枇杷叶及其炮制品中总三萜的含量分析

汪世浩 闫其朋 周玉波绍兴文理学院化学化工学院， 浙江 绍兴 312000



枇杷叶及其炮制品中总三萜的含量分析

汪世浩 闫其朋 周玉波
绍兴文理学院化学化工学院， 浙江 绍兴 312000

目的：比较枇杷叶生品与不同炮制品中总三萜的含量变化。方法：采用紫外可见分光光度法，以5%香草醛-冰醋酸溶液作显色剂，高氯酸为稳定剂，建立枇杷叶中总三萜类成分的含量测定方法，分别测定了枇杷叶不同炮制品中总三萜的含量。结果：枇杷叶生品总三萜含量1.56%、清炒制品1.47%、蜜炙品2.36%、姜汁炒制品2.20%、姜汤煮制品1.60%。结论：炮制对枇杷叶中总三萜的含量有影响，其中以蜜炙枇杷叶中的含量为最高。

枇杷叶；总三萜；炮制

枇杷叶，又名巴叶，系蔷薇科枇杷属常绿小乔木植物枇杷Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl.的干燥叶[1]，其药用历史悠久，始载于《名医别录》。枇杷叶性苦、微寒，归肺、胃经，能清肺止咳、降逆止呕，主治肺热咳嗽、气逆喘急、胃热呕逆及烦热口渴[2]。枇杷叶具有多种炮制方法[3-5]，临床上多用其蜜炙品，蜜炙后润肺止咳功能增强，常用于肺燥咳嗽。其他炮制方法亦广泛应用于临床：姜炙后能和胃；清炒后,减少了滋腻之性多用于外感咳嗽及呕吐。现代药物化学研究表明,枇杷叶中含有多种化学成分[6]，三萜类成分作为其主要活性物质，具有抗炎、镇咳、降血糖、抗病毒等作用[7-8]。本文以熊果酸为对照品，利用紫外分光光度法测定了枇杷叶不同炮制品中总三萜的含量，并进行了比较，以期为深入研究枇杷叶的炮制机理提供参考。

1 材料

1.1 仪器 METTLER AL204型分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；粉粹机(FZ102 北京市永光明医疗仪器厂)；HP8453型紫外-可见分光光度计(惠普公司)。

1.2 试剂与试药 枇杷叶购自浙江震元医药连锁有限公司，产地为浙江，经鉴定为枇杷Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl.的干燥叶。生枇杷叶(枇杷叶用纯净水洗后烘干)；清炒枇杷叶(枇杷叶文火炒至微焦，有香气)；蜜炙枇杷叶[炼蜜冷开水稀释(4∶1)后，加入枇杷叶丝拌匀，闷润后，用文火炒至微黄色，不粘手。枇杷叶每100g，用炼蜜20g；姜汁炒枇杷叶(枇杷叶丝加姜汁拌匀，润透后文火炒干，枇杷叶每100g用干姜3g。)；姜汤煮枇杷叶(干姜片加水与枇杷叶同煮至水尽后炒干，枇杷叶每100g用干姜3g)。

熊果酸(购自中国食品药品检定研究院，批号：110742-201518)，香草醛(国药集团化学试剂有限公司，批号：20140923)、冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司，批号：T20150720)、高氯酸(国药集团化学试剂有限公司，批号：20150930)、乙酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司，批号：T20140517)等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取熊果酸对照品7.5mg，置于100mL容量瓶中，用无水乙醇溶解，定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.075mg/mL的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 精密称取枇杷叶生品及各炮制品粉末各1.0g，加入85%乙醇20mL，搅拌，回流提取3次，每次1h，抽滤后取滤液1mL蒸干，再用20mL蒸馏水分散，加入等体积的饱和正丁醇萃取3次，将正丁醇萃取液合并后，挥干，最后用95%乙醇溶解，定容至100mL容量瓶中。

2.3 测定波长的选择 对照品溶液和枇杷叶生品的供试液各0.8mL置水浴中加热至溶剂挥干，加5%香草醛-冰醋酸0.3 mL，高氯酸0.8mL，60℃水浴中加热10min，取出冷却后移至10mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀。在400～800nm范围进行波长扫描，以试剂空白作参比。结果表明两个样品在550nm处有最大吸收，且空白对照干扰最小，故选550nm作为样品测定的波长。

2.4 标准曲线的绘制 精密吸取熊果酸对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分别置于10mL带刻度试管中，水浴中加热挥干溶剂后，依次加入5%香草醛-冰醋酸0.3mL和高氯酸0.8mL，60℃水浴中加热10min，取出冷水冷却后移至10mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。以随行试剂作空白参比，在550nm波长处测定吸光度A。以A为纵坐标，以熊果酸浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=30.101X-0.0304(r=0.9996)，说明熊果酸在0.0015～0.0075mg/mL范围内，线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取熊果酸对照品溶液0.2mL，置10mL刻度试管中，按2.4项方法连续测定6次，RSD1.57%，表明仪器精密度良好。

2.6 显色稳定性试验 取供试品溶液0.2mL，置10mL刻度试管中，按照2.4项方法操作，测定吸光度A，每间隔10min测定1次，连续测定60min，RSD=1.79%，表明在室温下供试品溶液显色后60min内稳定。

2.7 重复性实验 精密称取枇杷叶生品粉末6份，按2.2项操作制备供试品溶液，取0.2mL置10mL刻度试管中，按照2.4项方法测定，RSD=2.38%，表明重复性良好。

2.8 加样回收率试验 称取已知含量的枇杷叶生品粉末0.5g 6份，精密称定，分别加入熊果酸对照品8mg，按照2.2项操作方法制备供试品溶液，取0.2mL置10mL刻度试管中，按照2.4项方法测定，计算熊果酸平均回收率为95.79%，RSD为1.04%。结果见表1。

表1 枇杷叶总三萜加样回收率试验结果

2.9 样品含量测定 精密移取枇杷叶及其炮制品供试品溶液各0.2mL，置10mL刻度试管中，按照2.4项操作方法测定，由2.4项中的回归方程求出供试品中总三萜的浓度。结果见表2。

表2 枇杷叶不同炮制品中总三萜的含量测定结果 (n=3)

3 讨论

三萜类化合物在中药材中广泛分布，并具有多种生物活性，有很高的药用价值。文献报道枇杷叶中富含三萜类化合物[7-10]，是枇杷叶中与其镇咳、抗炎功能相吻合的有效成分。实验表明，不同炮制品中总三萜的含量有较大差异，按以下次序依次降低：蜜炙品>姜汁炒制品>姜汤煮制品>生品>清炒制品。除清炒制品以外，枇杷叶经过炮制后总三萜的含量均有所增高，其中蜜炙品中的含量为最高，是临床常用蜜炙品以增强润肺止咳功能的原因之一。

本研究比较了枇杷叶不同炮制品中总三萜的含量变化，其研究结果可为枇杷叶的炮制研究及临床合理应用提供参考。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2015：204

[2]陈剑，李维林，吴菊兰，等．枇杷叶的化学成分[J]．植物资源与环境学报，2006，15(4)：67-68．

[3]叶广亿，李书渊，陈艳芬，等．枇杷叶不同提取物的止咳化痰平喘作用比较研究[J]．中药药理与临床，2013，29(2)：100-102．

[4]张炳鑫．中药炮制品古今演变评述[M]．北京：人民卫生出版社，1991：322-324．

[5]上海市卫生局．上海市中药炮制规范[M]．上海：上海科学普及出版社，1994：263．

[6]郭宇，吴松吉，朴惠善．枇杷叶的化学成分及药理活性研究进展[J]．时珍国医国药，2006，17(6)：928-930．

[7]何英姿．枇杷叶有效成分提取及药理作用研究进展[J]．广西工学院学报，2007，18(2)：81-84．

[8]鞠建华，周亮，林耕，等．枇杷叶中三萜酸类成分及其抗炎、镇咳活性研究[J]．中国药学杂志，2003，38(10)：752-757．

[9]陈欢，陈光，任红梅，等．枇杷叶中三萜类成分的研究[J]．北京化工大学学报(自然科学版)，2012，39(3)：40-45

[10]杨庆新，黄建安，刘仲华，等．枇杷叶中三萜酸的研究进展[J]．食品工业科技，2008(3)：282-285

[11]吕寒，陈剑，李维林，等．枇杷叶中三萜类化学成分的研究[J]．中药材，2008，31(9)：1351-1354．

Content Determination of Total Triterpenoids in Follum Eriobotryae Processed Products

WANG Shihao YAN Qipeng ZHOU Yubo

College of Chemistry and Chemical Engineering, Shaoxing University of Arts and Sciences,Shaoxing 312000, China

Objective To study and compare the content of total triterpenoids in follum eriobotryae from different processing methods. Methods The content of total triterpenoids was determined by UV-visible spectrophotometry with the color agent of 5% vanillin glacial acetic acid solution and stabilizing agent of perchloric acid. Results The content of total triterpenoids in follum eriobotryae by different processing methods was as follows: crud folium eriobotryae 1.56%, plain-frying folium eriobotryae 1.47%, stir-heating folium eriobotryae with honey 2.36%, stir-heating folium eriobotryae with Ginger juice 2.20%, stir-heating folium eriobotryae after boiled with Ginger 1.60%. Conclusion The content of total triterpenoids in follum eriobotryae varied with the processing method. In stir-heating folium eriobotryae with honey the amount of total flavonoids was the highest.

Follum Eriobotryae;Total Triterpenoid; Processing

浙江省教育厅科研项目(Y201122331)，绍兴文理学院校级学生科研项目。

汪世浩(1996-)，男，本科在读，研究方向为药学。E-mail：wszyb9132000@126.com

R284.1

A

1007-8517(2017)12-0022-03

2017-04-13 编辑：穆丽华)