地骨皮游离蒽醌对高脂大鼠模型降脂作用的实验研究

王卫杰，郭闪闪，何栋，李惠，王乐，徐丹

(1.开封市医学科学研究所,河南 开封 475000；2.开封市中医院，河南 开封 475000)

地骨皮游离蒽醌对高脂大鼠模型降脂作用的实验研究

王卫杰1，郭闪闪2，何栋1，李惠1，王乐1，徐丹1

(1.开封市医学科学研究所,河南 开封 475000；2.开封市中医院，河南 开封 475000)

目的：对单方中药地骨皮中蒽醌成分对高脂血症大鼠体内脂代谢的调节作用进行研究。方法：采用SD大鼠作为实验动物，通过以高脂饲料诱导的高脂血症大鼠作为动物模型。使用地骨皮游离蒽醌对高脂模型大鼠进行干预实验。结果：高脂饲料诱导高脂血症大鼠后，实验组模型组大鼠的总胆固醇、总甘油三酯、低密度脂蛋白的含量明显降低，提示地骨皮蒽醌类成分具有良好的降脂作用。结论：和模型组比较，地骨皮游离蒽醌能显著降低高脂大鼠的总胆固醇、总甘油三酯和低密度脂蛋白。

地骨皮；游离蒽醌；高脂大鼠模型；血脂

高脂血症(HLP)是代谢性疾病中一种常见而多发的重要病症，临床常用的西药降血脂药如辛伐他汀、普伐他汀，降脂作用疗效肯定，但副作用大[1]。近年来有大量研究表明，中药可从不同环节干预高脂血症，效果明显，所以，中药复方制剂和中药单味药及其提取物的降脂作用研究将越来越得到重视[2]；而地骨皮单味药及其提取物的降脂作用鲜有人研究。本实验以高脂饲料诱导的高脂血症大鼠作为动物模型，研究单方中药地骨皮中蒽醌成分对高脂血症大鼠体内脂代谢的调节作用，阐明地骨皮调节血脂的有效成分及其机理，为临床应用提供依据。

1 材料

1.1 实验动物

雄性SD大鼠购于河南省实验动物中心:SD雄性大鼠60只，体质量为(185.05±4.48)g。动物到达后单只单笼饲养，喂食基础饲料(实验动物全价营养饲料，购于河南省实验动物中心)，自由饮水，实验室温度22～24℃，空气相对湿度50%～65%，室内照明12 h明暗交替。

1.2 饲料添加剂

胆盐20130911；胆固醇20130825；蛋黄粉20130905；(北京华迈科生物技术有限责任公司),全脂奶粉(伊利)；猪油市售。

1.3 主要仪器及试剂

紫外分光光度计(UV-2550日本岛津)；超声清洗仪(KQ-100昆山)；索氏提取器(SXT-02上海洪纪)；低密度脂蛋白测定试剂盒，2014080025；总甘油三酯测定试剂盒，2014060007，(南京建成生物工程研究所)；辛伐他汀，20140718(海南海灵化学制药有限公司)；胆汁酸检测试剂盒，20140526(威特曼生物科技有限公司)；地骨皮内的蒽醌类成分(实验室提取，参照何栋[3]等的反高效液相色谱法测定地骨皮中大黄素、大黄素甲醚实验研究)。

1.4 饲料制备

1.4.1 普通饲料

实验动物全价营养饲料(河南省实验动物中心)。

1.4.2 高脂饲料制备

以实验动物全价营养饲料为基础饲料饲料，配成含基础饲料78.9%，胆固醇1%，胆盐0.1%，蛋黄粉5%，全脂奶粉5%，猪油10%的高脂饲料。

1.5 实验分组及方法

1.5.1 高脂大鼠模型构建

雄性SD大鼠适应性喂养1周后。随机分为正常对照组(10只，喂饲普通饲料)和模型组(50只，喂饲高脂饲料)。每两周断尾采血1次，分离血清并检测TC，TG，LDL-C水平(按试剂盒说明书检测)。4周后按照林征[4]等人造模标准取模型组TC>2.12 mmol/L、TG>2.43 mmol/L、LDL-C>0.82 mmol/L的大鼠作为成功高脂模型纳入试验。正常对照组大鼠血脂水平均未达到该水平。

1.5.2 分组及药品干预

将造模成功大鼠40只随机分为辛伐他汀组、地骨皮蒽醌低、高剂量组，每组10只。正常对照组和阴性对照组灌喂相应体积蒸馏水；辛伐他汀组(SIM)给药剂量为4 mg/(kg·d)；地骨皮蒽醌低、高剂量组给药剂量分别为40 mg/(kg·d)、20 mg/(kg·d),用生理盐水2 mL溶解，各组每日灌胃1次。

等效剂量计算：根据徐叔云教授《药理实验方法学》，人与大鼠等效剂量系数为6.3。辛伐他汀人体最大用量40 mg/d,则大鼠用量=40÷60×6.3=4 mg/(kg·d),地骨皮人体最大用量为30 g，总蒽醌含量约为1%，则大鼠总蒽醌用量=30÷60×1%×6.3=30 mg/(kg·d)。

1.5.3 胆汁酸检测

大鼠单笼单只养殖，在0、1、2月，各收集4天粪便标本，干燥、粉碎，以乙醇-KOH抽提予酶法测定胆汁酸及胆固醇浓度，观察地骨皮蒽醌对高脂血地鼠粪便胆汁酸排泄的影响。

2 结果

2.1 大鼠体质量的变化

本实验中，实验前各组大鼠体质量之间无显著差异(P>0.05)；实验中期(建模成功)，模型组大鼠体质量组间无显著性差异，与对照组相比均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；实验末(药物干预后)。各剂量组与模型组比均有差异(P<0.05)，蒽醌高剂量组与模型组具显著性差异(P<0.01)。结果见表1。

表1 实验各组大鼠体质量变化结果

注：与正常对照组比较，△P<0.05；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

2.2 大鼠总胆固醇的变化

本实验中，实验前各组大鼠TC之间无显著差异(P>0.05)；实验中期(建模成功)，模型组大鼠TC组间无显著性差异，与对照组相比均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；实验末(药物干预后)。蒽醌高、低剂量组、辛伐他汀组与模型组比均有显著性差异(P<0.01)。结果见表2。

表2 实验各组大鼠TC变化结果

注：与正常对照组比较，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05

2.3 大鼠甘油三酯的变化

本实验中，实验前各组大鼠TG之间无显著差异(P>0.05)；实验中期(建模成功)，模型组大鼠TG组间无显著性差异，与对照组相比均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；实验末(药物干预后)。蒽醌高剂量组、辛伐他汀组与模型组比均有显著性差异(P<0.01)，蒽醌低剂量组与模型组无显著性差异(P>0.05)。结果见表3。

表3 实验各组大鼠TG变化结果

注：与正常对照组比较，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05

2.4 大鼠低密度脂蛋白的变化

本实验中，实验前各组大鼠LDL-C之间无显著差异(P>0.05)；实验中期(建模成功)，模型组大鼠TG组间无显著性差异，与对照组相比均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；实验末(药物干预后)蒽醌高、低剂量组、辛伐他汀组与模型组比均有显著性差异(P<0.01),结果见表4。

表4 实验各组大鼠LDL-C变化结果

注：与空白对照组比较，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05

2.5 大鼠粪便胆汁酸的变化

本实验中，实验前大鼠粪便胆汁酸各组之间无显著差异(P>0.05)；实验中期(建模成功)，模型组大鼠组间无显著性差异，与对照组相比均明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)；实验末(药物干预后)。蒽醌高、低剂量组与模型组有显著性差异(P<0.01)，辛伐他汀组与模型组比无显著性差异(P>0.05)。结果见表5。

表5 实验各组大鼠粪便胆汁酸变化结果

注：与正常对照组比较，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05

3 讨论

高脂血症是动脉粥样硬化的促发因素，对高脂血症的治疗是防治缺血性心脏病及脑梗死的关键；在治疗药物的选择上，天然药物与化学药物相比在长期应用的顺应性方面具有一定优势，而且从天然药物中寻找新的活性成分是创新药物的有效途径。

在本随机对照实验中，50只SD大鼠以林征等人提出短期高脂饲料配方喂养1个月，第1个月末检测大鼠血脂四项指标，发现SD大鼠总胆固醇、总甘油三酯、低密度脂蛋白浓度逐渐升高，说明高脂模型建立成功，与林征[4]等人的研究结果相符。

第2个月，模型组总胆固醇、总甘油三酯、低密度脂蛋白浓度持续升高。与模型组比较，辛伐他汀降低TC37.2%，地骨皮高剂量组降低21.7%，约为辛伐他汀的56%；辛伐他汀降低TG25.3%，地骨皮高剂量组降低15.3%，约为辛伐他汀的60.8%；辛伐他汀降低LDL-C56.2%，地骨皮高剂量组降低33.5%，约为辛伐他汀的59.8%；蒽醌、低剂量组TC、TG、LDL-C在第2个月末也均有下降。这可能与中药及中药有效成分对人体的双向调节有关。

高脂饮食可增加粪便中胆汁酸含量，本实验中，对照组大鼠粪便中胆汁酸的排量一直无明显变化。模型组大鼠在高脂饲养以后，粪便中胆汁酸呈上升趋势。与0月时比较，地骨皮蒽醌高低剂量组2月时粪便胆汁酸含量分别增加2.5倍和2.38倍，显著高于高脂模型，其降脂机制可能与胆汁酸的外排有关。

正常人体肝脏内胆汁酸池不过3～5 g，而维持脂类物质消化吸收，需要肝脏每天合成16～32 g，依靠胆汁酸的肠肝循环可弥补胆汁酸的合成不足。每次饭后可以进行2～4次肠肝循环，使有限的胆汁酸池能够发挥最大限度的乳化作用，以维持脂类食物消化吸收的正常进行[5-10]。而地骨皮总蒽醌通过增加胆汁酸的外排，影响胆汁酸的肝肠循环，影响脂类物质的消化和吸收，从而达到降脂的作用。唐大轩[11]等人研究发现，大黄蒽醌可以增加小鼠胃内容物以及小肠和结肠内容物；并可通过刺激胃肠道粘膜而增加蛋白质的分泌。魏风铃[12]等人研究发现，大黄总蒽醌有促进肠蠕动和致泻作用。推测地骨皮总蒽醌增加胆汁酸外排的机理可能与以上两点有关。

[1] 张秀云,周凤琴.地骨皮药理及临床应用研究进展[J].广州化工,2012(7):48-49,59.

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Experimental Study on Hypolipidemic Effects in Hyperlipidemia Rats by Free Anthraquinone inCortexLyciiRadicis

WANG Wei-jie1, GUO Shan-shan2, HE Dong1, LI Hui1, WANG Le1, XU Dan1

(1.KaifengInstituteofMedicalSciences,Kaifeng475000,China;2.CityHospitalofKaifeng,Kaifeng475000,China)

Objective: To research the regulation effect of lipid metabolism in hyperlipidemia rats by using free anthraquinone inCortexLyciiRadicis(Di Gu Pi). Methods: SD rats were induced to the hyperlipidemia models with high fat diet. Free anthraquinone fromCortexLyciiRadiciswas used to intervene. Results: The levels of total cholesterol(TC), triglyceride(TG), and low density lipoprotein(LDL) hyperlipidemic rats induced by high fat diet, decreased significantly compared to experimental model group, suggesting Digupi Anthra quinones have good lipid-lowering effect. Conclusions：Anthraquinone in Cortex Lycii Radicis has a significant lipid-lowering effect.

CortexLyciiRadicis(Di Gu Pi); Free anthraquinone; Hyperlipidemia Rats; Blood fat

2016-06-06

2016-10-30

河南省科技攻关项目(122102310008)

王卫杰(1987-)，女，硕士研究生，实习研究员，研究方向:生物医学研究。

R285.5

A

1002-2392(2017)03-0017-03