油；3.空白植物油基质1.L-shikonin reference substance； 2.zicao oil；3.vegetable oil blank substrate图1 紫外吸收光谱Fig 1 Uv-vis absorption spectroscopy

2.4 标准曲线的绘制

分别精密量取“2.1”项下左旋紫草素对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 ml，置于10 ml容量瓶中，分别加入乙醇至刻度，摇匀，以乙醇为空白，在波长为516 nm处测定吸光度。以吸光度(A)对质量浓度(C)进行线性回归，得标准曲线方程为A=0.021 7C+0.005 5(r=0.999 9，n=5)。结果表明，左旋紫草素质量浓度在8.08～40.40 μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取同一供试品，分别于同日及不同日各测定吸光度5次。结果显示，日内、日间RSD分别为0.01%、0.91%。

2.6 稳定性试验

室温(25 ℃)下，取同一供试品，分别于0、2、4、6、8 h测定吸光度。结果显示，RSD为1.16%，表明供试品溶液在室温(25 ℃)下8 h内稳定。

2.7 加样回收率试验

分别称取同一已知左旋紫草素含量的供试品约0.5 g，共5份，精密称定，再精密加入相应量的左旋紫草素对照品溶液，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在波长为516 nm处测定吸光度，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=5)

2.8 样品含量测定

分别取紫草油1.0 g，精密称定，精密加入乙醇50 ml，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，在波长为516 nm处测定吸光度，用标准曲线法计算样品含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=5)

3 讨论

查阅近年来有关紫草油和复方紫草油质量控制方面的文献[5-9]，发现大多数均以左旋紫草素或者β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁作为含量测定指标。这2个指标均为单一成分，但都属于羟基萘醌总色素。因此，为了完善该制剂的质量标准，本研究在紫草油质量标准改进研究[3]的基础上，采用紫外-可见分光光度法又对其中羟基萘醌总色素(以左旋紫草素计)进行了含量测定，该方法简便，回收率高，精密度好，且基质对测定无干扰。因此，该方法可用于紫草油的质量控制。

2014年版《北京市医疗单位制剂规程》中紫草油的质量标准包括[处方]、[制法]、[性状]、[鉴别]、[检查]、[功能主治]、[用法用量]、[规格]、[贮藏]，羟基萘醌总色素含量测定是本课题在此基础上进行的深入研究，因此，并未列入该标准中。

(致谢：首都医科大学附属北京安贞医院提供紫草油样品。)

[1]北京市卫生局.医疗单位制剂规程[S].1984年版.北京：北京市卫生局，1984：119.

[2]北京市食品药品监督管理局.北京市医疗机构制剂规程[S].2014年版第一册.北京：中国商业出版社，2014：32-33.

[3]马秉智，周宇，李英男，等.紫草油的质量标准改进研究[J].中国医院药学杂志，2015，35(3)：247-249.

[4]国家药典委员会编.中华人民共和国药典：一部[S].2015年版.北京：化学工业出版社，2015：340-341.

[5]欧阳净，陈勇川，戴青.复方紫草油的质量标准改进研究[J].中国药房，2011，22(43)：4091-4092.

[6]林雄，潘旭东，黄燕，等.HPLC测定紫草油中左旋紫草素的含量[J].海峡药学，2011，23(7)：83-85.

[7]王贵英，路勇，左宏笛.高效液相色谱法测定紫草油中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量[J].中国医院用药评价与分析，2013，13(12)：1089-1091.

[8]徐玉娥，刘效栓，李喜香，等.玉红膏中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量测定及QCC图在其质量管理中的应用[J].中国药房，2013，24(43)：4087-4089.

[9]赵妹，侯金玲，宋晓艳，等.正交试验优化紫草油制备工艺[J].现代中药研究与实践，2016，30(2)：46-48.

Content Determination of Hydroxynaphthoquinone Pigments in Zicao Oil by Ultraviolet-Visable SpectrophotometryΔ

MIAO Ying1, LI Yingnan2, LI Dong1，LIANG Yingying1, ZHANG Shujun1, LU Jin1, HE Jun1, MA Bingzhi1, YANG Li3

(1.Dept.of Pharmacy, China-Japan Friendship Hospital, Beijing 100029, China; 2.Dept.of Pharmacy, Hospital of Tsinghua University, Beijing 100084, China; 3.Registry, Beijing Food and Drug Administration, Beijing 100053, China)

OBJECTIVE：To establish a method for content determination of hydroxynaphthoquinone pigments in zicao oil by ultraviolet-visable spectrophotometry. METHODS: Content of hydroxynaphthoquinone pigments was counted in L-shikonin. Methanol was used as solvent and the wavelength was set at 516 nm. RESULTS: The concentration of L-shikonin showed a good linear relationship with absorbance in the range of 8.08 μg/ml-40.40 μg/ml(r=0.999 9，n=5).The average recovery was 97.97%(RSD=1.70%,n=5). CONCLUSIONS: This method is simple, precise and replicable resulting in high recovery and accuracy, which can be used to determine the content of hydroxynaphthoquinone pigments in zicao oil.

Ultraviolet-visable spectrophotometry; Zicao oil; L-shikonin; Hydroxynaphthoquinone pigments; Content determination

首都卫生发展科研专项项目(No.首发2011-2008-01)；北京市医疗机构制剂标准评价体系及标准提高研究(No.Z121100000312005)

R927.2

A

1672-2124(2017)05-0587-02

2017-02-28)

*药师。研究方向：药品调剂。E-mail：Narssy@163.com

#通信作者：副主任药师，硕士。研究方向：医院制剂制备工艺及质量标准研究。E-mail：mbz20052002@aliyun.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.05.004