更优生物创新药——长效重组人血清白蛋白融合蛋白

于在林，富岩

更优生物创新药
——长效重组人血清白蛋白融合蛋白

于在林，富岩

更优生物药是指治疗用生物制品蛋白质药物，其可通过生物药经化学分子修饰、或蛋白质与小分子药物化合价偶联，形成新的物理结构或改善构象，或通过生物药物与蛋白质、生物药物之间的基因融合以达到延长生物药物在体内半衰期、或达到生物药物可定向作用于药靶为目的所研制的创新生物药。白蛋白与生物药形成的融合蛋白，抗体、抗体片段（Fc）与生物药形成的融合蛋白的研制都属于更优生物药研发领域。生物药基因融合形成二聚体融合蛋白，白蛋白-紫杉醇偶联以及聚乙二醇修饰的生物药则也可归类于更优生物药，但它们不属于药物分子结构的创新，而是属于化学修饰类药物创新。

最为有发展前景之一的应该是白蛋白作为药物输送载体平台技术。主要可分为：由基因工程表达或血源的白蛋白与小分子化学药物偶合形成药物、与低分子量多肽或大分子蛋白质药物化学偶联形成药物、与小分子化合物、具生物活性蛋白质共同封装成纳米颗粒药物，以及更进一步，低分子量多肽和大分子蛋白质功能基因与白蛋白基因融合，形成重组白蛋白融合蛋白更优生物创新药（图 1）[1-3]。为此，本文仅就该白蛋白融合蛋白领域的进展进行简要综述（其他类别的更优生物创新药，例如 Fc 融合蛋白、化学修饰生物类似药则不在本文赘述）。

1 白蛋白融合蛋白作为更优生物创新药发展的轨迹

人血清白蛋白在人体血液中为最大单一组分蛋白质，血液中的含量约为 50 g/L，占血浆总蛋白的 40% ～ 60%，半衰期长达 20 d。白蛋白以其稳定的惰性在人体血液中起着不可替代的血容量平衡、输送维持生命物质在血液中运转的载体功能外，近年来又在临床治疗药物研发中扮演着越来越重要的角色。

依据白蛋白可在固体肿瘤中形成积累的基本原理，形成以白蛋白作为基础的肿瘤靶向系统药物递送载体。临床上，甲氨蝶呤-白蛋白共价结合药物，白蛋白与多柔比星前体药物，即阿霉素衍生物的偶联药物，以及白蛋白-紫杉醇纳米颗粒已完成了临床评价，被批准用于治疗转移性乳腺癌，年销售额可达 10 亿美元以上[3]；将一种治疗性多肽或蛋白质与白蛋白偶联或以物理性吸附与白蛋白结合，可提高治疗性多肽和蛋白质的稳定性和大大延长药物的半衰期；利用白蛋白作为注射用难溶性化学药物的载体也获得重视和研究[4]，已被应用于镇痛、降血糖、抗肿瘤、抗病毒活性药物的研发。诺和诺德公司的胰岛素十四酸衍生物偶联到白蛋白多肽上的脂肪酸结合位点，形成的新药 Levemir 已被批准用于糖尿病的治疗，并且成为治疗小儿糖尿病的特效药物。

鉴于白蛋白是所有血液蛋白质中半衰期最长，具有非糖基化、稳定性高的蛋白质特征，开展与低分子量多肽和大分子蛋白质基因融合，使得白蛋白作为崭新的药物长效化载体给药系统的研究就非常具有理论上的可行性和实际的药物经济学价值。白蛋白融合蛋白由欧洲科学家率先报道，白蛋白-CD4 蛋白质基因融合后在酵母菌中表达，用于 HIV 的抑制和治疗[5]。2008 年石屹峰和边蕾[6]，2015 年 Rogers等[7]分别以人血清白蛋白为载体的长效蛋白质药物研究进展为题做出过综述。本文就重组人血清白蛋白融合蛋白的研究内容、研究方向、发展历程、融合蛋白成药性等做出进一步的论述。

2000 年底美国人类基因组科学公司（HGS）以 1.2 亿美元通过并购 Principa 公司获得了长效化白蛋白融合蛋白药物开发的权利。HGS 此后陆续提交了数十个相关的专利申请[8]。由此，长效化研发进入实际的创新药物研究新阶段。1994 年，作者在美国费城天普大学和汤姆斯杰弗逊大学医学院主持蛋白质表达实验室工作时独立启动了白蛋白融合蛋白用于表达人类基因产物的研究，随后获得美国汤姆斯杰弗逊大学专利技术实施授权书，独立持有白蛋白融合蛋白相关发明和提交专利申请权和专利实施权利的所有权，并创办美国福源集团，作为发明人独立开展“no-linker 白蛋白融合蛋白药物长效化技术平台”建设并形成完整的系列发明专利申请[9-19]，启动了一系列白蛋白融合蛋白长效化创新药的原创原研工作。

HGS 在 2004 年将具有长效作用的重组人血清白蛋白与 2 个串联的修饰了第 8 位氨基酸的 GLP-1（glucagon like peptide-1，Ala8Gly）类似肽形成的胰高糖素类肽-12-白蛋白融合蛋白（阿必鲁肽）药物权利以 4.5 亿美元许可给GSK 制药集团。2013 年 1 月，阿必鲁肽完成了 2 型糖尿病患者为受试者的 III 期临床试验研究，并于 2014 年3 月和 4 月分别获得欧洲和美国 FDA 的市场销售许可，成为世界上第一个获得上市销售许可的白蛋白融合蛋白创新药。其冻干粉针剂，独特的一次性包装又赋予该新药以创新制剂剂型，适于需要终身用药的 2 型糖尿病患者自我注射给药。每周 1 针的长效性，较市场上的畅销药利拉鲁肽每天 1 针具有更为显著的优势，成为真正的更优生物创新药的代表。

HGS 公司自接手 Principa 公司的白蛋白融合蛋白技术后继续支持和开展白蛋白-干扰素 α2b 融合蛋白在丙型肝炎患者的临床试验研究。2006 年 6 月完成具长效性重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白（rHSA/IFNα2b）的慢性病毒性丙型肝炎适应证 II 期临床试验研究并以 5.07 亿美元许可给诺华制药集团。诺华在开展 rHSA/IFNα2b 的III 期临床试验期间将启动方案的给药剂量由 1200 μg 降低为 900 μg，并于 2010 年顺利完成 III 期临床试验，成功达到该适应证临床试验评价的所有主要和次要终点。诺华向 EMA 和 FDA 分别提交市场准入申请，同年 3 月诺华制药集团负责专利实施许可律师向天津溥瀛生物技术有限公司发出希望获得中国发明专利（公开号：CN1583795A，即中国发明专利号：ZL200410042814.8）的全球专利实施许可的律师函。

2005 年 12 月杭州九源基因工程有限公司与军事医学科学院合作获得中国药监局的《药物临床试验批件》，批准直接开展“重组人血清白蛋白-干扰素 α2b 融合蛋白注射液”的 I 期和 II 期临床试验。在该融合蛋白的分子结构中，白蛋白与干扰素 α2b 两个蛋白质之间额外设有 1 个连接肽。2006 年 3 月 – 2008 年 9 月完成了在健康人作为受试者的单次和多次给药的 I 期临床试验研究，随后开展和完成了慢性病毒性乙型肝炎适应证的 II 期临床试验研究工作。

图 1 重组人血清白蛋白融合蛋白技术平台用于研发更优生物创新药的优势及特点

Novozyme 公司在 2008 年将白蛋白技术特别许可给美国 CSL Behring 公司，开展白蛋白与各种凝血因子形成的一系列融合蛋白药物的研究。CSL Behring 公司在 2016年 2 月成功完成注射用重组人血清白蛋白/凝血因子-IX融合蛋白在 91 例血友病 B 患者（先天缺乏凝血因子-IX）作为受试者的临床试验后，随即获得美国 FDA 批准该创新药的上市销售。为需终身用药的血友病 B 儿童和成人患者预防或控制出血和减低出血发作的频数提供了每周给药1 次就可获得更好疗效的药物（现有药物需要每天给药）。该新药成为另一个更优生物创新药的成功案例。

HGS 公司在 2008 年 1 月 22 日将拥有长效重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白（rHSA/GCSF）的分拆公司 Cogenesys 公司整体作价 4 亿美元卖给了 Teva制药集团。2013 年顺利完成临床试验 III 期研究，向欧洲EMA 和美国 FDA 分别提交了市场准入申请。2013 年5 月美国福源集团在中国的子公司天津溥瀛生物技术有限公司和北京美福源生物医药科技有限公司与美国发明专利US7,422,833 的发明人于在林和富岩共同达成数千万人民币的“非独家”专利实施许可授权。协议约定许可 Teva 在美国及其属地生产销售创新药 rHSA/GCSF，但不得进入中国；同时不影响专利人在中国独立原创原研的“注射用重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白”创新药 2 年后进入美国开展临床试验和生产销售的权利。

天津溥瀛生物技术有限公司在 2009 年 10 月向国家药监局提交了“注射用重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白”的治疗用生物制品国家 1 类创新药的临床试验注册申请。2011 年10 月获得《药物临床试验批件》；2010年又提交了“注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白”的临床试验注册申请；2012 年获得《药物临床试验许可批件》；2012 年又通过北京美福源生物医药科技有限公司提交了“注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白”的临床试验注册申请，2015 年 9 月获得《药物临床试验批件》。2016 年 7 月天津溥瀛生物技术有限公司提交了“注射用重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白”治疗用生物制品国家 1 类创新药的临床注册申请，获得受理通知书。美国福源集团将白蛋白融合蛋白在中国的创新药研发业务完整转移给中美福源生物技术（北京）有限公司。天津福盈生物制药有限公司在天津计划投资 2 亿元，启动了“注射用重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白”的 GMP生产基地一期建设。2015 年天津溥瀛生物技术有限公司获得天津市科委认定成立了中国第一个“天津市长效重组融合蛋白企业重点实验室”，专业从事重组人血清白蛋白融合蛋白创新药原创原研工作。

HGS 公司在 2014 年以 160 亿美元价格整体从纳斯达克退市，由 GSK 制药集团私有化。糖尿病药物重组人血清白蛋白/GLP-1 融合蛋白的后续市场分成和 HGS 其他创新药品种（非白蛋白融合蛋白）权利一并转移给 GSK 所有。由此看来 HGS 公司和美国福源集团分别与相关药企药物品种合作和企业间并购重组，都使得白蛋白融合蛋白创新药研发和产业化有了做大做强的可能，也成为更优生物创新药研发和产业化发展的趋势。

图 2 GSK 公司上市销售的 Tanzeum 一次性皮下给药注射用冻干粉针剂产品包装示意图

2 白蛋白融合蛋白创新药主要品种

2.1 注射用重组人血清白蛋白/胰高糖素类肽-1 融合蛋白

当人体血液中的糖含量维持高水平而不能被正常代谢的现象，称为高血糖症，是 2 型糖尿病患者的典型症状。全球有至少 2 亿名 2 型糖尿病患者。为控制高血糖，患者需要终身用药。GLP-1 由胰高血糖素原基因表达，在胰岛α 细胞中，胰高血糖素原基因的主要表达产物是胰高血糖素肽。而在肠黏膜的 L 细胞中，前激素转换酶（PC1）将胰高血糖素原剪切为其羧基端的肽链序列，即 GLP-1。GLP-1有两种生物活性形式，分别为 GLP-1(7-37)和 GLP-1(7-36)，两者仅有一个氨基酸序列不同，GLP-1 约 80% 的生物活性来自 GLP-1(7-36)。GLP-1 具有葡萄糖浓度依赖性降糖作用，即只有在血糖水平升高的情况下，GLP-1 才发挥降糖作用，而在血糖水平正常时，则不会使其进一步降低。GLP-1 的这种葡萄糖浓度依赖性降糖特性是其临床应用安全性的基础与保障，从而免除了人们对现有糖尿病治疗药物及方案可能造成患者严重低血糖的担心。多种 GLP-1 相关蛋白质药物的开发受到极大重视。

白蛋白与 GLP-1 融合蛋白是 HGS 公司开展的一系列长效重组人血清白蛋白融合蛋白中的一个。其药物分子结构是将 GLP-1 的第 8 位氨基酸突变（8Gly）后串联，直接融合在人血清白蛋白成熟肽的 N-端。在 S.cerevisiae 酵母菌中表达分泌，经分离纯化得到阿必鲁肽。在 2012 年4 月 3 日，GSK 公司公开阿必鲁肽于 2 型糖尿病患者中进行的 52 周 8 项 III 期临床试验结果。此 8 项临床试验结果系以餐前用药的长效胰岛素、每天 1 针的利拉鲁肽等作为对照用药，实现了非劣性的临床终点。2014 年 3 月和4 月注射用重组人血清白蛋白/胰高糖素类肽-1 融合蛋白（商品名：Tanzeum）分别获得 EMA 和 FDA 的批准，可在欧洲和美国上市销售。阿必鲁肽是一种 GLP-1 受体激动剂，临床上适用 2 型糖尿病成年患者血糖控制。这是世界上第一个被批准的白蛋白融合蛋白长效化蛋白质创新药物，剂型为冻干粉针剂，规格有 30 和 50 mg/支，均为冻干粉和注射用水分别装填成型在 1 个一次性注射器上（图 2），设计新颖，十分便于患者自己给药。而每周 1 针又大大优于现有市场销售中的每天 1 针的利拉鲁肽，成为真正意义的更优创新生物药典范。

鉴于人源（内源性）的 GLP-1 多肽在人体的半衰期极为短暂（1.5 ～ 2 min），市场上已经成药的 GLP-1都是经过氨基酸变异为类似肽。通过氨基酸改构可延长 GLP-1 在体内的降糖功能，其中，利拉鲁肽通过改构，半衰期可达 13 h。国内数个大学和研究所都投入精力开展了白蛋白和 GLP-1融合蛋白的研究[24-28]。江苏泰康生物医药科技有限公司2013 年 8 月提交 rGLP-1/HSA 融合蛋白临床试验申报；中美福源生物技术（北京）股份有限公司正在开展重组人血清白蛋白/胰高糖素类肽融合蛋白的临床前研究工作，子公司北京美福源生物医药科技有限公司提交了“具持续控制血糖浓度功能的重组人血清白蛋白/胰高糖素类肽融合蛋白”[29]发明专利申请，描述了 3 种不同结构的白蛋白/胰高糖素类肽融合蛋白（图 3），分别是 r(GLP-1)2/HSA、rHSA/(GLP-1)2和 (GLP-1)2/HSA/(GLP-1)2。在人血清白蛋白成熟肽的 N 端和 C 端分别各有 1 个串联的 GLP-1（7-36，Ala8Gly）类肽，该蛋白质结构显示出比阿必鲁肽（每周给药 1 次，剂量为 30 ～ 50 mg/针）具有更优的血液半衰期（2 周给药 1 次）或者每周 1 次但可使用更低的剂量（15 ～ 25 mg/针）。

几乎所有 GLP-1 类似物药物还都具有抑制体重和减肥的功效。接受 GLP-1 类似物治疗组与阳性对照药胰岛素、胰岛素类似物药物相比，体重一般减轻 20% 左右，这也是胰高糖素类肽药物的一大亮点。因此，重组人血清白蛋白/胰高糖素类肽融合蛋白每 2 周给药 1 次将具有极为显著的临床优势，成为更优生物创新药的代表。

2.2 重组人血清白蛋白/凝血因子-IX 融合蛋白

美国 CSL Behring 公司专业从事血液相关因子药物的研发和生产销售。在获得 Novozyme 的血液因子相关的白蛋白融合技术许可后，针对多种凝血因子开展重组人血清白蛋白/凝血因子 VIIa 融合蛋白、凝血因子-VIII 融合蛋白以及白蛋白/凝血因子-IX 融合蛋白长效化的研究[30]。商品名Idelvion 则是该公司在世界上第一个被批准的凝血因子类的注射用重组人血清白蛋白/凝血因子-IX 融合蛋白产品，这也是世界上首个使用 CHO 细胞表达系统生产和制备并上市销售的创新药。适用于患有血友病 B 的儿童和成年人（先天性凝血因子-IX 缺乏）：①出血发作的按需控制和预防；②出血的围手术处理；③常规预防或减少出血发作的频数。Idelvion 不适用那些有免疫耐受性诱导型的血友病B 患者。给药方法为冻干粉复溶后经静脉给药。CSL 公司正在开展其他数个凝血因子的白蛋白融合蛋白长效化创新药研发。预计还将有血友病 A 治疗和预防用药白蛋白-凝血因子-VIII 融合蛋白创新药也将陆续完成临床试验进入市场准入申报阶段。

在国内也已经有数家制药企业投入到血液因子的长效药研发中。中美福源生物技术（北京）股份有限公司子公司天津溥瀛生物技术有限公司利用自有知识产权和白蛋白融合蛋白专利技术平台，已经启动了包括注射用重组人血清白蛋白/凝血因子-VIII 融合蛋白和注射用重组人血清白蛋白/凝血因子-IX 融合蛋白创新药在内的临床前研究。

2.3 重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白

重组粒细胞刺激因子 2010 年的全球销售额大于 50 亿美元，美国市场产品主要是 Amgen 公司的 Neupogen®和Neulasta®，以及 Schering AG 的 Leukine®。由 HGS 公司启动注射用重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白（rHSA/GCSF）的临床前研究，发表了在鼠和猕猴中的药效学和药代动力学研究[31]。2007 年 1 月 HGS 的分拆公司 CoGenesys（仅拥有 rHSA/GCSF 融合蛋白单一在研新药）在欧洲启动了命名为 Neugranin 的注射用重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白的 I-IIa 期临床试验。随即对入组的 60 例乳腺癌患者开展多中心双盲的安全性和清除速率研究。2008 年 Teva Pharmaceutic（在 HGS 被 GSK私有化之前），以 4 亿美元收购了 CoGenesys 公司后，又将 Neugranin 继续带入和成功完成临床 II 期和 III 期试验，获得与阳性对照药 Neulasta（PEG 化 G-CSF）几乎完全相同的临床试验疗效[32-34]，并且适用于儿童。

Teva 公司于 2013 年分别向欧洲和美国申请市场准入许可，商品名 Balugrastim。2014 年 Volovat 等[35]公布了 III期临床试验研究结果，获得非劣于 PEG-G-CSF 阳性对照药的临床疗效和安全性。Pfeil 等[36]于 2015 年详细比较了白蛋白融合蛋白 G-CSF 和 PEG 化 G-CSF 在临床上的有效性和安全性。

图 3 更优生物创新药胰高糖素类肽药物分子结构[29][A：人血清白蛋白（HSA）；B：阿必鲁肽，串联的 (GLP-1)2处于 HSA的 N 端；C：新药物分子结构，串联的 (GLP-1)2处于 HSA 的 C 末端；D：新的药物分子结构在 HSA 成熟肽的 N 端和 C 端都各有 1 个串联的 (GLP-1)2]

美国福源集团的白蛋白融合蛋白技术在 2002 年完成重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白表达酵母工程菌基因构建，在中国的全资公司陆续开展成药性研究、药学研究和临床前动物实验研究[37-38]。2009 年天津溥瀛生物技术有限公司申报原创原研的新药“注射用重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白”注册申请。2011 年获得CFDA 批准开展 I ～ II 期临床试验的许可批件。目前正在II 期临床试验阶段。

江苏泰康生物医药有限公司将人血清白蛋白与突变了1 个氨基酸后的人 G-CSF 形成了融合蛋白。2014 年 12 月完成了 50、150、300、400、500、600 μg/kg 供试药剂量组（即相当于 60 kg 体重给药剂量 3、9、18、24、30、36 mg）单次给药的 I 期临床试验。

2.4 重组人血清白蛋白/干扰素 α 融合蛋白

由 HGS 公司率先启动的注射用重组人血清白蛋白/干扰素-α2b 融合蛋白（rHSA/IFNα2a 和 rHSA/IFNα2b）治疗慢性病毒性丙型肝炎适应证的临床试验，2002 年以 5.07 亿美元许可给诺华制药集团。2010 年成功完成了针对丙型肝炎患者的 III 期临床试验，900 μg 剂量组每 2 周给药1 次，所有指标均优于每周给药 1 次的阳性对照药美国罗氏制药集团的派罗欣（Pegasys，PEG 化干扰素 α2a）[39-40]。Subramanian 等[40]2007 在 Nature Biotechology 上撰文以图 4 展示了白蛋白融合蛋白优势。2010 年申报市场准入后，欧洲和美国均针对该临床 III 期方案和剂量安全性的问题提出疑问，要求补充资料说明。这源于在开展 III 临床试验方案中是供试药以 1200 μg 每 2 周给药 1 次和阳性对照药派罗欣每周给药 1 次进行比较，在入组 1/3 的受试者后供试药出现 1 例 SAE（严重不良事件）；随后研究者为了满足安全性的要求，将给药剂量降低到 900 μg 剂量，完成了 III 期临床试验，获得了 900 μg 剂量 2 周给药 1 次非劣于阳性对照药的结果。但对比 II 期临床试验中的900 μg 与 600 μg 剂量组在 2 周给药 1 次与阳性对照药派罗欣的 1 周给药 1 次，在药效和安全性指标无显著差异。那么因为安全性而将给药剂量从 1200 μg下降到 900 μg，是否 600 μg 的给药剂量在满足疗效的前提下，安全性会更优于 900 μg剂量？理论上这时应再有一个 600 μg 剂量的受试者样本放大的临床试验（III 期），补充试验比较其与900 μg 剂量的有效性和安全性。此时，美国吉利德公司的丙肝口服片剂小分子新药 Silvefa 已经接近完成 III 期临床试验，公开的数据显示了其具成药性，并且其是丙肝可治愈新药。诺华制药集团如果重新启动新的临床试验，预计需要 2 年完成，在时间上，也正是吉利德丙肝新药上市之时。这样在丙肝适应证的治疗疗效上，就不具有可比优势，为此不得不放弃提交补充资料，放弃争取上市销售的机会。

需要指出的是，2010 年 4 月诺华制药集团给天津溥瀛生物技术有限公司发出了律师函请求获得其拥有的中国发明专利（公开号：CN1583795A）的实施许可授权。其后由于诺华放弃长效重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白上市申请后，双方停止了在丙肝适应证上的专利实施许可授权谈判。但双方表达了希望今后能继续寻求在慢性病毒性乙型肝炎这个适应证上的合作。其依据是作为重大感染性疾病，慢性病毒性乙型肝炎（DNA 病毒）在中国的发生率和需要药物治疗的患者数量几近上亿，是个重大人类疾病适应证而决定的。

杭州九源生物工程有限公司在 2004 年申报了“重组人血清白蛋白-干扰素 α2b 融合蛋白注射液”的临床试验注册，申报的临床适应证是慢性病毒性乙型肝炎。2005 年获得药物临床试验 I-II 期批件。2005 年底进入临床试验，并由徐道振和谢尧教授主持开展和完成了临床 I 期和II 期研究，但未能获得临床 III 期许可。

作者带领的团队在世界上率先开展了“注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白”的临床前研究[11,13,41-42]，2012 年获得临床试验许可批件。现在已经完成“在健康志愿者中单次给药、剂量递增的耐受性、药代动力学和药效学临床试验”的 Ia 期临床研究和“评价注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白多剂量的单次和多次给药在慢性乙型肝炎患者中的耐受性、药代动力学和药效学的单中心、随机、阳性对照的 Ib 期临床试验”。2015 年“注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白”也获得CFDA 批准进入临床试验阶段，现结束了临床 Ia 期健康人为受试者的研究阶段，正开展乙型肝炎患者的单次和多次给药在慢性乙型肝炎患者中的耐受性、药代动力学和药效学的单中心、随机、阳性对照的 Ib 期临床试验。临床试验中的对照药采用的是美国罗氏公司的派罗欣。

齐鲁制药有限公司和中国军事医学科学院 2014 年获得药物临床试验批件，共同开展了重组人血清白蛋白-干扰素 α2a 融合蛋白注射液单次给药、剂量递增的耐受性、药动学和药效学 Ia 期临床试验。

2.5 注射用重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白

于在林 2002 年提交了重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白（rHSA/EPO）的创新分子结构及用途的美国发明专利申请[9]，其后又在中国提交了发明专利申请[10]。中国发明专利在 2006 年获得授权，美国发明专利申请则于 2008 年获得授权[12]。利用 CHO 细胞表达和制备“不设有连接肽”的重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白，经过 10 余年的研究，2016 年 7 月完成了详尽的临床前药学研究[43]和动物药效学、药理学、毒理学的药效学和安全评价研究[44]，提交了创新药临床注册申请，获得了 CFDA 新药注册申报受理通知书。国内和韩国的科学家也在文献中公开报道构建重组人血清白蛋白-促红素融合蛋白的研究结果，但他们都是在人血清白蛋白与促红素蛋白质之间设有一个长度不等的氨基酸连接肽，构成白蛋白-促红素融合蛋白[45-47]。本文作者的研究表明设有这个连接肽是没有必要的，在临床上很可能会带来较为潜在的免疫原性反应，但却回避了作者在先公开的 no-linker 白蛋白-促红素融合蛋白的发明专利。

2.6 正在临床前研究阶段的几个具有成药性的注射用重组人血清白蛋白融合蛋白

2.6.1 重组人血清白蛋白/生长激素融合蛋白 美国 HGS公司 2002 年报道了在大鼠和猴中开展的重组人血清白蛋白/生长激素融合蛋白（albutropin，rHSA/GH）药代动力学和药效学研究。与重组人生长激素相比，albutropin 皮下注射给药大鼠后，血浆半衰期增加了 4 倍；清除率降低了2 倍。皮下注射给药猴（0.3 mg/kg），则在血浆半衰期延长6 倍，血液清除率下降了 8 倍。单次皮下注射给药albutropin（0.3、1.5、4 mg/kg）后，增加血液中的胰岛素生长因子（IGF-1）水平长达 7 d。连续 7 d 每天给药 rhGH（0.3 mg/kg）与单次给药 albutropin（4 mg/kg）诱导增加的IGF-1 水平相当。Albutropin 以 1 ～ 20 μg/(kg·d)，隔天或每4 天给药一次都能与相当分子摩尔剂量的 rhGH 相同，可显著增加大鼠体重和增加切除垂体的大鼠胫骨骨骺生长板的宽度[48]。天津溥瀛生物技术有限公司与中美福源生物技术（北京）股份有限公司的重组人血清白蛋白/生长激素融合蛋白已经进入临床前研究阶段。国内其他研究者也获得了相近的研究结果[49-50]。

2.6.2 重组人血清白蛋白/白介素-11 融合蛋白 作者研究发明的人血清白蛋白和白介素-11（rHSA/IL-11）两个蛋白质之间不设有连接肽的融合蛋白分子结构获得了中国和美国发明专利授权[10,16]，目前正在临床前试验阶段。江南大学也开展了重组人血清白蛋白/白介素-11 融合蛋白的研究[51]。

2.6.3 重组人血清白蛋白/尿酸氧化酶融合蛋白 作者正在开展临床前研究工作的重组人血清白蛋白/尿酸氧化酶融合蛋白（rHSA/UO）中的尿酸氧化酶为来自酵母菌的尿酸氧化酶基因和修饰后的人源尿酸氧化酶。初步的临床前研究工作显示来自酵母菌的尿酸氧化酶生物活性要显著高于人源尿酸氧化酶。由此，进入临床前动物实验安全性评价工作，较大可能是使用来自酵母菌的尿酸氧化酶。

2.6.4 重组人血清白蛋白/白介素-2 融合蛋白 作者研究发明的人血清白蛋白和白介素-2（rHSA/IL-2）两个蛋白质之间不设有连接肽的融合蛋白分子结构获得了中国和美国发明专利授权[10]。在人血清白蛋白和白介素-2 中间设有连接肽的重组融合蛋白则由军科院提交了中国发明专利申请和获得授权[52]。金光泽等[53]将人血清白蛋白与人白介素-2基因 DNA 序列给予突变后（C125A；半胱氨酸 125 丙氨酸）直接连接，之间不设有连接肽，获得在毕赤酵母中较好的表达量和融合蛋白具有典型的 IL-42 生物活性。

2.7 重组人血清白蛋白/皮肤生长因子融合蛋白外用药和滴眼液的研究

作者首先公开了重组人血清白蛋白融合蛋白作为药物的外用给药的可能性研究工作，试验验证了含有人血清白蛋白（HSA）与多种不同的人皮肤细胞生长因子，如表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、角质细胞生长因（KGF）、血小板衍生因子（PDGF）、类胰岛素生长因子（IGF）等，形成的融合蛋白所构成的各种护肤品，具有比仅含有细胞生长因子单体、或仅含有人血清白蛋白的护肤品有更好的使用效果。融合后的细胞因子在体内和体外具有更长的半衰期和更好的持续作用效果。当复合使用由 HSA 和不同生长因子形成的融合蛋白（HSA/GF）组合构成的护肤品，可具有同时刺激多种皮肤细胞的修复和具协同增效作用。这种新型的护肤品广泛应用在保健、美容、除皱、祛斑、增白和创伤或烧伤的治疗[15,54-61]。

世界上第一个在植物（烟草）中获得高效表达的重组人血清白蛋白融合蛋白是重组人血清白蛋白/表皮生长因子融合蛋白（rHSA/EGF），由韩国科学家在 2006 年通过美国发明专利申请公开[62]。

2.8 重组人血清白蛋白融合蛋白口服制剂的研究

口服给药因给药方便而依从度高，成为一种最理想的给药方式。但是蛋白质药物经口服给药的生物利用度不高。本文作者开展了寻找适宜于重组人血清白蛋白融合蛋白的口服制剂配方的拓展性研究，达到更方便使用，成本低廉的制剂形式，获得有益的改善人体健康状态形成新的保健产品和具有临床疗效的新药物制剂[63]。特别是不以临床上治疗所要求的“要严格确认进入血液系统的药物剂量”的情况下，口服融合蛋白可以达到改善身体状态，微调身体机能的目的。口服制剂配方中重组人血清白蛋白融合蛋白含量可为1% ～ 5%。制剂产品形式可以是口腔含片，置于舌下溶解和吸收；也可以人工或机械方式灌注肠溶胶囊中，经口服进入食道、胃最终进入小肠中溶解、释放和吸收。初步的实验证明重组人血清白蛋白融合蛋白（分子量大于 70 kD）这种大分子蛋白质能经由特定的制剂，如同小分子代表多肽一样，通过口服进入体内血液循环系统，显示出相应的生物活性功能。口服制剂经口服给予（药）动物后，在血液中均可检测到功能性蛋白质分子的存在，确认融合蛋白进入血液中。这个技术可用于 rHSA/GH 和 rHSA/EPO 的口服给药，可分别达到促生长，治疗矮小症以及改善和治疗贫血症的目的。

3 目前国内外正在研究中的白蛋白融合蛋白创新药品种

我们以简要的列表方式展示国内外正在开展研究的部分重组白蛋白融合蛋白研究，功能性蛋白质可分为有临床药物研究方向或具有生物学功能的白蛋白融合蛋白、功能性蛋白质也可以是人源或动物源的重组白蛋白融合蛋白。这些融合蛋白使用的表达系统有酵母菌、CHO 细胞、细菌或植物。表 1 中列出了相关文献来源。据作者不完全统计，约有 60 多个治疗用重组蛋白质药物或者功能性蛋白质与人血清白蛋白形成的融合蛋白分别获得表达，部分已经进入成药性研究阶段。

4 问题与展望

重组人血清白蛋白融合蛋白在过去的 10 年里研发进展较快，现在世界上已经有 2 个进入生产和市场销售阶段，作者预计在随后的 10 年应该有 6 ～ 10 个重组人血清白蛋白融合蛋白创新药进入市场销售。在中国研发成本相对较低，大约是美国同类创新药研发成本的 1/25，临床受药患者数量为全球单一市场人数最多，生物类似药市场成功率较高，值得研发机构的资金投入。当随着重组人血清白蛋白融合蛋白创新药更多成功进入临床试验阶段、进入生产销售阶段，会有更多白蛋白融合蛋白进入制药企业的研发线。

随着创新药审批提速、上市许可人制度等重要政策陆续落地，大大缩短药企创新药上市时间，为企业赢得更多利润；鼓励科学家创新，尤其是高校、科研院所的创新成果能够转化为实际的经济效益，将极大促进对创新药的研发热情。创新药的定义是指国内外没有上市销售、药物分子结构为原创，药物质量控制技术和标准为世界原研、临床上具有更优于现有同类药物的新药，当然生产成本更低也是属于创新药研发的范畴。长效白蛋白融合蛋白创新药都满足了这些条件和要求，特别是长效创新药使给药频次大大降低、依从度更高、治疗效果更优、医疗费用更低、生产成本更廉，研发成功率更高，而必然成为更受药企和社会医保系统欢迎的“绿色药物”。

志谢 尹娅凤硕士、常宗平博士在本文的文献整理工作上曾给予帮助，在此表示诚挚的感谢。

[1] Chuang VT, Kragh-Hansen U, Otagiri M. Pharmaceutical strategies utilizing recombinant human serum albumin. Pharm Res, 2002, 19(5): 569-577.

[2] Kratz F. Albumin as a drug carrier: design of prodrugs, drug conjugates and nanoparticles. J Control Release, 2008, 132(3): 171-183.

[3] Strohl WR. Fusion proteins for half-life extension of biologics as a strategy to make biobetters. BioDrugs, 2015, 29(4):215-239.

[4] Chen C, He J, Lu WG, et al. Progress on albumin as slightly soluble drugs carrier for injection. Chin J Pharm, 2010, 41(1):51-54. (in Chinese)

陈辰, 何军, 陆伟根, 等. 白蛋白作为注射用难溶性药物载体的研究进展. 中国医药工业杂志, 2010, 41(1):51-54.

[5] Yeh P, Landais D, Lemaître M, et al. Design of yeast-secreted albumin derivatives for human therapy: biological and antiviral properties of a serum albumin-CD4 genetic conjugate. Proc Natl Acad Sci U S A, 1992, 89(5):1904-1908.

[6] Shi YF, Bian L. Research advances in improving the pharmacokinetics of protein drugs by utilizing human serum albumin as a carrier. Chin Med Biotechnol, 2008, 3(6):454-456. (in Chinese)石屹峰, 边蕾. 以人血清白蛋白为载体的长效蛋白质药物的研究进展. 中国医药生物技术, 2008, 3(6):454-456.

[7] Rogers B, Dong D, Li Z, et al. Recombinant human serum albumin fusion proteins and novel applications in drug delivery and therapy. Curr Pharm Des, 2015, 21(14):1899-1907.

[8] Rosen CA, Haseltine WA. Albumin fusion proteins: US, 0111850:W. 2001-10-25.

[9] Yu ZL, Fu Y. Recombinant human serum albumin fusion proteins with long-lasting biological effects: US, 60934603:A. 2007-07-17.

[10] Yu ZL. Human serum albumins recombined merge protein having hyperplasia stimulation function to multiple cells: CN, 02142881.6. 2004-01-14. (in Chinese)于在林. 对多种细胞具刺激增生作用的人血清白蛋白重组融合蛋白: 中国, 02142881.6. 2004-01-14.

[11] Fu Y, Yu ZL. Long acting human interferon analogs: US, 47549009:A. 2009-11-12.

[12] Yu ZL, Fu Y. Recombinant human serum albumin-erythropoietin fusion proteins with long-lasting biological effects: US, 82568607:A. 2008-10-28.

[13] Fu Y, Yu ZL. Human interferon analogue with long-lasting biological effects: CN, 200410042814.8. 2005-02-23. (in Chinese)富岩, 于在林. 长效的人干扰素类似物: 中国, 200410042814.8. 2005-02-23.

[14] Fu Y, Yu ZL. Configuration of high effect expression serum albumin yeast strain and fermentation purification technology: CN, 200410057313.7. 2005-05-25. (in Chinese)富岩, 于在林. 高效表达人血清白蛋白酵母菌株的构建及发酵纯化工艺: 中国, 200410057313.7. 2005-05-25.

[15] Yu ZL, Fu Y. Human serum albumin recombination fusion protein with continuous repairing function to multifarious skin cell: CN, 200710057571.9. 2008-02-13. (in Chinese)于在林, 富岩. 对多种皮肤细胞修复具持续作用的人血清白蛋白重组融合蛋白: 中国, 200710057571.9. 2008-02-13.

[16] Yu ZL, Fu Y. Recombinant human albumin-interleukin-11 fusion protein with long-lasting biological effects: US, 20311608:A. 2011-12-27.

[17] Fu Y, Yu ZL. Skincare composition comprising HSA fusion protein, preparation method and uses thereof: US, 52998108:A. 2011-02-03.

[18] Yu ZL, Fu Y. Technique for separating and purifying recombination human serum albumin and fusion protein thereof: CN, 200810089645.1. 2008-09-10. (in Chinese)于在林, 富岩. 一种重组人血清白蛋白及其融合蛋白的分离纯化工艺: 中国, 200810089645.1. 2008-09-10.

[19] Yu ZL, Fu Y, Han G, et al. Universal pharmaceutical formulation for recombined human serum albumin fusion proteins for injection: CN, 200910210379.8. 2010-04-14. (in Chinese)于在林, 富岩, 韩国, 等. 通用的注射用重组人血清白蛋白融合蛋白制剂配方: 中国, 200910210379.8. 2010-04-14.

[20] Woodward HN, Anderson SL. Once-weekly albiglutide in the management of type 2 diabetes: patient considerations. Patient Prefer Adherence, 2014, 8:789-803.

[21] Matthews JE, Stewart MW, De Boever EH, et al. Pharmacodynamics, pharmacokinetics, safety, and tolerability of albiglutide, a long-acting glucagon-like peptide-1 mimetic, in patients with type 2 diabetes. J Clin Endocrinol Metab, 2008, 93(12):4810-4817.

[22] Baggio LL, Huang Q, Brown TJ, et al. A recombinant human glucagon-like peptide (GLP)-1-albumin protein (albugon) mimics peptidergic activation of GLP-1 receptor-dependent pathways coupled with satiety, gastrointestinal motility, and glucose homeostasis. Diabetes, 2004, 53(9):2492-2500.

[23] Bush MA, Matthews JE, De Boever EH, et al. Safety, tolerability, pharmacodynamics and pharmacokinetics of albiglutide, a long-acting glucagon-like peptide-1 mimetic, in healthy subjects. Diabetes Obes Metab, 2009, 11(5):498-505.

[24] Chen JQ, Gao ZH, Zhu YY, et al. Purification and characterization of glucagon-like peptide-1 and human serum albumin fusion protein expressed in Pichia pastoris. Microbiology, 2007, 34(5):871-874. (in Chinese)陈家琪, 高智慧, 朱元元, 等. 重组胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白的纯化及活性研究. 微生物学通报, 2007, 34(5):871-874.

[25] Long J, Xue C, Zhao HL, et al. Expression of 2 Gly-hGLP-1-HSA fusion protein in Pichia pastoris. Lett Biotechnol, 2008, 19(4):488-492. (in Chinese)龙娟, 薛冲, 赵洪亮, 等. 人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达. 生物技术通讯, 2008, 19(4):488-492.

[26] Chen QL, Dou WF, Lei JY, et al, Purification and Identification of Recombinant Protein rh(GLP-1A2G)2-HSA. Biotechnol Bull, 2008, (6):147-152. (in Chinese)陈其亮, 窦文芳, 雷楗勇, 等. 重组胰高糖素样肽-1 融合蛋白的纯化及其活性测定. 生物技术通报, 2008, (6):147-152.

[27] Gao H, Xu CB, Li Y. Construction and expression of sGLP-1-HSA fusion protein. China Biotechnol, 2009, 29(8):19-25. (in Chinese)高华, 许崇波, 李元. 截短型胰高血糖素样肽-1的融合构建与表达.中国生物工程杂志, 2009, 29(8):19-25.

[28] Xia S, Zhao HL, Xue C, et al. Construction and expression of releasable glucagon-like peptide-1 and human serum albumin fusion proteins and preliminary evaluation of their pharmacodynamics and pharmacokinetics. Milit Med Sci, 2015, 39(8):587-592. (in Chinese)夏珊, 赵洪亮, 薛冲, 等. 可解离的人胰高血糖素样肽 1与人血清白蛋白融合蛋白的构建表达及其初步药代动力学和药效动力学评价. 军事医学, 2015, 39(8):587-592.

[29] Fu Y, Yu ZL. Recombinant human serum albumin/pancreatic glucagon peptide fusion protein having blood sugar content continuous control function: CN, 201410532831.3. 2016-08-24. (in Chinese)富岩, 于在林. 具持续控制血糖含量功能的重组人血清白蛋白/胰高糖素类肽融合蛋白: 中国, 201410532831.3. 2016-08-24.

[30] Schulte S. Pioneering designs for recombinant coagulation factors. Thromb Res, 2011, 128 Suppl 1:S9-S12.

[31] Halpern W, Riccobene TA, Agostini H, et al. Albugranin, a recombinant human granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) genetically fused to recombinant human albumin induces prolonged myelopoietic effects in mice and monkeys. Pharm Res, 2002, 19(11): 1720-1729.

[32] Bock JB, Bell AC, Herpst J. Recombinant human albumin-human granulocyte colony stimulating factor for the prevention of neutropenia: US, 68875410:A. 2010-09-09.

[33] Bock JB, Luo X. Stable Formulations of recombinant human albumin-human granulocyte colony stimulating factor: US, 68865510:A. 2010-11-25.

[34] Buchner A, Lammerich A, Avisar N. Recombinant human albumin-human granulocyte colony stimulating factor for the prevention of neutropenia in pediatric patients: US, 201414213989:A. 2014-09-18.

[35] Volovat C, Gladkov OA, Bondarenko IM, et al. Efficacy and safety of balugrastim compared with pegfilgrastim in patients with breast cancer receiving chemotherapy. Clin Breast Cancer, 2014, 14(2):101-108.

[36] Pfeil AM, Allcott K, Pettengell R, et al. Efficacy, effectiveness and safety of long-acting granulocyte colony-stimulating factors for prophylaxis of chemotherapy-induced neutropenia in patients with cancer: a systematic review. Support Care Cancer, 2015, 23(2):525-545.

[37] Fu Y, Han G, Fu YS, et al. Expression and the physical and chemical characterizations studies of recombinant human serum albumin/granulocyte colony-stimulating factor fusion protein with long-acting bio-function. Chin Med Biotechnol, 2011, 6(3):161-172. (in Chinese)富岩, 韩国, 富俞淞, 等. 具长效性重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白的理化特性研究. 中国医药生物技术, 2011, 6(3): 161-172.

[38] Fu Y, Yin LL, Gu JL, et al. Studies on pharmacodynamics, pharmacology, and toxicology of recombinant human serum albumin/granulocyte colony-stimulating factor fusion protein. Chin Med Biotechnol, 2012, 7(4):241-256. (in Chinese)富岩, 尹丽莉, 顾静良, 等. 重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白的药效学、药理学和毒理学研究. 中国医药生物技术, 2012, 7(4): 241-256.

[39] Osborn BL, Olsen HS, Nardelli B, et al. Pharmacokinetic and pharmacodynamic studies of a human serum albumin-interferon-alpha fusion protein in cynomolgus monkeys. J Pharmacol Exp Ther, 2002, 303(2):540-548.

[40] Subramanian GM, Fiscella M, Lamousé-smith A, et al. Albinterferon alpha-2b: a genetic fusion protein for the treatment of chronic hepatitis C. Nat Biotechnol, 2007, 25(12):1411-1419.

[41] Fu Y, Han G, Yang XN, et al. Expression and the physical and chemical characterizations studies of two recombinant human serum albumin/interferon-α (2a; 2b) fusion proteins with long-acting bio-function. Chin Med Biotechnol, 2011, 6(2):84-95. (in Chinese)富岩, 韩国, 杨小楠, 等. 两种具长效性重组人血清白蛋白/干扰素α融合蛋白表达工程菌的构建及融合蛋白的理化特性研究. 中国医药生物技术, 2011, 6(2):84-95.

[42] Fu Y, Ma JL, Sun L, et al. Pharmacodynamics, pharmacokinetics and safety studies on recombinant human serum albumin/interferon-α2a fusion protein. Chin Med Biotechnol, 2012, 7(6):401-411. (in Chinese)富岩, 马金玲, 孙丽, 等. 重组人血清白蛋白/干扰素α2a融合蛋白的药效学、药代动力学及安全性评价. 中国医药生物技术, 2012, 7(6):401-411.

[43] Fu Y, Yang XN, Wei KH, et al. Expression, preparation and characterization studies of a recombinant human serum albumin/ erythropoietin fusion protein with novel molecular structure and long acting bio-better function. Chin Med Biotechnol, 2017, 12(1):6-19. (in Chinese)富岩, 杨小楠, 魏开华, 等. 具创新分子结构的更优长效性重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白的表达、制备和特性研究. 中国医药生物技术, 2017, 12(1):6-19.

[44] Fu Y, Ma JL, Li KT, et al. Studies on pharmacodynamics, pharmacokinetics and safety reviews of recombinant human serum albumin/erythropoietin fusion protein for injection as a bio-better drug. Chin Med Biotechnol, 2017. 12(2):97-110. (in Chinese)富岩, 马金玲, 李开通, 等. 注射用重组人血清白蛋白/促红素融合蛋白的药效学、药代动力学及安全性评价研究. 中国医药生物技术, 2017, 12(2):97-110.

[45] Gou XH, Huang YC, Han L, et al. Interfusion protein of human serum protein and erythropoietin: CN, 200410053319.7. 2009-07-22. (in Chinese)苟兴华, 黄迎春, 韩雷, 等. 人血清蛋白与促红细胞生成素的融合蛋白: 中国, 200410053319.7. 2009-07-22.

[46] Huang YC, Gou XH, Han L, et al. Construction and expression of recombinant human serum albumin-EPO fusion protein. J Sichuan Univ (Med Sci Ed), 2011, 42(3):317-321. (in Chinese)黄迎春, 苟兴华, 韩蕾, 等. 人血清白蛋白与促红细胞生成素融合蛋白的构建及表达. 四川大学学报(医学版), 2011, 42(3):317-321.

[47] Joung CH, Shin JY, Koo JK, et al. Production and characterization of long-acting recombinant human albumin-EPO fusion protein expressed in CHO cell. Protein Expr Purif, 2009, 68(2):137-145.

[48] Osborn BL, Sekut L, Corcoran M, et al. Albutropin: a growth hormone-albumin fusion with improved pharmacokinetics and pharmacodynamics in rats and monkeys. Eur J Pharmacol, 2002, 456(1-3):149-158.

[49] Blains DJ. Growth hormone and serum albumni recombinant fusion protein: CN, 03110364.2. 2010-2-17. (in Chinese)巴兰斯 DJ. 生长激素和血清白蛋白重组融合蛋白: 中国, 03110364.2. 2010-2-17.

[50] Qi N, Zhang YH, Wu J, et al. Efficient expression and secretion of a long-acting form of human growth hormone in Pichia pastoris. China Biotechnol, 2012, 32(12):37-46. (in Chinese)戚楠, 张艳红, 吴军, 等. 毕赤酵母高效分泌长效人生长激素的研究. 中国生物工程杂志, 2012, 32(12):37-46.

[51] Wu Q. Fermentation and purification of a human serum albumin/Interleukin-11 fusion protein. Wuxi: Jiangnan University, 2011. (in Chinese)吴琼. 人血清白蛋白/人白介素-11融合蛋白的发酵及纯化. 无锡:江南大学, 2011.

[52] Wu J, Chang SH, Gong X. et al. Interfusion protein between human serum albumin and interleukin, and encoding genes: CN, 200310117068:A. 2008-04-09. (in Chinese)吴军, 唱韶红, 巩新, 等. 人血清白蛋白与白细胞介素 2的融合蛋白及其编码基因: 中国, 200310117068:A. 2008-04-09.

[53] Jin GZ, Duan ZY, Zhang LF, et al. Expression of the fusion protein human serum album/mutant human interleukin 2C125A in Pichia pastoris. J Food Sci Biotechnol, 2010, 29(4):595-601. (in Chinese)金光泽, 段作营, 张莲芬, 等. 重组融合人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达. 食品与生物技术学报, 2010, 29(4):595-601.

[54] Fu Y, Yu ZL. Technique for preparing amalgamation protein skin-protection product containing albuminar and skin cell growth factor, and uses of the same: CN, 200710059770.3. 2011-4-27 (in Chinese)富岩, 于在林. 含人血清白蛋白与皮肤细胞生长因子的融合蛋白护肤产品制备工艺和用途: 中国, 200710059770.3. 2011-4-27.

[55] Fu Y, Yu ZL. Skincare composition comprising HSA fusion protein, preparation method and uses thereof: US, 52998108:A. 2013-12-10.

[56] Fu Y, Yu ZL. Method of use and preparation of HSA fusion protein composition for skincare: US, 201314064701:A. 2015-08-25.

[57] Fu Y, Yu ZL. Skin care composition containing HSA fusion protein, method for preparation and use thereof: CN, 2008072485:W. 2009-04-09.

[58] Yu ZL, Fu Y. Recombinant human serum albumin/FGF fusion protein with continuous effect on restoration of a plurality of skin cells: CN, 201110211843.2. 2012-01-11. (in Chinese)于在林, 富岩. 对多种皮肤细胞修复具持续作用的重组人血清白蛋白/FGF融合蛋白: 中国, 201110211843.2. 2012-01-11.

[59] Yu ZL, Fu Y. Recombinant fusion protein of human serum albumin/keratinocyte growth factors: CN, 201310335662.X. 2016-07-20. (in Chinese)于在林, 富岩. 重组人血清白蛋白/角质细胞生长因子融合蛋白:中国, 201310335662.X. 2016-07-20.

[60] Yu ZL, Fu Y. Recombinant human serum albumin/insulin-like growth factor fusion protein: CN, 201310335689.9. 2014-08-27. (in Chinese)于在林, 富岩. 重组人血清白蛋白/类胰岛素生长因子融合蛋白:中国, 201310335689.9. 2014-08-27.

[61] Yu ZL, Fu Y. Recombinant human serum albumin/platelet-derived growth factor fusion protein: CN, 201310335639.0. 2014-08-27. (in Chinese)于在林, 富岩. 重组人血清白蛋白/血小板源性生长因子融合蛋白:中国, 201310335639.0. 2014-08-27.

[62] Lee S, Yoo JG, Park SH. Method for preparing fusion polypeptide comprising epidermal growth factor and human serum albumin in plants: US, 52038805:A. 2006-8-31.

[63] Fu Y, Yu ZL. Oral recombined human serum albumin fusion protein preparation formula, products of the protein preparation, and applications of the protein preparation: CN, 201310465746.5. 2014-01-22. (in Chinese)富岩, 于在林. 口服用重组人血清白蛋白融合蛋白制剂配方、产品及用途: 中国, 201310465746.5. 2014-01-22.

[64] Xu Y, Sun JM, Zhang LF, et al. Construction and expression of a fusion protein of human serum aibumin-granulocyte colony-stimulating factor in P.Pastoris. Pharm Biotechnol, 2008, 15(2):109-114. (in Chinese)徐钰, 孙钧铭, 张莲芬, 等. 人 GCSF-白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达. 药物生物技术, 2008, 15(2):109-114.

[65] Li DY, Zou WY, Fan QL, et al. Cloning and expressing of HSA-hG-CSF fusion protein. J Biol, 2009, 26(6):34-36. (in Chinese)李道远, 邹文艺, 范清林, 等. 人血清白蛋白和粒细胞集落刺激因子融合蛋白的克隆表达. 生物学杂志, 2009, 26(6):34-36.

[66] Zhao SQ, Zhang Y, Tian H, et al. Expression and bioactivity of recombinant 3DHSA-Nartograstim fusion protein in Pichia pastoris. J China Pharm Univ, 2013, 44(6):577-582. (in Chinese)赵述强, 张瑜, 田浤, 等. 重组人血清白蛋白第 3结构域-Nartograstim 融合蛋白在毕赤酵母中的表达及初步活性研究. 中国药科大学学报, 2013, 44(6):577-582.

[67] Fan M. Expression, purifaction and GMP production of human serum albumin-GCSF(I) fusion protein. Hangzhou: Zhejing University, 2013. (in Chinese)范敏. 人血清白蛋白—人粒细胞集落刺激因子(I)融合蛋白的表达与纯化及GMP生产. 杭州: 浙江大学, 2013.

[68] Li DY. Clone and expression of human serum albumin- GCSF fusion protein. Hefei: Anhui University, 2009. (in Chinese)李道远. 人血清白蛋白融合人粒细胞集落刺激因子融合蛋白的克隆表达. 合肥: 安徽大学, 2009.

[69] Ma GC. Human serum albumin-G-CSF fusion protein expression and purification in year. Hangzhou: Zhejiang University, 2004. (in Chinese)马国昌. 人血清白蛋白与G-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的表达及表达产物的纯化与鉴定. 杭州: 浙江大学, 2004.

[70] Zhu SF, Zhang LF, Chen HY, et al. Expression of mutant HSA-hGCSF in Pichia pastoris. Chin J Biochem Pharm, 2008, 29(5):289-293. (in Chinese)朱书峰, 张莲芬, 陈化蕴, 等. 重组人血清白蛋白-hGCSF突变体在毕赤酵母中的表达. 中国生化药物杂志, 2008, 29(5):289-293.

[71] Wang CM, Wang TY, Yang ZY, et al. Expression of the recombinant HSA-G-CSF in Pichia pastoris. China Biotechnol, 2006, 26(12):34-39. (in Chinese)王昌梅, 王同映, 杨志愉, 等. 重组HSA-hG-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的表达. 中国生物工程杂志, 2006, 26(12):34-39.

[72] Zhu SF. Computer assistant to design the structure of HSA-hGCSF fusion protein. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)朱书峰. 计算机辅助HSA-hGCSF融合蛋白的分子改造. 无锡: 江南大学, 2008.

[73] Li QL. Fementation and purification of HSA-GCSF-m in yeast. Wuxi: Jiangnan University, 2015. (in Chinese)李清亮. 毕赤酵母表达HSA-GCSF-m融合蛋白的发酵与纯化研究.无锡: 江南大学, 2015.

[74] Wang YF, Fan M, Wu YL, et al. Pharmaceutical preparation containing recombinant human serum albumin-human granulocyte colony stimulating factor fusion protein and preparation thereof: CN, 201110063187.6. 2012-09-19. (in Chinese)王叶飞, 范敏, 吴亦亮, 等. 含有重组人血清白蛋白-人粒细胞集落刺激因子融合蛋白的药物制剂及其制备: 中国, 201110063187.6. 2012-09-19.

[75] Gao XD, Zhao SQ, Zhang Y, et al. Fusion protein of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) as well as mutant of granulocyte colony-stimulating factor (mG-CSF) and human serum albumin 3rd domain (3DHSA) and application: CN, 201310042159.5. 2013-05-15. (in Chinese)高向东, 赵述强, 张瑜, 等. 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)及其突变体(mG-CSF)与人血清白蛋白第三结构域(3DHSA)的融合蛋白及应用: 中国, 201310042159.5. 2013-05-15.

[76] Chu M, Zhang LF, Zhu SF, et al. Fused protein of human serum albumin and human granulocyte colony stimulating factor mutant, and preparation thereof: CN, 200810024988.X. 2008-10-08. (in Chinese)储敏, 张莲芬, 朱书峰, 等. 人血清白蛋白与人粒细胞集落刺激因子突变体的融合蛋白及其制备: 中国, 200810024988.X. 2008-10-08.

[77] Xiong GL, Xing S, Li M, et al. Mobilization effects of recombinant human serum albumin-granulocyte colony-stimulating factor fusion protein on peripheral hematopoietic cells of Rhesus monkeys. J Int Pharm Res, 2011, 38(4):302-305. (in Chinese)熊国林, 邢爽, 李明, 等. 重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白单次给药对恒河猴造血细胞的动员作用. 国际药学研究杂志, 2011, 38(4):302-305.

[78] Ou HL,Yuan J, Ma YY, et al. Effect of HSA-G-CSF fusion protein on hematopoietic injury induced by 3.0 Gy 60Co γ-rays irradiation inrhesus. Med J Natl Defending Forces Northwest China, 2014, 35(3):225-228. (in Chinese)欧红玲, 原杰, 马盈盈, 等. 白蛋白融合型G-CSF对3.0 Gy 60Co γ射线照射恒河猴造血损伤的作用. 西北国防医学杂志, 2014, 35(3): 225-228.

[79] Guo LL, Xing S, Li M, et al. Therapeutic effect of recombinant human serum albumin-granulocyte colony-stimulating factor fusion protein on mice with acute radiation sickness. J Int Pharm Res, 2011, 38(4):288-292. (in Chinese)郭玲玲, 邢爽, 李明, 等. 重组人粒细胞集落刺激因子融合蛋白对急性放射病小鼠的治疗作用. 国际药学研究杂志, 2011, 38(4):288-292.

[80] Wang Y, Gong X, Chang SH, et al. A Pichia pastoris with α-1,6-mannosyltransferases deletion and its use in expression of HAS/GM-CSF chimera. Chin J Biotechnol, 2007, 23(5):907-914. (in Chinese)王越, 巩新, 唱韶红, 等. α-1,6-甘露糖转移酶基因敲除的毕赤酵母菌株构建及其用于融合蛋白HSA/GM-CSF表达的研究. 生物工程学报, 2007, 23(5):907-914.

[81] Yang XP, Liu B, Song M, et al. Construction of yeast Pichia pastoris to produce Man5GlcNAc2 mammalian mannose-type glycoprotein. Chin J Biotechnol, 2011, 27(1):108-117. (in Chinese)杨晓鹏, 刘波, 宋淼, 等. Man5GlcNAc2哺乳动物甘露糖型糖蛋白的毕赤酵母表达系统构建. 生物工程学报, 2011, 27(1):108-117.

[82] Wang Y. Construction and application of Pichia pastoris with α - 1,6 -mannose transferase gene defect. Shengyang: Shengyang Pharmaceutical University, 2007. (in Chinese)王越. α-1,6-甘露糖转移酶基因缺陷的毕赤酵母菌株的构建及应用.沈阳: 沈阳药科大学, 2007.

[83] Luo W, Lei JY, Jin J. Stability of IL2-HSA Solution. J Food Sci Biotechnol, 2013, 32(2):195-201. (in Chinese)罗文, 雷楗勇, 金坚. 重组人白细胞介素2-人血清白蛋白融合蛋白的液态稳定性. 食品与生物技术学报, 2013, 32(2):195-201.

[84] Guan B. Secretory expression of modified human serum albumin fusion protein in Pichia pastoris. Wuxi: Jiangnan University, 2014. (in Chinese)关波. 改良人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中分泌表达的研究.无锡: 江南大学, 2014.

[85] Wang S, Zheng ZY, Zhan XB, et al. Metabolic characteristics of recombinant Pichia pastoris producing a fusion protein-HSA-IL2. Food Fermentation Ind, 2008, 34(8):11-17. (in Chinese)王舒, 郑志永, 詹晓北, 等. 重组毕赤酵母表达人血清白蛋白-人白介素2融合蛋白过程的代谢特性. 食品与发酵工业, 2008, 34(8):11-17.

[86] Jin GZ. Expression and fermentation of human serum albumin/human interleukin-2 fusion protein. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)金光泽. 人血清白蛋白/人白介素-2融合蛋白的表达与发酵. 无锡:江南大学, 2008.

[87] Lu HH. Expression of human interleukin-2 and human serum albumin fusion protein in Chinese hamster ovary cells. Wuxi: Jiangnan University, 2015. (in Chinese)卢慧惠. 人白介素-2和人血清白蛋白融合蛋白在中国仓鼠卵巢细胞中的表达. 无锡: 江南大学, 2015.

[88] Chang SH, Gong X, Ma QJ, et al. Preparation of human serum albumin/interleukin-2 fusion protein//Proceedings of the 2nd China Biotechnology Industry Conference, 2008:17-18. (in Chinese)唱韶红, 巩新, 马清钧, 等.人血清白蛋白/白细胞介素 2融合蛋白研制//第二届中国生物产业大会论文集, 2008:17-18.

[89] Song L. Expression, purification and detection of recombinant human serum albumin-interleukin-2 (125ser) fusion protein in Pichia pastoris. Jinan: Shandong University, 2010. (in Chinese)宋磊. 重组人血白蛋白-白介素-2(125ser)融合蛋白在毕赤酵母中的表达、纯化和检测. 济南: 山东大学, 2010.

[90] Luo W. Development of rIL2-HSA fusion protein injection dosage form. Wuxi: Jiangnan University, 2012. (in Chinese)罗文. rIL2-HSA融合蛋白注射剂型的开发研究. 无锡: 江南大学, 2012.

[91] Li B. Fermentation and purification of human interleukin-2/human serum albumin fusion protein. Wuxi: Jiangnan University, 2009. (in Chinese)李波. 人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白的发酵与纯化研究. 无锡: 江南大学, 2009.

[92] Li B, Duan ZY, Zhang HM, et al. Purification and bioactivity of the fusion protein human interleukin-2/human serum albumin. J Food Sci Biotechnol, 2012, 31(3):289-293. (In Chinese)李波, 段作营, 张红梅, 等. 人白介素 2-人血清白蛋白融合蛋白的纯化及活性鉴定. 食品与生物技术学报, 2012, 31(3):289-293.

[93] Li HZ, Jin J, Guo ZF, et al. Preparation method of fusion protein of human interleukin-2 and human serum albumin and product: CN, 200610088289.2. 2006-12-27. (in Chinese)李华钟, 金坚, 郭泽峰, 等. 人白介素-2与人血清白蛋白的融合蛋白的制备方法及产品: 中国, 200610088289.2. 2006-12-27.

[94] Sun HB. Cloning and expression of human serum albumin/human interleukin-11 in Pichia pastoris. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)孙慧碧. 人血清白蛋白/人白介素-11在毕赤酵母中的克隆与表达.无锡: 江南大学, 2008.

[95] Wu Q, Wang Y, Su T, et al. Immunological screening for expression of fusion protein HSA-IL-11 in yeast Pichia pastoris. Indu Microbiol, 2011, 41(5):6-10. (in Chinese)吴琼, 王亚, 苏婷, 等. 免疫法筛选酵母HSA-IL-11融合蛋白转化子. 工业微生物, 2011, 41(5):6-10.

[96] Sun HB, Duan ZY, Zhang LF, et al. Construction and expression of the gene encoding human serum album/interleukin-11 fusion protein in Pichia pastoris//2008 China Microbiology Society Academic Annual Meeting Abstract, 2008:314. (in Chinese)孙慧碧, 段作营, 张莲芬, 等. 人血清白蛋白/人白介素-11融合蛋白在毕赤酵母中的表达//2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集, 2008:314.

[97] Huang Y, Hu L, Yang YQ, et al. Construction of IL-1Ra-HSA fusion protein and analysis of its bioactivity and pharmacokinetics. Acta Pharm Sinica, 2012, 47(9):1210-1218. (in Chinese)黄毅, 胡磊, 杨艳群, 等. IL-1Ra-HSA融合蛋白的构建、生物学活性和药动学分析. 药学学报, 2012, 47(9):1210-1218.

[98] Dai SF. Construction expression and activity identification of recombinant HAS/IL 1ra fusion protein. Hangzhou: Zhejiang University, 2008. (in Chinese)戴寿沣. 人白介素-1受体拮抗剂融合蛋白的构建、表达及生物学活性鉴定. 杭州: 浙江大学, 2008.

[99] Liu WH. Optimized fermentation of IL1Rα-HSA fusion protein expressed in pichia pastoris overexpression strain. Hangzhou: Zhejiang University, 2015. (in Chinese)刘文慧. IL1Rα-HSA融合蛋白高表达菌株发酵工艺的优化. 杭州:浙江大学, 2015.

[100] Chen SQ, Shen Q. Expression system of fusion protein from human serum albumin and interleukin-1 receptor antagonist: CN, 201210259705.6. 2013-07-31. (in Chinese)陈枢青, 沈其. 人血清白蛋白与白介素1受体拮抗剂融合蛋白的表达系统: 中国, 201210259705.6. 2013-07-31.

[101] Chen SQ, Dai SF, Chen J. Fusion protein for serum albumin and interleukin 1 receptor antagonist and uses thereof: CN, 200810060568.7. 2012-01-25. (in Chinese)陈枢青, 戴寿沣, 陈静. 血清白蛋白与白介素1受体拮抗剂的融合蛋白及应用: 中国, 200810060568.7. 2012-01-25.

[102] Huang Y. Pharmacodynamic and pharmacokinetic study of interleukin-1 receptor antagonist with human serum albumin. Wuhan: Hubei University, 2012. (in Chinese)黄毅. 融合人血清白蛋白的白介素 1受体拮抗剂的药效学和药代动力学研究. 武汉: 湖北大学, 2012.

[103] Zhou LP, Zhang LF, Lei JY, et al. Secretory expression of the fusion protein HSA-CP in Pichia Pastoris. Biotechnol Bull, 2008, (3):71-75, 80. (in Chinese)周利苹, 张莲芬, 雷楗勇. 人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达. 生物技术通报, 2008, (3):71-75, 80.

[104] Zhou LP. Construction of human serum albumin-4 peptide fusion protein Pichia pastoris engineering. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)周利苹. 表达人血清白蛋白-C肽融合蛋白毕赤酵母工程菌的构建.无锡: 江南大学, 2008.

[105] Kong JJ, Wang CC, Yang HL, et al. Fermentation conditions of optimization HSA-CP fusion protein expressed in Pichia pastoris. Chin J Bioprocess Eng, 2009, 7(5):25-28. (in Chinese)孔静静, 王长城, 杨海麟, 等. 产 HSA-CP融合蛋白毕赤酵母的发酵条件优化. 生物加工过程, 2009, 7(5):25-28.

[106] Li J, Zhang LF, Sun JM, et al. Secretive expression of the fusion protein HSA-CNP in Pichia pastoris. Chin J Biochem Pharm, 2007, 28(5):289-293. (in Chinese)李洁, 张莲芬, 孙钧铭, 等. 人 C-型利钠肽-血清白蛋白融合蛋白质的构建及在毕赤酵母中的分泌表达. 中国生化药物杂志, 2007, 28(5):289-293.

[107] Cai LJ, Zhu HX, Wang YM, et al. Preparation of human plasma protein fused long-effective interferon: CN, 200610023785.X. 2007-01-17. (in Chinese)蔡丽君, 朱化星, 王英明, 等. 一种人血清白蛋白融合长效干扰素制备工艺: 中国, 200610023785.X. 2007-01-17.

[108] Liu JY, Zhou MY, Xu C, et al. Recombinant human serum albumin-interferon alpha 1b fusion protein and preparation method thereof: CN, 201010189355.1. 2011-06-15. (in Chinese)刘金毅, 周敏毅, 徐晨, 等. 重组人血清白蛋白-干扰素α1b融合蛋白及其制备方法: 中国, 201010189355.1. 2011-06-15.

[109] Xia Y, Fan QL, Zou WY, et al. The stability study of recombinant human serum albumin-interferon-α-2b fusion protein. J Biol, 2008, 25(6):38-40. (in Chinese)夏毅, 范清林, 邹文艺, 等. 重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白的稳定性研究. 生物学杂志, 2008, 25(6):38-40.

[110] Qian K, Lei JY, Guan B, et al. Expression and quality control of the recombinant human serum albumin and interferon-alpha2b fusion protein in Pichia pastoris. J Food Sci Biotechnol, 2012, 31(12):1269-1274. (in Chinese)钱凯, 雷楗勇, 关波, 等. 人血清白蛋白和干扰素 α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制. 食品与生物技术学报, 2012, 31(12): 1269-1274.

[111] Xia Y. Purification and protein stability of recombinant human albumin interferon fusion protein (rHSA-IFNα-2b). Hefei: Anhui University, 2008. (in Chinese)夏毅. 重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白的纯化及蛋白稳定性研究. 合肥: 安徽大学, 2008.

[112] Huang YS. Study of recombinant human serum albumin-Interferon-α2b fusion protein. Hangzhou: Zhejiang University, 2007. (in Chinese)黄岩山. 重组人血清白蛋白-干扰素 α2b融合蛋白的研究. 杭州:浙江大学, 2007.

[113] Zhang W, Dai XP, Wang LY, et al. Evaluation of anti-HBV effect of recombinant human serum albumin-interferon α-2b fusion protein in vitro. Chin J Pharmacol Toxicol, 2014, 28(4):550-555. (in Chinese)张伟, 代晓朋, 王鲁燕, 等. 重组人血清白蛋白-干扰素 α-2b 融合蛋白体外抗乙型肝炎病毒活性评价. 中国药理学与毒理学杂志, 2014, 28(4):550-555.

[114] Kisker O, Hauser HPe, Celik I, et al. Albumin-fused anti-angiogenesis peptides: CA, 2475382:A. 2003-08-14.

[115] Ren M, Zhao HL, Xue C, et al. Expression of human serum albumin and interferon α2b fusion protein in the PichiaPink system. Lett Biotechnol, 2011, 22(6):818-822. (in Chinese)任敏, 赵洪亮, 薛冲, 等. 重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在PichiaPink系统中的表达. 生物技术通讯, 2011, 22(6):818-822.

[116] Huang PF. Study on the crystallization conditions of recombinant human serum albumin and its fusion protein from Pichia pastoris system. Wuxi: Jiangnan University, 2014. (in Chinese)黄鹏飞. 毕赤酵母系统来源的重组人血清白蛋白及其融合蛋白的结晶条件研究. 无锡: 江南大学, 2014.

[117] Xiao JG, Ruan ZX, Tang HL, et al. Purification of recombinant modified human serum albumin interferon 2b fusion protein. Pharm Biotechnol, 2012, 19(2):105-109. (in Chinese)肖建国, 阮振兴, 汤火龙, 等. 重组人血清白蛋白突变体干扰素2b融合蛋白的纯化. 药物生物技术, 2012, 19(2):105-109.

[118] Zhang WK, Fan QL, Zou WY, et al. Expression of HSA-IFNα-2b gene in Pichia pastoris. China Biotechnol, 2005, 25(12):45-49. (in Chinese)张伍魁, 范清林, 邹文艺, 等. 白蛋白融合α-2b干扰素在毕赤酵母中的表达. 中国生物工程杂志, 2005, 25(12):45-49.

[119] Liu L. Expression of albumin interferon α-2b in Pichia pastoris and its biological activity. Hefei: Anhui University, 2012. (in Chinese)刘磊. 不同接头的白蛋白干扰素α-2b在毕赤酵母中表达量及生物学活性研究. 合肥: 安徽大学, 2012.

[120] Wang TY, Yang ZY, Ma GC, et al. Production method of recombinant fusion protein of human serum albumin-interferon alpha 2b: CN, 200610049070.1. 2008-04-30. (in Chinese)王同映, 杨志愉, 马国昌, 等. 重组人血清白蛋白-干扰素 α2b 融合蛋白的生产方法: 中国, 200610049070.1. 2008-04-30.

[121] Zhang WK. Expression and stability of recombinant human albumin fusion interferon in Pichia pastoris. Hefei: Anhui University, 2006. (in Chinese)张伍魁. 重组人白蛋白融合干扰素在毕赤酵母中的表达及稳定性研究. 合肥: 安徽大学, 2006.

[122] Liu N, Liu HJ, Song L. Method for producing recombinant human serum albumin-interferon alpha 2b: CN, 201010103454.3. 2013-08-07 (in Chinese)刘宁, 刘红军, 宋磊. 一种重组人血白蛋白-干扰素 α2b的生产方法: 中国, 201010103454.3. 2013-08-07.

[123] Sun B. Study on the potency of novel human serum albumin and interferon α2b fusion protein. Shenyang: Shengyang Pharamaceutical University, 2009. (in Chinese)孙博. 新型人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白的成药性研究. 沈阳: 沈阳药科大学, 2009.

[124] Jin J, Lei JY, Yang JL, et al. Method for preparing fusion protein contg. human interferon-beta and human seralbumin and its products: CN, 200610038790.8. 2006-09-13. (in Chinese)金坚, 雷楗勇, 杨健良, 等. 人 β干扰素与人血清白蛋白的融合蛋白的制备方法及产品: 中国, 200610038790.8. 2006-09-13.

[125] Lei JY. Construction of genetic engineering strain expressing fusion protein IFNβ-HSA. Wuxi: Jiangnan University, 2006. (in Chinese)雷楗勇. 表达β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白工程菌的构建. 无锡: 江南大学, 2006.

[126] Zhang Q. Construction of β-interferon and human serum albumin fusion protein engineering bacteria. Wuxi: Jiangnan University, 2009. (in Chinese)张琦. 人 β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白的高产菌株筛选及制备工艺. 无锡: 江南大学, 2009.

[127] Zhang Q, Lei JY, Ding YD, et al. Expression and purification of IFNβ-HSA fusion protein in Pichia pastoris. Chin J Biotechnol, 2009, 25(11):1746-1752. (in Chinese)张琦, 雷楗勇, 丁月迪, 等. 人 β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白的表达及纯化. 生物工程学报, 2009, 25(11):1746-1752.

[128] He XF, Zhang L, Shi GY, et al. Optimization of high density fermentation of Pichia pastoris β-interferon-serum albumin fusion protein engineering bacteria//The 4th National Conference on Fermentation Engineering Symposium (the first volume), 2006:320-325. (in Chinese)何向飞, 张梁, 石贵阳, 等. 毕赤酵母 β干扰素—血清白蛋白融合蛋白工程菌高密度发酵的优化培养//第四届全国发酵工程学术研讨会论文集(上册), 2006:320-325.

[129] Zhang LC, Zhang LF, Lei JY, et al. Development and application of double antibodies sandwich ELISA method for quantitative detection of IFNβ-HAS. Biotechnol Bull, 2009, (1):121-125 (in Chinese)张立操, 张莲芬, 雷楗勇, 等. 双抗体夹心 ELISA 定量检测IFNβ-HSA 融合蛋白方法的建立. 生物技术通报, 2009, (1):121-125.

[130] Qu L, Lei JY, Zhang Q, et al. Effect of coexpressing protein disulfide isomerase on expression of IFNβ-HAS fusion protein in Pichia pastoris. Chin J Biol, 2010, 23(4):346-349, 353. (in Chinese)屈琳, 雷楗勇, 张琦, 等. 共表达蛋白二硫键异构酶对 IFNβ-HSA融合蛋白在毕赤酵母中表达的影响. 中国生物制品学杂志, 2010, 23(4):346-349, 353.

[131] Zhang LC. Establishment of quantitative detection of IFNβ-HSA fusion protein by double antibody sandwich ELISA. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)张立操. 双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白分析方法的建立. 无锡: 江南大学, 2008.

[132] Zhang HB, Dou WF, Xu HY, et al. A carbon-controlling strategy to enhancement of the expression for human IFNβ-HSA fusion protein with Pichia pastoris. Chin J Process Eng, 2007, 7(6):1181-1186. (in Chinese)张宏斌, 窦文芳, 许泓瑜, 等. 提高重组毕赤酵母表达hIFNβ-HSA的碳源控制策略. 过程工程学报, 2007, 7(6):1181-1186.

[133] Rosen CA, Bell A, Moore PA, et al. Albumin fusion proteins: CA, 2703943:A. 2009-5-7.

[134] Chen FX. Improved research of fusion protein HSA/IFNβ in Pichia pastoris. Wuxi: Jiangman University, 2014. (in Chinese)陈凤祥. 融合蛋白 HSA/IFNβ在毕赤酵母中分泌表达改良的研究.无锡: 江南大学, 2014.

[135] Li ZQ, Qiu S, Lei JY, et al. Isolation, purification and development of method for quality control of recombinant human serum albumin-interferon β fusion protein. Chin J Biol, 2012, 25(10):1325-1328. (in Chinese)李芝芹, 邱爽, 雷楗勇, 等. 重组人血清白蛋白-干扰素β融合蛋白的分离纯化及质控方法的建立. 中国生物制品学杂志, 2012, 25(10):1325-1328.

[136] Tian S, Yao WB, Zhou MY, et al. Secretory expression and purification of HAS-NIFN fusion protein in Pichia pastoris. China Biotechnol, 2010, 30(6):34-37. (in Chinese)田硕, 姚文兵, 周敏毅, 等. 新型集成干扰素-人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达和纯化. 中国生物工程杂志, 2010, 30(6):34-37.

[137] Rosenstock J, Reusch J, Bush M, et al. Potential of albiglutide, a long-acting GLP-1 receptor agonist, in type 2 diabetes: a randomized controlled trial exploring weekly, biweekly, and monthly dosing. Diabetes Care, 2009, 32(10):1880-1886.

[138] Chen QL. Purification and purity identification of recombinant protein rh(GLP-1A2G)2-HSA. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)陈其亮. 重组人胰高糖素样肽-1突变体的串联体与人血清白蛋白融合蛋白的纯化及纯度鉴定. 无锡: 江南大学, 2008.

[139] Wang H, Dou WF, Zhang XM, et al. High-level expression of fusion protein GGH in Pichia pastoris GS115 by constructing a double plasmid co-expression system. Chin J Biotechnol, 2011, 27(7):983-989. (in Chinese)王慧, 窦文芳, 张晓梅, 等. 应用双质粒共表达体系提高融合蛋白GGH在毕赤酵母GS115中的表达量. 生物工程学报, 2011, 27(7): 983-989.

[140] Wang H. High-level expression of fusion protein GGH in Pichia astoris GS115 by constructing a double plasmid co-expression system. Wuxi: Jiangnan University, 2011. (in Chinese)王慧. 应用双质粒体系提高融合蛋白GGH在毕赤酵母GS115中表达量的初步研究. 无锡: 江南大学, 2011.

[141] Feng JS, Dou WF, Zhang XM, et al. Expression, purification and bioactivity of fusion protein GGH analogue with N-terminal extension. Biotechnol Bull, 2013, (9):124-129. (in Chinese)冯均尚, 窦文芳, 张晓梅, 等. 融合蛋白 GGH N端延长类似物的克隆表达、纯化及活性研究. 生物技术通报, 2013, (9):124-129.

[142] Feng JS. Expression, purification and preliminary bioactivity of fusion protein GGH analogues with N-terminal extension. Wuxi: Jiangnan University, 2013. (in Chinese)冯均尚. 融合蛋白GGH氮端延长类似物的克隆表达、分离纯化及初步活性评价. 无锡: 江南大学, 2013.

[143] Li XL, Dou WF, Zhang XM, et al. Purification and identification of the activity of fusion protein (GLP-1A2G)2-HSA. Pharm Biotechnol, 2010, 17(6):487-492. (in Chinese)李现丽, 窦文芳, 张晓梅, 等. 融合蛋白(GLP-1A2G)2-HSA的分离纯化及其活性评价. 药物生物技术, 2010, 17(6):487-492.

[144] Lu QP, Xu ZH, Shi JS, et al. The disruption of STE13 gene in Pichia pastoris improves the expression and bioactivity of GGH. China Biotechnol, 2013, 33(4):28-33. (in Chinese)路庆鹏, 许正宏, 史劲松, 等. 毕赤酵母 STE13基因敲除对 GGH表达及其生物活性的影响. 中国生物工程杂志, 2013, 33(4):28-33.

[145] Yang T. Recombinant protein GGH is highly expressed and purified in Pichia pastoris. Wuxi: Jiangnan University, 2009. (in Chinese)杨涛. 重组蛋白 GGH在毕赤酵母中高效表达及纯化. 无锡: 江南大学, 2009.

[146] Qian K, Zhang JJ, Wu SP, et al. Constituted expression and purification of glucagon-like peptide-1 analogue in Pichia pastoris using GAP promoter. China Biotechnol, 2015, 35(5):66-73. (in Chinese)钱凯, 张晶晶, 吴素平, 等. 利用GAP启动子在毕赤酵母中表达与纯化GLP-1类似物. 中国生物工程杂志, 2015, 35(5):66-73.

[147] Long J. Expressing of Gly-Hglp-1-HSA fusion protein in Pichia pastoris. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)龙娟. 人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白在毕赤酵母中的融合表达. 无锡: 江南大学, 2008.

[148] Chen JQ. Study on long-acting analogues of glucagon-1 like peptide. Tianjin: Nankai University, 2007. (in Chinese)陈家琪. 胰高血糖素样肽-1长效类似物的研究. 天津: 南开大学, 2007.

[149] Sun CY, Li Y, Li BH, et al. Purfication of GLP-1/albumin expressed in Pichia pastoris. J Dalian Nationalities Univ, 2007, 9(5):76-78. (in Chinese)孙纯义, 李元, 李别虎, 等. 在毕赤酵母菌中表达的hGlp-1-白蛋白融合蛋白的纯化. 大连民族学院学报, 2007, 9(5):76-78.

[150] Xia S. A preliminary study on the fusion protein of human glucagon -like peptide - 1 and human serum albumin. Hefei: Anhui University. 2015. (in Chinese)夏姗. 可解离的人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白的初步研究. 合肥: 安徽大学学位论文, 2015.

[151] Dou WF. Construction, expression, purification and preliminary pharmacodynamics and pharmacokinetics of long-acting fusion protein GGH. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)窦文芳. 长效融合蛋白GGH的构建、表达、纯化及其初步药效学和药代动力学. 无锡: 江南大学, 2008.

[152] Dou WF, Zhang LF, Lei JY, et al. Expression of human glucagon-like peotide-1 and human glucagon-like peotide-1 mutant gene in BL21. Biotechnol Bull, 2008, (6):139-143. (in Chinese)窦文芳, 张莲芬, 雷楗勇, 等. 人胰高糖素样肽-1及其突变体在大肠杆菌 BL21中的表达与生物活性研究. 生物技术通报, 2008, (6):139-143.

[153] Kong JJ. Fermentation and extraction of HSA-CP fusion protein from recombinant Pichia pastoris. Wuxi: Jiangnan University, 2009. (in Chinese)孔静静. 重组毕赤酵母产 HSA-CP融合蛋白的发酵与提取. 无锡:江南大学, 2009.

[154] Wang J, Shen W, Rao ZM, et al. Secretary expression of the fusion protein PTH-HSA in Pichia pastoris. China Biotechnol, 2007, 27(2): 14-18. (in Chinese)王俊, 沈微, 饶志明, 等. 人甲状旁腺激素-血清白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达. 中国生物工程杂志, 2007, 27(2):14-18.

[155] Ballence DJ. Recombinant fusion proteins to growth hormone and serum albumin: GB, 9603164:W. 1997-07-10.

[156] Zhang M, Wu MC, Jin J. Construction and expression of recombinant fusion protein hPTH (1-34)a'a-HSA. Biotechnol Bull, 2009, (7):117-121. (in Chinese)张梅, 邬敏辰, 金坚. 人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的构建及表达. 生物技术通报, 2009(7):117-121.

[157] Chen J, Sun HY, Yang Y, et al. Construction, expression and characterization of recombinant fusion protein HSA-PTH(1-34) in pichia pastoris. J Zhejiang Univ (Med Sci), 2008, 37(2):126-133. (in Chinese)陈静, 孙红颖, 杨颖, 等. 人血清白蛋白与 PTH(1-34)融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定. 浙江大学学报(医学版), 2008, 37(2):126-133.

[158] Chen J, Chen SQ. Cloning, expression and identification of serum albumin and PTH (1-34) fusion protein//The proceedings of the National Symposium on Biochemical and Biotechnology Drugs in 2006, 2006:22-27. (in Chinese)陈静, 陈枢青. 血清白蛋白与 PTH(1-34)融合蛋白的克隆、表达及鉴定//2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集, 2006: 22-27.

[159] Wu M. Studies related to common issues and specific issues in the human serum albumin fusion platform. Hangzhou: Zhejiang University, 2013. (in Chinese)吴敏. 人血清白蛋白融合技术平台的共性与个性问题研究. 杭州:浙江大学, 2013.

[160] Wang YJ. Preparation, purification and activity of albumin modified human parathyroid hormone. Wuxi: Jiangnan University, 2008. (in Chinese)王一君. 白蛋白修饰的人甲状旁腺激素的制备、纯化及活性研究.无锡: 江南大学, 2008.

[161] Wang YJ, Chen Y, Zhang LF, et al. Expression, purification and activity of a fusion protein PTH-HSA in Pichia pastoris. Pharm Biotechnol, 2009, 16(1):8-13. (in Chinese)王一君, 陈蕴, 张莲芬, 等. 白蛋白修饰的人甲状旁腺激素的表达、纯化及活性鉴定. 药物生物技术, 2009, 16(1):8-13.

[162] Qiu S. Design and pharmacodynamics evaluation of human parathyroid hormone analogues. Wuxi: Jiangnan University, 2012. (in Chinese)邱爽. 人甲状旁腺激素类似物的设计与药效学评价. 无锡: 江南大学, 2012.

[163] Li JY, Peng L, Tang CD, et al. Expression of intact PTH (1-34)-HSA fusion protein in Pichia pastoris and activity of expressed product. Chin J Biologicals, 2013, 26(4):515-520. (in Chinese)李俊毅, 彭林, 唐存多, 等. 全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性. 中国生物制品学杂志, 2013, 26(4):515-520.

[164] Zhang M. Eukaryotic expression and activity of fusion protein hPTH (1-34)_(ab) -HSA. Wuxi: Jiannan University, 2009. (in Chinese)张梅. 融合蛋白hPTH(1-34)_(ab)-HSA的真核表达及活性初步评价.无锡: 江南大学, 2009.

[165] Liu QX, Zhuge B, Fang HY, et al. Recombinant hPTH(1-34)ab-HSA fusion protein expressed steadily and integrally in saccharomyces cerevisiae. China Biotechnol, 2013, 33(6):74-78. (in Chinese)刘青霞, 诸葛斌, 方慧英, 等. 利用酿酒酵母稳定完整表达融合蛋白hPTH(1-34)ab-HSA. 中国生物工程杂志, 2013, 33(6):74-78.

[166] Zhuge B, Liu QX, Fang HY, et al. Method for stably expressing recombined human serum albumin and human parathyroid hormone (1-34)ab diad fusion protein by using saccharomyces cerevisiae: CN, 201210479073.4. 2012-11-23. (in Chinese)诸葛斌, 刘青霞, 方慧英, 等. 利用酿酒酵母稳定表达重组人血清白蛋白-人甲状旁腺激素(1-34)ab二联体融合蛋白: 中国, 201210479073.4. 2012-11-23.

[167] Liu QX. Expression of recombinant human albumin-parathyroidhormone (1-34)_(ab) dendritic protein using Saccharomyces cerevisiae. Wuxi: Jiangnan University, 2013.(in Chinese)刘青霞. 利用酿酒酵母表达重组人白蛋白-甲状旁腺激素(1-34)_(ab)二联体蛋白. 无锡: 江南大学, 2013.

[168] Chen J. Expression, purification and identification of human parathyroid hormone (1-34) and serum albumin and human parathyroid hormone (1-34) fusion protein. Hangzhou: Zhejiang University, 2005.(in Chinese)陈静. 人甲状旁腺素(1-34)及血清白蛋白与人甲状旁腺素(1-34)融合蛋白的表达、纯化与鉴定. 杭州: 浙江大学, 2005.

[169] Chen SQ, Chen J. Man's serum albumin with man's parathormone (1-34) fusion protein and its application: CN, 200410066459.8. 2006-09-13. (in Chinese)陈枢青, 陈静. 人血清白蛋白与人甲状旁腺激素(1-34)融合蛋白及用途: 中国, 200410066459.8. 2006-09-13.

[170] Wang N, Zhao HL, Liu ZM, et al. Cloning and expressing of HSA-GHRH fusion protein. Lette Biotechnol, 2007, 18(4):574-577. (in Chinese)王楠, 赵洪亮, 刘志敏, 等. 生长激素释放激素和人血清白蛋白融合蛋白的克隆表达. 生物技术通讯, 2007,18(4):574-577.

[171] Wang N. Cloning, expression and activity identification of growth hormone-releasing hormone-albumin fusion protein. Shenyang: Shengyang Pharmaceutical University, 2005.(in Chinese)王楠. 生长激素释放激素-白蛋白融合蛋白的克隆表达和活性鉴定.沈阳: 沈阳药科大学, 2005.

[172] Chen SQ, Wang FR, Wu M, et al. Fusion protein of human serum albumin and lipolysis structural domain of human growth hormone: CN, 201210328039.7. 2012-12-19. (in Chinese)陈枢青, 王芙蓉, 吴敏, 等. 人血清白蛋白与人生长激素脂肪分解结构域的融合蛋白: 中国, 201210328039.7. 2012-12-19.

[173] Fan J, Ding YD, Yang RL, et al. Expression and bioactivity analysis of Somatostatin-HSA fusion proteins with different tandem repeat genes. Biotechnology, 2014, 24(4):27-31. (in Chinese)范俊, 丁月娣, 杨润琳, 等. 融合蛋白Somatostatin-HSA不同串联体形式的表达及活性分析. 生物技术, 2014, 24(4):27-31.

[174] Liu JL, Liu B, Song SJ, et al. Expression of the rhOPG179-HSA fusion protein in Pichia pastoris. Lette Biotechnol, 2011, 22(1):15-18, 23. (in Chinese)刘俊丽, 刘波, 宋淑军, 等. 重组人骨保护素片段 OPG179与人血清白蛋白在毕赤酵母中的融合表达. 生物技术通讯, 2011, 22(1): 15-18, 23.

[175] Liu JL, Zhang JZ, Lu HJ, et al. Construction of Pichia pastoris yeast strain with high-efficient expression of HSA-OPG. Bull Acad Milit Med Scie, 2009, 33(4):318-321. (in Chinese)刘俊丽, 张建中, 路浩军, 等. 分泌表达 rhOPG-HSA融合蛋白的毕赤酵母菌株的构建. 军事医学科学院院刊, 2009, 33(4):318-321.

[176] Ding YD, Lei JY, Chen Y, et al. Secretory expression of (BNP)2-HSA fusion protein in Pichia pastoris and activity of expressed product. Chin J Biologicals, 2009, 22(3):226-229. (in Chinese)丁月娣, 雷楗勇, 陈蕴, 等. 人脑钠肽与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及其活性. 中国生物制品学杂志, 2009, 22(3):226-229.

[177] Ding YD. Design, preparation and bioactivity analysis of recombinant human brain natriuretic peptide (rhBNP). Wuxi: Jiangnan University, 2009. (in Chinese)丁月娣. 重组人脑钠肽(rhBNP)新药物分子的设计、制备及生物活性分析. 无锡: 江南大学, 2009.

[178] Zhan J. Secretory expression of HSA-GS-sTNFR1 and sTNFR1-HSA in yeast system by long-acting recombinant fusion protein drugs. Shanghai: Fudan University, 2010. (in Chinese)詹嘉. 长效重组融合蛋白药物 HSA-GS-sTNFR1和 sTNFR1-HAS在酵母系统中的分泌表达研究. 上海: 复旦大学, 2010.

[179] Chen Y. Secretory expression of HSA-GS-sTNFR2 in yeast system. Shanghai: Fudan University, 2007. (in Chinese)陈莹. 长效融合蛋白药物 HSA-GS-sTNFR2在酵母系统中的分泌表达研究. 上海: 复旦大学, 2007.

[180] Liu N. Studies on expression and purification of HSA/Tα1 in Pichia Pastoris. Changchun: Jilin University, 2009. (in Chinese)刘楠. 重组HSA/Tα1融合蛋白在毕赤酵母表达及纯化研究. 长春:吉林大学, 2009.

[181] Ma JY, Zhang CC, Qiu LP, et al. High cell density fermentation and purification of recombinant Pichia pastoris Tα1-HSA genetically engineered bacteria. Chin J Biochem Pharmacetics, 2012, 33(6):720-724. (in Chinese)马娇颖, 章成昌, 仇黎鹏, 等. 重组毕赤酵母胸腺肽 α1-人血清白蛋白基因工程菌高密度发酵及分离纯化. 中国生化药物杂志, 2012, 33(6):720-724.

[182] Zhang XG, Wang J, Yan LY, et al. Homology modeling of recombinant human serum albumin-thymosin fusion proteins. Pharm Bioechnol, 2008, 15(6):444-448. (in Chinese)张新国, 王婧, 闫璐颖, 等. 重组人血清白蛋白-胸腺肽融合蛋白的分子设计及活性测定. 药物生物技术, 2008, 15(6):444-448.

[183] Tian D. Cloning of HSA-TP5 fusion protein cDNA and its expression in Pichia Pastoris. Changchun: Jilin University, 2006. (in Chinese)田丹. HSA-TP5融合蛋白的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达.长春: 吉林大学, 2006.

[184] Mou XP, Wei AH, Shen MH, et al. Secretory expression of HSA/M2e fusion protein in pichia pastoris. Chin J Gerontol, 2010, 30(5):617-619. (in Chinese)牟旭鹏, 韦安慧, 申茉函, 等. 甲型流感病毒M2e与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达. 中国老年学杂志, 2010, 30(5): 617-619.

[185] Yang GG, Ma CK, Shi SH, et al. Efficent expression and biological activity detection of fusion protein of onconase with human serum albumin in Pichia pastoris. Biotechnol Bull, 2015, 31(10):222-229. (in Chinese)杨刚刚, 马诚凯, 史世会, 等. 豹蛙抗瘤酶与人血清白蛋白融合蛋白的毕赤酵母高效表达与活性测定. 生物技术通报, 2015, 31(10): 222-229.

[186] Yang GG, Wang Z, Bai HJ, et al. Effects of different carrier-host bacteria on recombinant protein expression. J Henan Univ Sci Technol (Nat Sci), 2016, 37(2):78-81, 87. (in Chinese)杨刚刚, 王泽, 白海静, 等. 不同载体-宿主菌组合对重组蛋白表达量的影响. 河南科技大学学报(自然科学版), 2016, 37(2):78-81, 87.

[187] Hou Y. Anti-tumor and anti-angiogenesis effects of rhddADAM15. Wuxi: Jiangnan University, 2014. (in Chinese)侯颖. rhddADAM15抗肿瘤及抗血管新生作用研究. 无锡: 江南大学, 2014.

[188] Hou Y, Chu M, Du FF, et al. Expression and activity of human serum albumin-recombinant human disintegrin domain of ADAM15 fusion protein. Chin J Biologicals, 2013, 26(11):1551-1555. (in Chinese)侯颖, 储敏, 杜芳芳, 等. 重组人ADAM15去整合素区域蛋白与人血清白蛋白融合蛋白的表达及其活性. 中国生物制品学杂志, 2013, 26(11):1551-1555.

[189] Liu CW, Chen DY, Hu SW, et al. Construction of human mitochondrial ALB fuse protein vector and its expretion and intracellular Localization. J Guangxi Med Univ, 2009, 26(1):16-18. (in Chinese)刘承武, 陈登宇, 胡水旺, 等. 白蛋白融合蛋白表达载体的构建及其在细胞中的表达和定位. 广西医科大学学报, 2009, 26(1):16-18.

[190] Zhao YY. Expression and identification of endostatin-human serum albumin fusion protein. Beijng: Academy of Military Medical Sciences, 2009. (in Chinese)赵媛媛. 内皮抑素-人血清白蛋白融合蛋白的表达及鉴定. 北京:中国人民解放军军事医学科学院, 2009.

[191] Zhao YY, Lv MM, Yang M, et al. Construction and expression of the endostatin-HSA fusion protein in Pichia pastoris//National Symposium on Blood Products Academic Exchange, 2009:93-97. (in Chinese)赵媛媛, 吕茂民, 杨梅, 等. 人内皮抑素和人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达//全国血液制品学术交流会论文集, 2009: 93-97.

[192] Yang M. Expression and identification of endostation fusion protein in Pichia pastoris. Yangzhou: Yangzhou University, 2007. (in Chinese)杨梅. 内皮抑素融合蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定. 扬州: 扬州大学, 2007.

[193] Li M. The expression of long-acting endostatin in Pichia pastoris GS115 and the expression, purification and activity of heparinase. Nanjing: Nanjing University, 2015. (in Chinese)李明. 长效内皮抑素在毕赤酵母GS115中的表达和肝素酶的表达、纯化、活性检测. 南京: 南京大学, 2015.

[194] Zhao YY, Lv MM, Yang M, et al. Construction and expression of the endostatin-HSA fusion protein in Pichia pastoris. Chin J Blood Transfus, 2010, 23(4):255-258. (in Chinese)赵媛媛, 吕茂民, 杨梅, 等. 人内皮抑素-白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定. 中国输血杂志, 2010, 23(4):255-258.

[195] Jin JD, Yu AP, Dong CN, et al. Construction of human serum albumin and hirudin fusion protein expression vector, expression in Pichia pastoris and antithrombotic effects//Summary of the 10th National Conference on Experimental Hematology, 2005:167. (in Chinese)靳继德, 于爱萍, 董春娜, 等. 人血清白蛋白和水蛭素融合蛋白表达载体的构建、在毕赤酵母中的表达和抗栓作用//第 10届全国实验血液学会议论文摘要汇编, 2005:167.

[196] Zhang W, Yu CX, Yang JL, et al. Expression and characterization of recombinant Sj23HD-HSA fusion protein in Saccharomyces cerevisiae. Chin J Schistosomiasis Control, 2011, 23(6):653-658. (in Chinese)张伟, 余传信, 杨建良, 等. 酿酒酵母表达Sj23HD-HSA融合蛋白与免疫反应性分析. 中国血吸虫病防治杂志, 2011, 23(6):653-658.

[197] Zhao HL, Xue C, Xiong XH, et al. Purification and activity assay of HSA-AX15(R13K) fusion protein expressed in Pichia pastoris. Chin J Biotechnol, 2005, 21(2):254-258. (in Chinese)赵洪亮, 薛冲, 熊向华, 等. 人血清白蛋白-睫状神经营养因子突变体融合蛋白基因在毕赤酵母中的表达及表达产物的纯化和活性鉴定. 生物工程学报, 2005, 21(2):254-258.

[198] Li K. Construction, expression and activity identification of PHLD fusion protein in Pichia pastoris. Lanzhou: Lanzhou University of Technology, 2012. (in Chinese)李坤. PHLD融合蛋白在毕赤酵母中的构建、表达及活性鉴定. 兰州: 兰州理工大学, 2012.

[199] Zeng LE, Huang J, Bai HQ, et al. Construction, purification and stability of the fusion recombinant protein Klenow-HSA. J Peking Univ (Health Sci), 2002, 34(6):684-687. (in Chinese)曾令娥, 黄晶, 白惠卿, 等. 重组 Klenow-HSA融合蛋白的构建、纯化及其稳定性. 北京大学学报(医学版), 2002, 34(6):684-687.

[200] Li H. Development and preliminary pharmacodynamics study of recombinant fusion protein LH0524 with anti-acute hepatocellular necrosis function// Chinese Medical Association, the seventh national digestive disease academic conference papers compilation (Volume II), 2007:987. (in Chinese)李海. 一个具有抗急性肝细胞坏死功能的重组融合蛋白LH0524的研制及初步药效学研究//中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册), 2007:987.

[201] Cui YS. Design and preliminary evaluation of novel vasoactive peptide molecules. Wuxi: Jiangnan University, 2013. (in Chinese)崔燕生. 新型血管钠肽分子的设计和初步活性评价. 无锡: 江南大学, 2013.

[202] Ru Q. Construction of engineered fusion protein consisting of cell penetrating peptide(Arg)9 and lidamycin and the study of its antitumor activity. Beijing: China Union Medical College, 2010. (in Chinese)茹琴. 细胞穿透肽(Arg)9与力达霉素强化融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性研究. 北京: 中国协和医科大学学位论文, 2010.

[203] Ballance DJ. Fusion proteins contanting N-terminal fragments of human serum albumin: GB, GB1990000650. 1990-11-15.

[204] Gong SQ. Prokaryotic expression, purfication and preliminary identification of high loading recombination protein G. Changchun: Jilin University, 2010. (in Chinese)宫世强. 高载量重组蛋白 G的原核表达、纯化及初步鉴定. 长春:吉林大学, 2010.

[205] Dai HY. Expression of VEGF165 and VEGF165b analogues and preliminary evaluation of their function. Wuxi: Jiangnan University, 2013. (in Chinese)戴惠云. VEGF165与VEGF165b的类似物表达及其功能初步评价.无锡: 江南大学, 2013.

[206] Chen XJ, Liang L, Xue F, et al. Construction, expression and functional detection of fusion gene of CD80 extracellular region and anti-human CD33 scFv. Chin J Cell Mol Immunol, 2014, 30(2):179-183. (in Chinese)陈小军, 梁璐, 薛峰, 等. 抗人CD33单链抗体与CD80胞外区融合基因的构建、表达及其生物活性检测. 细胞与分子免疫学杂志, 2014, 30(2):179-183.

[207] Fan HY, Meng FP, Qi D, et al. Construction and expression of a fusion protein of scFv against human acetylcholine receptor-human serum albumin in E.coli. Chin J Cell Mol Immunol, 2006, 22(4):507-509. (in Chinese)范华英, 孟繁平, 齐栋, 等. 抗人乙酰胆碱受体 scFv-人血清白蛋白融合蛋白的构建及在大肠杆菌中的表达. 细胞与分子免疫学杂志, 2006, 22(4):507-509.

[208] Fan HY. Construction and expression of the fusion gene of anti-acetylcholine receptor single chain variable fragment and human serum albumin in myasthenia gravis. Yanji: Yanbian University, 2004. (in Chinese)范华英. 重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体与人血清白蛋白融合基因的构建和表达. 延吉: 延边大学, 2004.

[209] Li FF. Preparation of single chain antibody fusion human serum albumin and its inhibitory effect on serum of patients with myasthenia gravis. Yanji: Yanbian University, 2014. (in Chinese)李芳芳. 单链抗体融合人血清白蛋白的制备及对重症肌无力患者血清的抑制作用. 延吉: 延边大学, 2014.

[210] Li FF. Eukaryotic expression and functional characterization of fusion protein of single chain variable fragment 637 and human serum albumin. Yanji: Yanbian University, 2007. (in Chinese)李芳芳. 单链抗体 637与人血清白蛋白融合蛋白的真核表达及功能鉴定. 延吉: 延边大学, 2007.

[211] Wei J, Li Q, Fan HY, et al. Construction of eukaryotic expression vector of a fusion gene of single chain variable fragment directed against acetylcholine receptor with human serum albumin. J Med Sci Yanbian Univ, 2008, 31(3):157-160. (in Chinese)魏晶, 李强, 范华英, 等. 抗乙酰胆碱受体单链抗体与人血清白蛋白融合基因真核表达载体的构建. 延边大学医学学报, 2008, 31(3): 157-160.

[212] Wei J. Construction and expression of eukaryotic expression vector of a fusion gene of single chain variable fragment directed against acetylcholine receptor with human serum albumin. Yanji: Yanbian University, 2006. (in Chinese)魏晶. 抗乙酰胆碱受体单链抗体与人血清白蛋白融合基因真核表达载体的构建与表达. 延吉: 延边大学, 2006.

[213] Wen AP. Inhibitory effect of single chain antibody fusion human serum albumin on myasthenia gravis pathogenic anti-acetylcholine receptor antibody. Yanji: Yanbian University, 2008. (in Chinese)温爱萍. 单链抗体融合人血白蛋白对重症肌无力致病性抗乙酰胆碱受体抗体的抑制. 延吉: 延边大学, 2008.

[214] Li FF, Meng FP, Sun CY, et al. Expression and specificity of yeast with myasthenia gravis single - chain antibody fusion protein. Chin J Cell Mol Immunol, 2009, 25(8):735-737. (in Chinese)李芳芳, 孟繁平, 孙昌元, 等. 重症肌无力单链抗体融合蛋白的酵母菌表达及特异性鉴定. 细胞与分子免疫学杂志, 2009, 25(8):735-737.

[215] Wen AP, Meng FP, Li FF, et al. Inhibition of sera from patients with myasthenia gravis to the binding of acetylcholine receptor by a fusion protein of antibody fragment and albumin. Chin J Immunol, 2009, 25(10):940-942. (in Chinese)

10.3969/j.issn.1673-713X.2017.03.010

天津市科学技术委员会科技支撑计划（07ZCKFSH02400、11ZCKFSY00200）；国家“重大新药创制”科技重大专项（2009ZX 09103-706、2013ZX09101024）；天津市科学技术委员会抗癌重大专项（12ZCDZSY00300）

300457 天津溥瀛生物技术有限公司；100026 北京，中美福源生物技术（北京）股份有限公司

于在林，Email：yuzailin88@sina.com；富岩，Email：yanfu88@126.com

2017-03-17