大鼠不同器官组织的脱水方法改进

敖炬钢，韩爱玲，钱琦琪，张录顺

大鼠不同器官组织的脱水方法改进

敖炬钢1，韩爱玲2，钱琦琪3，张录顺4

组织脱水；大鼠；制片技术；方法改进

近期，本实验室于大鼠组织病理学实验中发现，若按大鼠常规脱水时间和流程制备大鼠的组织蜡块，则组织切片易碎裂，染色易脱片，造成后续工作无法进行。即便使用防脱片剂效果亦不佳，尚未脱片的组织切片HE染色及特殊染色结果亦不理想。本实验室根据大鼠各个器官组织特点进行试验后，改进了大鼠组织的脱水方法取得较好效果，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料 按实验要求取大鼠各部位组织，大小1.5 cm×1.5 cm，厚0.3～0.5 cm。实验器具：国产脱水机。化学试剂为55%、60%、65%、70%、80%、85%、95%、100%梯度乙醇，二甲苯，石蜡(熔点58～60 ℃)。

1.2 方法 传统处理流程：(1)10%中性福尔马林充分固定2～3 h;(2)75%乙醇90 min；85%乙醇80 min；95%乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 h；100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 h;(3)二甲苯Ⅰ20 min；二甲苯Ⅱ 25 min；(4)浸蜡温度58～65 ℃：石蜡Ⅰ、Ⅱ各30 min；石蜡Ⅲ 40 min。改良处理流程：(1)多聚甲醛溶液固定24～48 h;(2)根据不同器官组织的特点，各个器官的脱水步骤及时间详见表1。本实验浸蜡温度为61 ℃。

2 结果

本实验以肝脏组织HE染色为例。肝组织以实质细胞为主，间质细胞较少，肝硬化组织有假小叶形成，其实质细胞与纤维化组织同时存在。由于其组织脆性，若按照常规方法处理，易造成肝组织脆硬，切片时易碎(图1、2)或易产生皱褶折叠(图3)、碎屑污染，影响制片和后续工作。改进脱水方法制得的大鼠组织蜡块，手感柔润，蜡片光润平整。制片染色后镜下可见胞质透彻，胞核清晰，组织结构完整(图4)。切片的连续性、裂痕、褶皱和碎屑程度均优于常规方法。

新旧方法比较：常规的组织脱水方法时间长，乙醇梯度处理粗糙，脱水效果不佳；病理制片组织易出现重叠、碎裂、污染、着色不佳等现象。改进后的梯度乙醇保证组织充分脱水，合理浸润时间从而缩减整体脱水时间，组织的无水乙醇处理时间和二甲苯透明时间恰当，避免脱水时间过长造成组织收缩、间隙增大、组织表面变脆[1]、透明时间过长组织变硬[2]。

3 讨论

本实验室将大鼠组织脱水流程进行改进，并对组织处理过程加以分析总结：(1)本实验中的梯度乙醇和处理时间可以保证组织充分脱水。我们依次采用梯度为55%、60%、65%、70%、80%、85%、95%、100%的乙醇，保证组织彻底脱水。脱水、透明、浸蜡时间应根据不同组织调整，浸蜡时间过长，温度过高(本实验设定为61 ℃)组织会过度脆化[3]，影响制片。使用改进的乙醇和浸蜡时间处理效果良好。(2)大鼠器官的组织特性增加了组织处理及制片的难度，处理不当会使石蜡切片易碎、易裂，破坏组织结构的完整性，并易出现蜡屑污染现象。本实验根据大鼠各部位组织器官特性采用不同的处理方式，效果良好。(3)除规范制取动物标本外，本实验改进的梯度乙醇和脱水时间可降低制片的难度。一般认为组织的乙醇浸泡时间短会造成脱水不彻底，包埋时组织易碎，蜡片完整性低、薄厚不均、毁刀甚至粉末等问题，本实验证明，此优化法对于大鼠各组织的脱水效果良好。

表1 各组织的脱水透明浸蜡时间(min)

①②③④

图1 肝组织碎裂，细胞形态模糊

图2 肝组织碎裂，影响肝细胞有效数量观察

图3 肝组织间出现折叠，影响细胞形态观察

图4 肝小叶结构完整，肝细胞形态清晰

综上所述，改进后的脱水方法可提高大鼠各部位组织处理效果，保证制片的整体质量，提高工作效率。

[1] 董 伟，俞 花，冼志红，等. 肝脏组织脱水流程及试剂更换改进方法[J]. 临床与实验病理学杂志, 2014,30(9):1060-1061.

[2] 马恒辉，周晓军. 如何提高组织处理的技术水平[J]. 临床与实验病理学杂志, 2011,27(4):415-418.

[3] 柏美玲，宋 昱，林群凡，等. 实验动物肝组织石蜡切片制作中易发问题探讨[J]. 中国现代药物应用, 2012,6(20):121-122.

成都医学院国家级“大学生创新实验计划”基金资助(201613705001)

成都医学院1医学检验技术2014级本科、2全科医师2014级本科、3生物技术2014级本科、4病理学与病理生理学教研室，成都 610500

敖炬钢，男，本科。E-mail: 540341820@qq.com 张录顺，男，博士，副教授，通讯作者。E-mail: zhangls2012@163.com

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1001-7399(2017)03-0342-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.030

接受日期：2017-01-08