息肉状脉络膜血管病变患者血清中常见趋化因子的变化*

张亚芳，操盛春，张晓斌，李青春，胡彩平，吴开力，文 峰**，李 岱**

(1.湖北科技学院，湖北 咸宁 437100；2.中山大学中山眼科中心)



息肉状脉络膜血管病变患者血清中常见趋化因子的变化*

张亚芳1，操盛春1，张晓斌1，李青春1，胡彩平1，吴开力2，文 峰2**，李 岱1**

(1.湖北科技学院，湖北 咸宁 437100；2.中山大学中山眼科中心)

目的 检测息肉状脉络膜血管病变(PCV)患者血清中嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin)、生长相关蛋白(GRO-α)、白介素-8(IL-8)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及调剂活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)的表达，为进一步探讨PCV的发病机制提供依据。方法 采集30例PCV患者血清，并以35例无眼底疾病的白内障患者血清作为正常对照组，应用多因子检测试剂盒对两组血清中的Eotaxin、GRO-α、IL-8、IP-10、MCP-1及RANTES的表达进行检测，分析各因子在两组血清中的表达差异。结果 在PCV患者血清中Eotaxin平均浓度为(48.90±24.76) pg/mL，高于对照组(37.49±14.39)pg/mL，差异具有统计学意义(P<0.05)。其他几种趋化因子的表达无明显差异(P>0.05)。结论 Eotaxin在PCV血清中表达明显增高，提示Eotaxin可能在PCV的发生和发展中起重要作用。

息肉状脉络膜血管病变；趋化因子；嗜酸性粒细胞活化趋化因子；多因子检测技术

息肉状脉络膜血管病变(polypoidal choroidal vasculopathy，PCV)是一种特殊眼底疾病，能够导致严重视力损害，甚至失明，近几年来在我国的发病率越来越高。PCV病理学研究显示脉络膜血管硬化和息肉灶血管壁弹性蛋白功能异常，目前PCV具体的病因和发病机制尚不明确，有学者认为PCV是脉络膜新生血管(choroidal neovacularization，CNV)的一种，息肉状的病灶可能由色素上皮的慢性退行性变和炎症导致，也有研究发现：眼局部的一些细胞因子和趋化因子会在PCV发病过程中发生变化[1-2]。而PCV发病过程中，外周血中的趋化因子是否会发生变化，国内还罕见相关文献报道。我们通过研究PCV患者和相应对照组血清中6个趋化因子的表达情况，分析其变化的意义，为进一步探索PCV发病机制提供线索和诊治提供新靶标。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2014年12月至2016年6月中山大学中山眼科中心门诊和病房经常规眼科检查、吲哚菁绿血管造影及光学相干断层扫描确诊的PCV患者30例为PCV组，具体诊断标准参考2013年Koh报道的专家共识[3]。对照组选取无眼底疾病的白内障患者35例。两组患者年龄和性别具有可比性(P>0.05)。所有入组患者需排除系统性疾病史如高血压、糖尿病，感染性或自身免疫性疾病，曾经患过肿瘤、血液病、肝病、肺病、心血管疾病，包括冠状动脉疾病、中风、周围动脉疾病及近6个月有手术史等，且眼部没有经过眼底疾病的相关治疗，并签署相关知情同意书。

1.2 样本采集 采集所有入组患者清晨空腹全血于真空采血管中，置于4℃冰箱静置30～45min，4℃、5000rpm离心10min，取上清液于新的无菌EP管中，分装每管200μL编号置于-80℃保存备用。

1.3 实验方法 免疫磁珠多因子检测试剂盒[包括嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin)]、生长相关蛋白(GRO-α)、白介素-8(IL-8)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、单核细胞趋化蛋白-1(mMCP-1)、调剂活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)购于美国eBioscience公司，具体实验步骤按试剂说明书操作流程进行。注意操作过程每次甩掉孔内液体前需将96孔板固定于磁力架上静置5min，使磁珠沉积于板底部勿被甩出，孵育时96孔板置于室温振荡器上中的振荡。最后用美国Luminex公司的液相芯片分析仪(Luminex200)进行检测，根据标准曲线计算两组中各因子的水平。

2 结 果

2.1 两组患者性别比例和年龄的比较 两组性别比例和年龄分布情况见表1，可见两组在这些方面比较差异无统计学意义(P>0.05)

表1 两组患者性别比例和年龄比较情况

2.2 两组患者血清中趋化因子的表达情况 与对照组相比，PCV患者血清中Eotaxin表达明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，而GRO-α、IL-8、IP-10、MCP-1、RANTES的变化无统计学意义(P>0.05)，具体见表2。

表2 两组患者血清中各趋化因子的表达情况±s，pg/mL)

与对照组比较，*P<0.05

3 讨 论

目前PCV的发病机制尚不明确，不少学者认为它是CNV的一种特殊类型，而CNV常是由于缺血、缺氧及炎症等诱因引起的。近几年针对PCV的研究也提示其与炎症有关，且发现相关炎症因子有异常变化：如C反应蛋白(C-reactive protein，CRP),在PCV患者的全身和局部相对于对照组均明显升高[4]，PCV患者房水中MCP-1、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF-α)也明显增高[5]。在炎症反应中，趋化因子也扮演一个重要角色，不同的因子对于炎症细胞趋化作用不同，目前针对趋化因子在不同疾病各阶段所起的作用而作为药物靶点的研究越来越多。Eotaxin又称CCL11，属于趋化因子的CC家族，与受体CCR3结合，主要趋化嗜酸性粒细胞到变态反应炎症部位，因此Eotaxin在过敏反应类疾病中研究比较多，如支气管哮喘、过敏性结膜炎等[6]。而在针对年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)的相关研究中，有学者提出Eotaxin可作为AMD的新标志物[7]。Falk等[8]发现在AMD患者外周血中CCL11升高；近几年发现CCL11/CCR3还可参与血管的形成：有学者[9]认为CCR3阻滞后，可能通过巨噬细胞和中性粒细胞，而不是嗜酸性粒细胞和肥大细胞的趋化，直接抑制内皮细胞的迁徙扩散，从而抑制CNV的形成，而且认为CCR3阻滞后，抑制CNV形成的效果比抗新生血管的治疗更好，提出以CCL11/CCR3为目标进行早期诊断和治疗，可减轻患者的视力损害的观点；Mizutani等[10]也发现CCR3的拮抗剂能抑制激光诱导的CNV的形成：这些发现为CNV的诊治提供新思路。

本研究中发现PCV患者外周血中Eotaxin升高，由此可推测Eotaxin可能在PCV发病过程中起重要作用，具体机制有待我们进一步研究，其结果将为PCV的早期诊断标志物、药物治疗新靶点的筛选提供依据，具有潜在临床应用价值。

[1]WONG C W，WONG T Y，CHEUNG C M.Polypoidal choroidal vasculopathy in asians[J].Journal of Clinical Medicine，2015,4(5):782

[2]SAKURADA Y，NAKAMURA Y，YONEYAMA S，et al.Aqueous humor cytokine levels in patients with polypoidal choroidal vasculopathy and neovascular age-related macular degeneration[J].Ophthalmic Research，2015,53(1):2

[3]KOH A H，EXPERT PCVP，CHEN L J，et al.Polypoidal choroidal vasculopathy:evidence-based guidelines for clinical diagnosis and treatment[J].Retina，2013,33(4):686

[4]KIKUCHI M，NAKAMURA M，ISHIKAWA K，et al.Elevated C-reactive protein levels in patients with polypoidal choroidal vasculopathy and patients with neovascular age-related macular degeneration[J].Ophthalmology，2007,114(9):1722

[5]HU J，LENG X，HU Y，et al.The features of inflammation factors concentrations in aqueous Humor of polypoidal choroidal vasculopathy[J].PloS One，2016,11(1):e0147346

[6]武晓兰，唐伟，王聪慧，等.咳嗽变异性哮喘患者Eotaxin的表达及其与肺功能的关系[J].实用医学杂志，2013,29(2):199

[7]SHARMA N K，PRABHAKAR S，GUPTA A，et al.New biomarker for neovascular age-related macular degeneration:eotaxin-2.DNA and cell biology[J].DNA Cell Biol，2012,31(11):1618

[8]FALK M K，SINGH A，FABER C，et al.Blood expression levels of chemokine receptor CCR3 and chemokine CCL11 in age-related macular degeneration:a case-control study[J].BMC Ophthalmology，2014,14:22

[9]TAKEDA A，BAFFI J Z，KLEINMAN M E，et al.CCR3 is a target for age-related macular degeneration diagnosis and therapy[J].Nature，2009,460(7252):225

[10]MIZUTANI T，ASHIKARI M，TOKORO M，et al.Suppression of laser-induced choroidal neovascularization by a CCR3 antagonist[J].Investigative Ophthalmology & Visual Science，2013,54(2):1564

Expression of Chemokine in Serum of Polypoidal Choroidal Vasculopathy

ZHANG Ya-fang，WEN Feng，LI Dai，et al

(HubeiUniversityofScienceandTechnology，XianningHubei437100,China)

Objective This study was aimed to evaluate the expression of six chemokines in serum of polypoidal choroidal vasculopathy and to provide evidence for further exploring the pathogenesis of PCV. Methods The serum samples of 30 patients with PCV were collected and 35 cataract patients without fundus disease were served as control.The expressions of Eotaxin，GRO-alpha，IL-8，IP-10，MCP-1 and RANTES were measured by multiplex immunoassay，and the differences between the two groups were analyzed.Results The average concentration of Eotaxin in patients with PCV was(48.90±24.76)pg/ml，higher than that of the control group(P<0.05).The levels of other chemokines revealed no significant differences between the two groups(P>0.05).Conclusion Eotaxin was highly expressed in patients with PCV，suggesting that it may play an important role in PCV.

Polypoidal choroidal vasculopathy;Chemokine;Eotaxin;Multiplex immunoassay

爱尔眼科医院集团科研基金项(AF141D)；湖北科技学院临床医学重点(培育)学科专项(LCZX201504)

R774

A

2095-4646(2017)03-0200-03

10.16751/j.cnki.2095-4646.2017.03.0200

2017-01-06)

**通讯作者，E-mail:wenfeng208@yahoo.com.cn；lidai008@21cn.com