2013-2014年佳木斯市手足口病实验室检测结果分析

刘 莉，张维娜，马永娟，宁楠楠，周 迪，刘 丹

（佳木斯市疾病预防控制中心，黑龙江 佳木斯 154007）

手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）是由一组肠道病毒引起的常见传染病，引起手足口病的病毒属于小RNA病毒科，其中柯萨奇病毒A16型和肠道病毒EV71型最常见。临床表现以发热和手、足、口腔等部位的皮疹为主要临床特征的一种急性传染病。手足口病全年均可发病，有明显的季节特点，以夏秋季多见，病毒在4℃可存活1年，在-20℃可长期保存，在外环境中病毒可长期存活[1]。现将2013-2014年佳木斯市手足口病实验室检测结果分析如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取佳木斯市市区及周边外市县的疑似手足口病的患者，用于病毒分离的标本包括粪便、咽拭子、疱疹液或脑脊液标本，样本在运输过程中要避免反复冻融，采集样本后应该在0～4℃条件下保存，运送到实验室后如果不能立即检测，则应存放到-20℃或-70℃冰箱保存样本，样本编号、发病日期和采集日期要标记好并作好原始记录。

1.2 方法

手足口病的实验室诊断一般是通过采集适当的临床标本后进行病毒分离和病毒鉴定，用于肠道病毒分离的细胞系为RD细胞（对CA16和EV71敏感），CPE阳性的标本在进行荧光定量PCR检测进行型别鉴定。

1.3 病毒分离培养

运送到实验室的样本，10 000 rpm离心30min，充分混匀后，每份标本接种RD细胞前，均用滤器过滤除菌。每份标本同时接种两瓶细胞，接种后放在33～35℃二氧化碳培养箱培养。每天观察CPE的变化，每份标本盲传两代，盲传2代后，仍然没有出现CPE的，则判定为阴性，CPE阳性标本放置-20℃的冰箱保存备用。

1.4 统计学方法

采用Excel 2003和SPSS19.0软件进行统计分析。计数资料组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2013-2014年佳木斯市共采集疑似手足口病例133份，荧光定量PCR检测阳性68份，RD细胞培养法分离阳性毒株24份。病毒分离阳性率为18.05%。其中EV71毒株9株，CA16毒株13株，其他HEV毒株2株。

2.1 年龄分布

2013-2014年，佳木斯市手足口病病毒分离阳性率各年龄组间差异无统计学意义（χ2=7.026，P＞0.05）。见表1。

表1 2013-2014年佳木斯市手足口病年龄分布

2.2 不同年份毒株分型情况

2013年手足口病病毒分离毒株分型以CA16为主，2014年毒株分型以EV71为主，两年病毒分离阳性率无显著差异（χ2=0.032，P ＞ 0.05)。见表2。

表2 2013-2014年佳木斯市手足口病病毒分离情况

2.3 性别分布

2013年手足口病PCR检测和病毒分离检测男性阳性人数高于女性阳性人数，2014年女性阳性人数高于男性阳性人数。见表3。

表3 2013-2014年佳木斯市手足口病性别分布情况 例

2.4 各地区分布情况

2013年手足口病病毒分离中，佳木斯市传染病医院10人，富锦CDC2人。2014年手足口病病毒分离中，富锦CDC4人，向阳区CDC3人，抚远CDC1人，郊区CDC2人，东风区CDC2人。

2.5 手足口病病毒感染RD细胞情况

图1为生长24h健康的单层RD细胞，形态呈梭型和大的多核细胞，贴壁生长。图2为感染病毒72h的RD细胞，图2中CPE变化明显，细胞圆缩聚集，折光度增强，胞浆颗粒化，核圆缩、最后细胞皱缩破裂，由局部变化到出现80%CPE时进行收毒。CA16和EV71在RD细胞中的生长速度不同，EV71的生长速度要快于CA16，表现为EV71感染RD细胞后出现CPE的时间比CA16早。

图1 未染毒的RD细胞

图2 感染EV71病毒的RD细胞

3 讨论

手足口病是婴幼儿中流行的急性肠道病毒 (Enterovirus,EV)感染，主要病因为柯萨奇病毒 (Coxsackievirus)A组16型 (Cox.A16)[2]或EV71型[3]。我国于1981年上海首次报道本病，此后，北京、河北、天津、福建、吉林、山东、湖北、青海和广东等十几个省份均有本病报道[4]。

佳木斯市手足口病发病呈现波浪式趋势。一般表现为每隔1～2年出现一次高发或连续两年存在高发的情况，2013年发病率为7.37/10万[4]。从这两年的病毒分离结果来看，每年的手足口病病毒毒株的型别不同，2013年手足口病病毒分离毒株分型以CA16为主，2014年毒株分型以EV71为主。从患者的年龄上看，各年龄组之间差异无统计学意义 (P＞0.05)，从两年的病毒分离阳性率差异无统计学意义 (P＞0.05)，可以推测佳木斯市这两年手足口病疫情比较稳定。佳木斯市各地区均有手足口病的发病病例，并且没有明显的地域性差别，这与此前报道一致[4]。RD细胞支持HFMD的主要病原体——CA16和EV71的复制，CA16和EV71均能在RD细胞培养中引起特殊的肠道病毒致细胞病变效应（CPE），表现为细胞圆缩、分散、胞浆内颗粒增加，最后细胞自管壁脱落[1]。从本次的试验分析中可以看出，佳木斯市手足口病的防控工作还是应该以预防为主，因为手足口病传播途径多，婴幼儿和儿童普遍易感，所以做好儿童个人、家庭和托幼机构的卫生是预防本病感染的关键。

[1]中华人民共和国卫生部.手足口病实验室检测方案 (试行).手足口病预防控制指南（2008年）[S].

[2]于长水，肖明华，张之伦，等.天津市由COX.A16肠道病毒引起的手足口病[J].中华流行病学杂志，1985,6（2）:66-69.

[3]何雅青，杨帆，李良成，等.我国深圳地区手足口病患者肠道病毒71型的分离与鉴定[J].中华实验和临床病毒学杂志，1999，13（1）:83-84.

[4]赵继民，路子春.2008-2013年佳木斯地区手足口病发病调查[J].黑龙江科学，2015（6）:136-137.