桂科育成猪血常规指标的测定分析

苏乾莲　梁家幸　卿珍慧　周英宁　陈忠伟　蒋冬福　卢敬专　李斌　许松芳　段群棚　赵武

摘要：[目的]检测桂科育成猪的血常规指标，明确不同功能细胞（红细胞、白细胞和血小板）的数量变化及形态分布情况，为桂科猪的免疫评估与抗病性能研究提供基础数据。[方法]于49日龄起每周对44头桂科育成猪（公母各半）采血1次，连续采样7周，测定其血常规指标，并与长白猪和恩施黑猪的血常规指标进行比较分析。[结果]在桂科育成猪不同日龄的红细胞类检测指标中，红细胞计数（RBC）和血红蛋白含量（HGB）均在70日龄达最低值（6.85×10/L和97.1 g/L），显著低于49、56、63、84和91日龄时的对应值（P<0.05，下同）；平均红细胞血红蛋白（MCH）和平均血红蛋白浓度（MCHC）的变化规律基本一致，均在70日龄达最低值（15.11 pg和275.70 g/L）、91日龄达最高值（16.40 pg和314.30g/L）；红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）和红细胞体积分布宽度（RDW）的变化相对较稳定，不同日龄间均无显著差异（P>0.05，下同）。在白细胞类检测指标中，白细胞计数（WBC）于63日龄达最低值（13.71×10/L）、84日龄达最高值（17.52×10/L），二者差异显著；中性粒细胞计数（NEUT）在70日龄时达最低值（3.61×10/L），显著低于49和56日龄的对应值。淋巴细胞计数（LYMPH）的变化相对较稳定，受日龄增长的影响不显著。在血小板类检测指标中，血小板计数（PLT）、血小板压积（PCT）及血小板平均分布宽度（PDW）在不同日龄的变化相对较稳定，受日龄增长的影响不显著。与35日龄长白猪和5月龄以上恩施黑猪相比，桂科育成猪除HCT、平均血小板体积（MPV）、PCT和PDW等少数指标表现异常外，其他大部分血常规指标介于长白猪与恩施黑猪血常规指标范围内。[结论]桂科育成猪在血常规指标方面有一定的独特性，发育至49-91日龄时已具备较稳定的免疫系统。

关键词：桂科育成猪；长白猪；恩施黑猪；血常规指标；测定分析

0引言

[研究意义]血常规指标是免疫学测定的基本指标。因免疫功能易于度量测定，其研究结果也证实免疫指标可作为抗病育种的间接指标，因此通过免疫指标筛选提高动物疾病抗性是一条实际可行的有效途径（Arosa et al.，2004；vail de Vosse et al.，2009）。血液对保证机体新陈代谢、生理功能调节及内外环境平衡起重要作用，一旦机体机能出现问题，首先在血液指标上有所反应；反之，血液中的任何有形成分或指标发生病理变化，其影响也势必在全身组织器官有所反映（Beutler，2004；陈少康等，2015）。因此，临床医学上已将血常规指标检测作为疾病诊断必不可少的一种辅助手段。[前人研究进展]程泽信等（2007）在长江大学种猪场开展家猪和家野杂交一代及杂交二代的血液指标测定，结果表明，野猪血缘含量越大，血液中红细胞运输O2和CO2的能力越强，其运动机能也越强，有利于肉质的提高；白细胞数及血红蛋白含量增高，则说明免疫系统有所增强，对疾病具有更强的抵抗力。刘江伟等（2007）探讨长白仔猪血常规指标及其生化指标的正常值，发现长白仔猪的血常规指标及生化指标并无性别差异，但与巴马小型香猪的参考值存在显著差异，即长白仔猪具有其独特的生理生化特征。李春燕等（2012）研究了中药添加剂对猪血常规指标的影响，结果发现在基础日粮中添加不同比例中药添加剂能显著提高猪大淋巴细胞、浆细胞和单核细胞含量及IgG和IgM水平，即中药添加剂对猪具有促进增重、增强免疫的作用。王怀中等（2014）利用全自动血液细胞分析仪和流式细胞仪测定大蒲莲和长白仔猪的血常规指标和T淋巴细胞亚群性状，并对这些性状进行品种和母猪效应分析，结果表明，大蒲莲仔猪和长白仔猪在大部分血常规指标及T淋巴细胞亚群性状方面存在显著或极显著差异。陈少康等（2015）研究表明，病猪群与长白猪的平均红细胞体积（MCV）、血小板計数（PLT）和粒细胞百分比（GRN）差异显著，平均血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞体积分布宽度（RDW）、平均血小板体积（MPV）、白细胞计数（WBC）、淋巴细胞计数（LYMPH）、中值细胞计数（MID）、中性粒细胞计数（NEUT）差异极显著，其他指标差异不显著，其中白细胞类指标变化在一定程度上反映出猪群的健康情况，可作为一种评价猪群健康程度的辅助方法。向宇等（2015）对比分析了恩施黑猪与其他猪种的血液指标，并对恩施黑猪CX-CR4基因SNP位点进行基因分型，结果证实CXCR4基因SNP位点可用于探究血液指标变化。郭士琪等（2016）研究猪瘟、猪蓝耳病免疫程序对猪血液指标的影响，拟从血液指标水平确定最佳免疫程序，最终确定猪瘟弱毒疫苗和猪蓝耳病弱毒苗的最佳免疫程序为：首先免疫猪瘟弱毒疫苗，间隔7 d后再免疫猪蓝耳病弱毒疫苗，其免疫效果最佳，生长性能最优。[本研究切入点]桂科猪是广西畜牧研究所利用广西本地品种陆川猪与外来品种猪杂交培育获得的一个新配套系品种，兼具本地猪肉质鲜美和外来猪生长速度快的双重优点，深受广大养殖户的青睐（潘天彪等，2010；谢炳坤等，2012；罗鲜青等，2015），但至今尚无关于桂科猪血常规指标测定的研究报道。[拟解决的关键问题]通过检测桂科育成猪的血常规指标，明确不同功能细胞（红细胞、白细胞和血小板）的数量变化及形态分布情况，为桂科猪的免疫评估与抗病性能研究提供基础数据。

1材料与方法

1.1试验材料

7周龄（49日龄）桂科育成猪由广西畜牧研究所桂科猪育种场提供，共44头，公母各半，体重35-60kg/头。

1.2试验方法

1.2.1血样采集 采血前禁食12 h，记录猪只性别和编号。于猪前腔静脉窦采集血样3.0 mL，置于含EDTA抗凝剂的离心管中，颠倒混匀，标记相应编号，4-8℃保存并及时送至广西大学动物医院进行血常规检测分析。每周采血测定1次，连续7周。

1.2.2血常规测定 血常规指标采用法国优德HS Compact数字化全自动血液分析仪进行测定，共获得18项指标，主要分为红细胞、白细胞和血小板三大类。其中，红细胞类包括红细胞计数（RBC，×10/L）、血红蛋白（HGB，g/L）、红细胞压积（HCT，%）、平均红细胞体积（MCV，fL）、平均红细胞血红蛋白（MCH，pg）、平均血红蛋白浓度（MCHC，g/L）和红细胞体积分布宽度（RDW，%）等7项指标；白细胞类包括白细胞计数（WBC，×10/L）、中性粒细胞计数（NEUT，×10/L）、中性粒细胞百分比（NEUT%）、淋巴细胞计数（LYMPH，×10/L）、淋巴细胞百分比（LYMPH%）、中值细胞计数（MID，×10/L）和中值细胞百分比（MID%）等7项指标；血小板类包括血小板计数（PLT，×10/L）、血小板压积（PCT，mL/L）、平均血小板体积（MPV，fL）和血小板体积分布宽度（PDW，%）等4项指标。打印相应的检测报告单，并标记好相应的编号。

1.3统计分析

试验数据以Excel 2010进行统计处理，然后采用SPSS 17.0进行单因素方差分析和LDS法多重比较分析。

2结果与分析

2.1桂科育成猪不同日龄血常规指标分析结果

2.1.1红细胞类指标检测分析结果 由表1可知，在桂科育成猪不同日龄的红细胞类指标中，RBC呈先降低后升高的变化趋势，于70日龄达最低值（6.85×10/L），显著低于49、56、63、84和91日龄时的RBC（P<0.05，下同）；HGB也在70日龄达最低值（97.1 g/L），显著低于49、56、63、84和91日龄时的HGB；MCH和MCHC的变化规律基本一致，均在70日龄达最低值（15.11 pg和275.70 g/L）、91日龄达最高值（16.40 pg和314.30 g/L），二者间差异显著；HCT、MCV和RDW的变化相对较稳定，在不同日龄问均无显著差异（P>0.05，下同）。

2.1.2白细胞类指标检测分析结果 由表2可知，在桂科育成猪白细胞类指标中，WBC于63日龄达最低值（13.71×10/L）、84日龄达最高值（17.52×10/L），二者差异显著；NEUT在70日龄时达最低值（3.61×10/L），显著低于49、56和77日龄的时对应值。LYMPH的变化相对较稳定，受日龄增长的影响不显著。在MID方面，其数量在49日龄达最大值（6.48×10/L）、63日龄达最小值（3.05×10/L），二者差异显著，但其百分比变化并不同步，于56日龄达最大值（40.54%）、77日龄达最小值（19.98%）。

2.1.3血小板类指标检测分析结果 由表3可知，桂科育成猪PLT、PCT和PDW在不同日龄的变化趋势相对较稳定，即受日龄增长的影响不显著；而MPV在91日龄达最大值（17.39fL），显著高于70和77日龄的对应值（15.77和15.84fL）。

2.2桂科育成猪与长白猪、恩施黑猪的血常规指标比较分析结果

以桂科育成猪与35日龄长白猪（刘江伟等，2007）和5月龄以上恩施黑猪（向宇等，2015）的血常规指标进行比较分析，结果（表4）发现，除桂科育成猪的HCT和PDW明显低于长白猪和恩施黑猪，MPV和PCT明显高于长白猪和恩施黑猪外，其他血常规指标与长白猪和恩施黑猪相近或介于二者间的血常规指标范围内。

3讨论

血常规指标不仅能反映猪的免疫状态和健康状态，还是饲养管理与分类选育的重要参考依据（王怀中等，2014）。本研究于49日龄起每周对桂科育成猪采血1次，连续采样7周，测定其血常規指标，结果表明，不同个体的血常规指标不同，同一个体不同日龄的血常规指标也存在差异，但大部分指标在相对稳定的范围内波动。桂科育成猪的RBC和HGB均在70日龄时达最低值（6.85×10/L和97.1 g/L），显著低于49、56、63、84和91日龄时的对应值；WBC于63日龄达最低值（13.71×10/L），显著低于49和84日龄时的对应值；MPV在91日龄达最大值（17.39 fL），显著高于70和77日龄的对应值。这可能与桂科猪群在70-77日龄段进行猪瘟加强免疫有关，但具体原因有待进一步探究。

HCT是指一定量的抗凝全血经离心沉淀后，其下沉红细胞占全血的容积比，是一种间接反映红细胞数量和体积的简单方法（田鹏鹏等，2017）。合理的HCT可提高机体内外气体的交换，增强新陈代谢，大多数疾病会消耗红细胞，其具体表现为HCT降低。本研究对桂科育成猪与长白猪、恩施黑猪的血常规指标进行比较分析，结果显示，桂科育成猪的HCT明显低于长白猪和恩施黑猪，MCV低于长白猪和恩施黑猪，MCHC高于长白猪但低于恩施黑猪，RDW低于长白猪但高于恩施黑猪，RBC和PLT高于长白猪和恩施黑猪，提示桂科育成猪群呈轻微的缺铁症状。此外，虽然桂科育成猪的MID较长白猪有所偏高，但由于WBC未呈明显的升高趋势，故不能确定其存在病毒或细菌感染。

本研究对桂科育成猪的血常规指标进行检测，其结果可为桂科猪的免疫健康评估及抗病育种体系评价提供基础数据。但下一步还需对桂科猪细胞因子IFN-y、IL-2、IL-4和TL-10等进行检测，或对MXl基因第14外显子和第8内含子的多态性进行分析，综合免疫指标、抗体效价及分子遗传标记，为桂科猪的商品化生产及疫病防控提供科学依据。

4结论

桂科育成猪在血常规指标方面有一定的独特性，发育至49～91日龄时已具备较稳定的免疫系统。