HPLC法同时测定阿托伐他汀钙、非洛地平和硫酸氢氯吡格雷制剂的含量

刘秋月 李 珂 齐永秀

(泰山医学院药学院，山东 泰安 271016)

HPLC法同时测定阿托伐他汀钙、非洛地平和硫酸氢氯吡格雷制剂的含量

刘秋月 李 珂 齐永秀

(泰山医学院药学院，山东 泰安 271016)

目的 建立同时测定阿托伐他汀钙、非洛地平与硫酸氢氯吡格雷制剂含量的方法。 方法 采用高效液相色谱法:色谱柱:HypersilODS2-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相:甲醇-乙酸铵醋酸缓冲溶液(pH=4.0)(75:25)，流速:1.0 ml/min，检测波长：254 nm，进样量：20 μl，柱温：30 ℃，内标物:甲睾酮。 结果 阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷在5.0～40.0 μg/ml(r分别为0.9997、0.9999、0.9999)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为101.52%(RSD=2.85%，n=9)、98.21%(RSD=2.94%，n=9)、96.45 %(RSD=2.64%，n=9)；标示量百分含量分别为107.7%、98.15%、108.2%。结论 该方法简便、准确、快速、重复性好，可用于同时测定阿托伐他汀钙与非洛地平、硫酸氢氯吡格雷制剂的含量。

阿托伐他汀钙；非洛地平；硫酸氢氯吡格雷；高效液相色谱法；含量测定

阿托伐他汀钙为HMG-CoA还原酶抑制剂，以钙盐形式存在。研究表明阿托伐他汀钙可减少房性心律失常的发作，具有很强的抗炎作用， 为临床常用调血脂药物[1-2]。非洛地平是对血管有极高选择性作用的双氢吡啶类钙拮抗剂，对原发性高血压、心绞痛都有一定的治疗作用[3-4]。硫酸氢氯吡格雷除抗血栓作用以外，可能还有抗炎、抗动脉粥样硬化、内皮保护和抗血管生成等方面的作用[5-7]。HPLC法虽专一性强、灵敏度高，但采用外标法易产生操作误差。因此本次研究选用甲睾酮为内标，建立了HPLC[8-10]同时测定阿托伐他汀钙、非洛地平与硫酸氢氯吡格雷制剂含量的方法。

1 实验材料

岛津LC-10AT高效液相色谱仪；KQ-500E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；TGL-16C台式离心机﹙上海安亭科学仪器厂﹚。

阿托伐他汀钙对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100590-201303，按三水合物计含量为95.0%)；非洛地平对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100717-201002 ，含量：99.9%)；硫酸氢氯吡格雷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：100819-201102 ，含量：99.5%)；内标：甲睾酮对照品(中国药品生物制品检定所)；阿托伐他汀钙片剂(批号:100904，北京嘉林药业股份有限公司)；非洛地平片剂(批号：20120101，江苏联环药业股份有限公司)；硫酸氢氯吡格雷片(批号：20120712，规格：25 mg 深圳信立泰药业股份有限公司)；甲醇为色谱纯，乙酸铵、冰醋酸均为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱Hypersil ODS2 C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)﹙依利特公司﹚；流动相甲醇-乙酸铵醋酸缓冲液pH4﹙75:25﹚；流速1.0 ml/min；检测波长254 nm。混合对照品溶液中阿托伐他汀与其他两种组分能达到基线分离，制剂辅料不干扰测定，各峰与相邻组分的分离度大于1.5，理论塔板数按阿托伐他汀的峰计算为2000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷的对照品各5mg置25ml棕色容量瓶中，加流动相溶解混匀，定容至刻度，摇匀，即得200 μg/ml的对照品贮备液。

2.2.2 内标溶液的制备 取甲睾酮对照品5 mg，精密称定，用流动相溶解并定容至25 ml量瓶中，摇匀，配成质量浓度为200 μg/ml的内标溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取阿托伐他汀钙片、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷各20片，研磨至粉末，分别精密称取细粉适量(约相当于主成分5 mg)，置于棕色容量瓶中，用流动相溶解，超声处理10 min ,稀释定容至刻度。过滤，吸取上清液，离心﹙6000 r/min﹚，进样。

2.2.4 混合对照品溶液的制备 分别精密吸取阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷的对照品储备液0.25 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml置于10 ml棕色容量瓶中，再分别加入1 ml甲睾酮﹙内标物﹚溶液，加入流动相稀释，混匀，超声10 min，定容至刻度，混匀，即得浓度为5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、30 μg/ml、40 μg/ml的系列混合对照品溶液。

2.2.5 空白溶液的制备 取处方量的空白辅料，按“2.2.3”项下方法制备成空白溶液，即得。

2.3 专属性试验

取混合对照品溶液(20.0 μg/ml)、供试品溶液、空白溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样，记录色谱，详见图1。由图1可见，空白溶液色谱在对照品色谱相应位置处无吸收峰，表明在该试验条件下，制剂辅料对测定结果均无干扰，专属性较好。

A B C

图1 高效液相色谱图

A.空白溶液；B.混合对照品溶液；C.供试品溶液(1.阿托伐他汀钙；2.非洛地平；3.硫酸氢氯吡格雷；4. 甲睾酮)

2.4 线性关系的考察

取“2.2.4”项下的系列混合对照品溶液，依次按“2.1”项下色谱条件进样，每次20 μl，测定峰面积，以各组分峰面积与内标峰面积比值﹙Ai/As﹚对浓度C作标准曲线,进行线性回归，得回归方程阿托伐他汀钙y=0.0328x+0.0892(r=0.9997)， 非洛地平y=0.0392x+0.0166 (r=0.9999)，硫酸氢氯吡格雷y=0.0131x-0.0036 (r=0.9999)，表明阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷在5～40 μg/ml范围内线性关系良好。

2.5 精密度实验

分别精密吸取20g/ml阿托伐他汀、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷的对照品溶液，加入1.0 ml的内标溶液，分别在1 d内重复测定6次和5 d内重复测定3次，以测得的阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷与内标峰面积比计算测定方法的精密度。结果阿托伐他汀日内RSD=0.86%(n=6)、日间RSD=5.4%(n=5)；非洛地平日内RSD=0.83 %(n=6)、日间RSD=2.6%(n=5)；硫酸氢氯吡格雷日内RSD=1.12 %(n=6)、日间RSD=2.5%(n=5)。表明本法有较好的精密度。

2.6 加样回收率试验

分别精密量取2.2.3项下的阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷的供试品溶液0.5 ml，共27份，分别置于10 ml容量瓶中，各加入甲睾酮1 ml。每份分别准确加入低、中、高浓度的阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷对照品贮备液，每一浓度各3份。每瓶分别取样，进样20 μl,重复进样3次。计算加样回收率及RSD。阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷平均加样回收率分别为101.52 %、98.21%、96.45%，RSD分别为2.85%(n=9)、2.94 %(n=9)、2.64%(n=9)，表明本方法准确度良好。见表1。

表1加样回收率试验结果(n=9)

2.7 样品含量测定

分别量取“2.2.3”项下的各供试品溶液0.5 ml、甲睾酮标准溶液0.5 ml,置于10 ml棕色容量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，超声处理10 min,每次进样20 μl，重复进样3次，记录色谱图，阿托伐他汀钙、非洛地平、硫酸氢氯吡格雷的标示量百分含量分别为107.7%、98.15%、108.2%。

3 讨 论

本试验研究过程中，选择考察了几种流动相：选择甲醇—水时，峰拖尾严重；选择甲醇—0.5%磷酸时，峰分离度不好；选择甲醇—乙酸铵醋酸缓冲液时，峰分离度较好，能达到基线分离，柱效较高，又考虑到磷酸易产生沉淀反应，最后确定用甲醇—乙酸铵醋酸缓冲液作流动相。由于阿托伐他汀、非洛地平、甲睾酮、硫酸氢氯吡格雷对光和热不稳定，在操作过程中应选用棕色容量瓶，保存时应该在低温避光条件下保存，并应控制超声时水浴温度在30 ℃以下。同时要求超声时间不宜过长，因为超声时间过长，由超声震荡会造成水浴温度升高。流动相的pH值对四种组分的保留值和峰形有影响，酸性越强，其峰形越尖锐。但是，为了保护色谱柱，流动相的pH值应接近4。

本研究建立的HPLC法适用于测定片剂中阿托伐他汀钙、非洛地平和硫酸氢氯吡格雷制剂的含量。

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Simultaneous determination of atorvastatin, felodipine and clopidogrel hydrogen sulfate by HPLC

LIU Qiu-yue LI Ke QI Yong-xiu

(Dept. of Pharmacy，Taishan Medical University，Taian 271016，China)

Objective:To establish a method for simultaneous determination of atorvastatin, felodipine, and clopidogrel hydrogen sulfate. Methods:HPLC method was used as follow: chromatographic column: HypersilODS2-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm),mobile phase: methanol-ammonium acetate (pH=4.0) (75:25) , the flow rate :1.0 ml/min, detection wavelength : 254 nm, column temperature:30 ℃, the internal standard :Methyltestosterone. Results: The linear ranges for atorvastatin, felodipine and clopidogrel hydrogen sulfate was 5.0～40.0 μg/ml(r=0.9997，0.9999，0.9999); the average recoveries were 101.52%(RSD=2.85%，n=9)、98.21 %(RSD=2.94%，n=9)、96.45%(RSD=2.64%，n=9)；the content of the marker was 107.7%, 98.15%, 108.2% respectively. Conclusion: The method is simple, accurate, rapid and has good repeatability, and can be used for the simultaneous determination of atorvastatin, felodipine, and clopidogrel hydrogen sulfate.

atorvastatin; felodipine; clopidogrel hydrogen sulfate; HPLC; content determination

刘秋月(1991—)，女，在读研究生。

齐永秀(1968—)，女，教授，硕士生导师，研究方向：体内药物分析。E-mail：yxqi@tsmc.edu.cn。

R927.2

A

1004-7115(2017)06-0626-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.06.009

2017-03-18)