反相高效液相色谱法测定精制冠心颗粒中7种有效成分的含量

高苏亚，张 韫，王 黎，刘小丽，唐一梅，韩汾汾

（1.西安医学院药学院，西安710021； 2.长安大学环境科学与工程学院，西安710054）

反相高效液相色谱法测定精制冠心颗粒中7种有效成分的含量

高苏亚1，张 韫1，王 黎1，刘小丽2，唐一梅1，韩汾汾1

（1.西安医学院药学院，西安710021； 2.长安大学环境科学与工程学院，西安710054）

精制冠心颗粒是由丹参、川芎、赤芍、红花、降香等5味中药材组成的复方制剂，具有活血化瘀，通脉行气等功效［1－2］。方中君药丹参的主要有效成分有丹参素、丹酚酸和原儿茶醛等［3－5］，臣药赤芍的主要成分为芍药苷，川芎的主要成分为阿魏酸、川芎嗪等，红花的主要成分为羟基红花黄色素A［6－7］。有关冠心颗粒中有效成分的含量测定已有报道［8］，但其中7种有效成分的同时测定鲜见报道。本工作采用反相高效液相色谱法（RP－HPLC）同时测定精制冠心颗粒中7种有效成分的含量，以期对其质量控制提供参考。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

DIONEX型高效液相色谱仪，762型紫外－可见分光光度计，MD100－Z型微量电子天平，SB－5200DT型超声波清洗器。

对照品溶液：称取丹参素6.50mg，原儿茶酸6.42mg，芍药苷6.97mg，羟基红花黄色素A 5.10mg，阿魏酸6.15mg，丹酚酸A 4.82mg，丹酚酸B 5.74mg，分别置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀。

混合对照品溶液：移取各对照品溶液6.0mL混合于50mL容量瓶中，用甲醇定容并摇匀。

丹参素（MUST－12080701）、芍药苷（MUST－12113009）、丹酚酸A（MUST－13020701）、丹酚酸B（MUST－13082008）、羟基红花黄色素A（MUST－12081605）、原儿茶酸（110808－200503）、阿魏酸（110773－201313）等纯度均大于99%。

甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；试验用水为二次蒸馏水。

1.2 仪器工作条件

Agilent HC－C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），柱温20℃；流量1.0mL·min－1；进样量20μL；检测波长280nm；流动相A为0.2%（质量分数）磷酸溶液，B为甲醇。梯度洗脱程序：0～8min时，B由20%升至30%；8～15min时，B由30%升至35%；15～22min时，B由30%升至40%；22～40min时，B由40%升至80%。

1.3 试验方法

称取精制冠心颗粒2.00g置于具塞锥形瓶中，加水50mL，超声30min（120W，50kHz），冷却至室温，用滤纸过滤，移取滤液5.0mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，按仪器工作条件进行测定。

2 结果与讨论

2.1 干扰试验

称取5%处方量药材［2］，分别制备不含丹参、赤芍、川芎、红花等4种阴性对照样品［5］，按试验方法制备阴性对照品溶液，按仪器工作条件测定，结果见图1。

由图1可知：阴性样品对测定结果无干扰，说明方法的专属性良好。

2.2 标准曲线与检出限

分别移取混合对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，按照仪器工作条件进行测定。以化合物的质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，其线性参数见表1。按3倍标准偏差计算方法的检出限（3s），结果见表1。

图1 精制冠心颗粒样品的相关色谱图Fig.1 Related chromatograms of refined Guanxin particles samples

表1 线性参数和检出限Tab.1 Linearity parameters and detection limits

2.3 精密度试验

取混合对照品溶液，连续测定6次，计算得7种化合物测定值的相对标准偏差（RSD），丹参素为2.6%，原儿茶酸为2.7%，芍药苷为1.8%，羟基红花黄色素A为2.0%，阿魏酸为1.3%，丹酚酸A为1.4%，丹酚酸B为1.9%，表明方法的精密度较好。

2.4 重复性和稳定性试验

取同批冠心颗粒制备6份供试品溶液，按仪器工作条件测定，计算得7种化合物测定值的RSD，丹参素为2.0%，原儿茶酸为2.1%，芍药苷为2.3%，羟基红花黄色素A为0.9%，阿魏酸为1.9%，丹酚酸A为2.6%，丹酚酸B为2.2%，表明方法的重复性较好；并分别于0，2，4，6，8，12，24h进样测定，计算得7种化合物测定值的RSD，丹参素为1.8%，原儿茶酸为1.5%，芍药苷为2.6%，羟基红花黄色素A为0.7%，阿魏酸为1.6%，丹酚酸A为1.6%，丹酚酸B为2.8%，试验结果表明，供试品溶液24h内稳定性较好。

2.5 回收试验

取已知含量的同一批冠心颗粒分别加入对照品适量，按试验方法制备3份供试品溶液，按仪器工作条件进行测定，其结果见表2。

表2 回收试验结果Tab.2 Results of test for recovery

2.6 样品分析

取6批精制冠心颗粒，按试验方法制备成样品溶液，并按仪器工作条件进行测定，样品分析结果见表3。

表3 样品分析结果Tab.3 Analytical results of samples mg·g－1

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版第一增补本［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：248－249.

［3］ 蓝天凤，王晓，王岱杰，等.一测多评法测定丹参中4种丹参酮类成分［J］.中草药，2012，43（12）：2420－2423.

［4］ 杨菲，王智民，张启伟，等.“一测多评”法测定丹参酚酸类成分的含量［J］.中国中药杂志，2011，36（17）：2372－2379.

［5］ 张雪，褚文静，黄喜茹，等.反相高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定丹参饮片中5种水溶性成分［J］.理化检验－化学分册，2010，46（11）：1323－1325.

［6］ 张小谦，刘冀华，白世新.精制冠心颗粒赤芍、丹参、川芎质量标准的研究［J］.中国中医药现代远程教育，2009，7（12）：272－273.

［7］ 胡燕，宋力飞，李曼莎，等.精制冠心颗粒复方4味药材HPLC指纹图谱研究［J］.中国现代应用药学，2014，31（7）：809－813.

［8］ 王俊杰，刘弘，于天杰，等.HPLC法同时测定精制冠心颗粒中芍药苷与丹酚酸B含量［J］.中国药师，2013，16（8）：1175－1177.

O657.7

B

1001－4020（2017）04－0462－03

10.11973／lhjy－hx201704020

2016－04－04

陕西省教育厅科研计划项目（16JK1653）；西安医学院博士科研启动基金（2015DOC14）；国家级大学生创新训练项目（201611840012）；中央高校基本科研业务费资助项目（310829151077）