胃舒康颗粒质量标准的修订与完善＊

郭晓英，孙 旭，马晓昱，刘云云，陈 瑶

胃舒康颗粒是海军青岛第二疗养院经多年临床研究研制的由丹参、黄芪、黄连、红花和当归等组成的纯中药制剂，具有行气活血、温中祛寒的作用，用于萎缩性胃炎，疣状性胃炎，胃黏膜脱垂，胃十二指肠球部溃疡恢复期等慢性胃病的治疗，疗效确切。为了进一步完善该品种的质量标准，配合医疗机构制剂标准提高，笔者对该制剂的质量标准进行修订，采用TLC法对处方中黄芪、原儿茶醛、黄连、红花、川芎和当归等进行了定性鉴别，建立HPLC法测定丹参素钠含量的方法。结果表明本法结果准确，重现性好，能有效控制该制剂质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 薄层层析硅胶G、硅胶G254、硅胶H（青岛海洋化工集团）；ZF－6型三用紫外分析仪；METTLER AE240电子天平；Agilent 1100高效液相色谱仪；AS－B超声波清洗仪；HG－B电热恒温干燥箱；HH－8电热恒温水浴锅。

1.2 试药 对照品黄芪甲苷 （批号110781－201314）、原儿茶醛 （批号 110810－201007，纯度98.2%）和丹参素钠 （批号110855－201311，纯度98.1%），对照药材黄连（批号 120913－201310）、红花 （批号 120907－201111）、 川芎 （批号 120918－201110）和当归（批号 120927－201315），上述对照品和对照药材均购自中国食品药品检定所；胃舒康颗粒（批号 20130401、20130902、20140101）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 黄芪的鉴别［1，2］取本品12 g，置索氏提取器中，加甲醇50 ml提取6 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，转移至分液漏斗中，加0.15 mol/L氢氧化钠溶液饱和的正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用0.15 mol/L氢氧化钠溶液洗涤3次，10 ml/次，弃去氢氧化钠液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg溶液，作为对照品溶液。再取不含黄芪的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，分别吸取上述3种溶液各5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水（65∶35∶10）10 ℃以下放置分层的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。结果：供试品色谱与对照品色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点，结果见图1A；置紫外灯（365 nm）下检视，供试品色谱与对照品色谱相应的位置上呈现相同的荧光斑点。结果见图1B。

图1 黄芪鉴别

2.1.2 原儿茶醛的鉴别［1，2］取本品12 g，加水25 ml使溶解，用盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，20 ml/次，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。再取不含原儿茶醛的阴性样品，供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，分别吸取上述三种溶液各5 μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯－甲酸（8∶6∶1.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（254 nm）下检视，供试品色谱与对照品色谱相应的位置上呈现相同的荧光斑点。结果见图2。

图2 原儿茶醛的鉴别

2.1.3 黄连的鉴别［1，2］取本品 12 g，加甲醇 20 ml，超声处理，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.5 g，加甲醇10 ml，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 ml，作为对照品溶液。再取不含黄连的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法 （《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，分别吸取上述三种溶液各5 μl，点于同一硅胶G254薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－异丙醇－水 （6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）为展开剂（同时在展开箱中放入一小烧杯与展开剂等体积的浓氨试液饱和15 min），展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。结果见图3。

图3 黄连的鉴别

2.1.4 红花的鉴别［1，2］取本品 12 g，加 80%丙酮溶液 30 ml，密塞，振摇 15 min，静置，取上清液，作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5 g，加80%丙酮溶液5 ml，按供试品溶液项下方法制成对照药材溶液。再取不含红花的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法 （《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，分别吸取上述三种溶液各5～10 μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇（7∶2∶3∶0.4）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的斑点。结果见图4。

2.1.5 川芎、当归的鉴别［1，2］取本品 12 g，加浓氨试液 2 ml，乙醇 50 ml，摇匀，静置 30 min，超声处理15min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另分别取川芎、当归对照药材各0.5 g，各加浓氨试液2 ml，乙醇25 ml，按供试品溶液项下方法制成对照药材溶液。再取不含川芎、当归的阴性样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，分别吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯（5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。结果供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上显示相同颜色的荧光斑点，结果见图5。

图4 红花的鉴别

图5 川芎、当归的鉴别

2.2 丹参素钠的含量测定［2－4］

2.2.1 色谱条件及系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－1%醋酸溶液 （2∶98）为流动相；检测波长280 nm；柱温为25℃；流速1.0 ml/min；丹参素钠峰保留时间为12.848 min，分离度为2.21，理论板数为2322。阴性对照、对照品以及供试品的HPLC色谱图见图6A，6B和6C。

图6阴性对照、对照品以及供试品的HPLC色谱图

2.2.2 对照品溶液的制备 取丹参素钠对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成浓度为1.017 mg/ml的对照品溶液 （对照品储备液），精密量取1 ml置25 ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得浓度为40.69 μg/ml的对照品溶液。

正确的监测分析方法是获得准确结果的关键因素之一。每一种监测分析方法的灵敏度和准确度要能满足要求，方法成熟，抗干扰能力强，操作简便。在常规监测中，分光光度法用得较多，可测定多种金属和非金属离子或化合物；原子吸收法主要用于多种微量、痕量金属元素的测定；容量法主要用于DO、COD、BOD5等的测定。审核时主要关注一些新监测标准和方法有没有进行及时更新。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取胃舒康颗粒6 g，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇30 ml，超声处理30 min，放冷，滤过，取续滤液5 ml至10 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备 取缺制丹参的样品，按“2.2.3”项下方法制备成阴性对照品溶液。

2.2.5 标准曲线的绘制 取“2.2.2”项下丹参素钠对照品贮备液适量，用50%甲醇稀释，得系列标准溶液。含丹参素钠分别为 10.17、20.35、40.69、81.38、162.77 μg/ml，分别取 20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。 以峰面积值为纵坐标（Y），浓度（μg/ml）为横坐标 （X）绘制标准曲线。计算得回归方程，Y=13.671X+5.8542，R2=0.9998。实验结果表明丹参素钠在10.17～162.77 μg/ml的范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取“2.2.5”项下40.69 μg/ml对照品溶液 20 μl，按“2.2.1”项下色谱条件重复进样6次，记录峰面积值，计算RSD （n=6）为0.15%。说明仪器的精密度良好。

2.2.7 重现性试验 取胃舒康颗粒 （批号20130401），按“2.2.3”项下方法分别制备 6份供试品溶液，分别进样20 μl，记录丹参素钠峰面积值，计算RSD（n=6）为0.13%，表明方法重复性良好。

2.2.8 稳定性试验 取胃舒康颗粒 （批号20130401），按“2.2.3”项下方法配制供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、12 h 进样 20 μl，按“2.2.1”项下色谱条件，测定丹参素钠的峰面积，计算RSD为0.37%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

表1 胃舒康颗粒中丹参素钠加样回收率试验测定结果

2.2.10 样品含量测定 按“2.2.1”项下色谱条件，精密吸取“2.2.2”、“2.2.3”项下溶液各 20 μl，照 2015年版《中国药典》四部通则0512，进样胃舒康颗粒样品（批号 20130401、20130902、20140101），每批样品测定2份，以外标法计算各个样品中丹参素钠的含量，结果详见表2。

表2 胃舒康颗粒中丹参素钠含量测定结果（n=2）

3 讨论

3.1 TLC鉴别 该文通过试验制定了黄芪、黄连、原儿茶醛、红花、川芎和当归的TLC鉴别方法，该方法特征斑点明显，色谱分离清晰，可作为胃舒康颗粒中黄芪、黄连、原儿茶醛、红花、川芎和当归［1，3，4］的专属性鉴别。

3.2 样品溶液的制备 该实验在前处理过程中进行了不同提取溶剂的比较［2，5－11］，如酸处理－乙酸乙酯萃取或50%甲醇回流提取，结果表明采用颗粒直接加50%甲醇超声30 min提取制备丹参素钠含量测定样品溶液，可有效提取所含丹参素钠；该方法简便、可靠、重现性好，缩短了检验流程，避免了回流提取萃取分离的繁琐操作，节省了人力物力。

3.3 流动相选择 该实验亦比较了不同比例流动相对峰型、分离度的影响，如甲醇－1%HAc（2∶98），甲醇－1%HAc（4∶96），甲醇－1%HAc（6∶94），最终确定流动相为甲醇－1%HAc（2∶98）时丹参素钠峰型及分离度较好。

该实验建立的含量测定方法，经方法学研究结果表明简便、可行、快捷，专属性强，准确度、灵敏度及重现性好，可用于胃舒康颗粒的质量控制。

参考文献

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