清脑片对小鼠镇痛效果的实验研究＊

李重先，谢国旗，时敏秀，高延玲，张旭辉，孔学军，李献玉，朱秀卓，张正臣

疼痛是一种不愉快的感觉和情绪上的感受，伴有或具有潜在的组织损伤［1］，是临床最常见的症状之一，涉及临床各科，见于多种急、慢性疾病过程之中。疼痛在心理、生理、精神及社会多个方面都严重影响着患者的生活质量，已成为全球性的公共健康问题。因而对各种疼痛症的研究和治疗日益受到全球医药界的重视。探讨疼痛的发病机理，寻求有效防治痛症的途径、方法和药物是当前医药界的重要任务之一。

清脑片为复方制剂，主要由白芷、当归、川芎、勾藤、细辛、龙骨、薄荷等组成。功能主治：活血、行气通窍、镇痛、清利头目。用于头痛、头晕、脑震荡后遗症。为探讨其镇痛作用，观察了清脑片对小鼠尾根加压的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂与药品 清脑片（主要成分：白芷、当归、川芎、勾藤、细辛、龙骨、薄荷；功能主治：活血、行气通窍、镇痛、清利头目。用于头痛、头晕、脑震荡后遗症；用法用量：口服，3 次/d，3～5 片/次），中国人民解放军第371中心医院提供，批号20141125；晕痛定胶囊（阳性药）：生产厂家：河南龙都药业有限公司；规格：0.4g×27 粒/盒；生产批号：150309；生理盐水，河南双鹤华利药业有限公司生产，批号130909 06B；医用乙醇，新乡市三伟消毒制剂有限公司，批号20140105；纯净水，新乡娃哈哈食品有限公司，批号20130811；醋酸溶液，天津市致远化学试剂有限公司，批号20131205

1.2 仪器 JM 1000电子秤，余姚记铭称重校验设备有限公司；AL204电子天平，梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司；YLS－3E电子压痛仪，济南义延科技发展有限公司。

1.3 动物 50只小鼠为昆明种，清洁级，济南朋悦实验动物繁育有限公司，合格证编号：37009200000 905。实验动物使用许可证号SYXK（豫）2015－005。

1.4 实验方法

1.4.1 清脑片对小鼠尾部压痛实验的影响 取50只小鼠，18～22 g，雌雄各半，实验室正常饲养3 d。预先筛选痛阈正常小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，即清脑片大、中、小剂量组及晕痛定组、生理盐水组。用尾压测痛仪测定小鼠给药前痛阈，即基础痛阈，方法是：将小鼠尾（约尾尖1/3处）置于压痛仪操作台上，施加连续递增压力，当小鼠出现挣扎退缩或嘶叫反应时，显示器读出的压力值即为痛阈指标。然后分别灌服大、中、小剂量的清脑片混悬液（2.24 g/kg、1.12 g/kg、0.56 g/kg；相当于临床剂量的30倍、15倍、7.5倍），晕痛定混悬液（0.9 g/kg，相当于临床剂量的15倍）及同体积生理盐水，各实验组小鼠给药体积为0.1 ml/10 g，灌胃给药1次/d，连续7 d，于末次给药后1 h后测定痛阈值。痛阈提高值=给药后痛阈－给药前痛阈，凡痛阈提高值为负数时，按0计。并按下式计算痛阈值提高百分率（%）：阈值提高百分率（%）=［（给药后痛阈值－给药前痛阈值痛）/给药前痛阈值］×100%［2，3］。结果见表1。

1.4.2 清脑片对醋酸致小鼠扭体模型的影响 再取小鼠50只，体重18～21 g，雌雄各半，实验室正常饲养3 d，随机分为5组，即模型组、晕痛定组、大、中、小剂量清脑片组，每组10只。分别灌服大、中、小剂量清脑片混悬液 （2.24 g/kg、1.12 g/kg、0.56 g/kg，0.22 g/ml、0.11 g/ml、0.056 g/ml，0.1 ml/10g）、晕痛定胶囊混悬液（0.9 g/kg，0.09 g/ml，0.1 ml/10g）及同体积的生理盐水（0.1 ml/10g），给药 1次/d，连续给药3 d，于末次给药1 h时，每只小鼠腹腔注射新配制的0.5%醋酸蒸馏水液0.1 ml/10 g，立即观察小鼠首次出现扭体反应的潜伏期及10 min内的扭体次数。每组结果以均数±标准差表示，计算镇痛百分率。镇痛百分率=（对照组扭体次数－给药组扭体次数）/对照组扭体次数。结果见表2。

1.5 统计学分析 采用SPSS 21软件统计系统进行统计处理，各组计量资料以均值±标准差（±s）表示，组间差异采用t检验方法；计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异显著的标准。

2 结果

2.1 清脑片对尾根加压法小鼠疼痛反应的影响给药前各组基础痛阈无明显差异（P＞0.05），说明分组均匀。与生理盐水组比，大、中、小剂量清脑片组和晕痛定组均可显著提高小鼠痛阈、使痛阈提高值显著升高（P＜0.01）。 见表 1。

2.2 清脑片对醋酸致小鼠扭体反应的影响 与生理盐水组对比，大、中剂量清脑片组及晕痛定胶囊组均可显著延长小鼠首次扭体的潜伏期（P＜0.01）、显著减少10 min内扭体次数（P＜0.01），小剂量清脑片组可明显延长小鼠首次扭体的潜伏期 （P＜0.05）、明显减少 10 min 内扭体次数（P＜0.05）。 见表2。

表1 清脑片对尾根加压法小鼠疼痛反应的影响（±s，n=10）

表1 清脑片对尾根加压法小鼠疼痛反应的影响（±s，n=10）

注：与生理盐水组比，＊P＜0.05；#P＜0.01。

痛阈提高百分率（%）生理盐水组 － 270.39±25.48 7.58晕痛定组 0.90 267.35±20.67 99.64大剂量清脑片组 2.24 266.43±21.00 99.63中剂量清脑片组 1.12 264.68±32.27 85.08小剂量清脑片组 0.56 267.70±30.13 72.93组别 给药剂量（g/kg） 基础痛阈（g） 给药后痛阈（g） 痛阈提高值（g）342.21±22.95 71.82±15.98 532.46±36.76 265.11±25.63#528.99±24.55 262.56±28.88#486.04±30.17 221.36±14.77#459.44±36.60 191.74±28.92#

表2 清脑片对醋酸致小鼠扭体反应的影响（±s，n=10）

表2 清脑片对醋酸致小鼠扭体反应的影响（±s，n=10）

注：与生理盐水组比较，＊P＜0.05，#P＜0.01。

镇痛率（%）生理盐水组 － 3.41±0.57 33.6±4.14 －晕痛定胶囊组 0.90 5.01±0.56# 19.9±4.07# 40.77清脑片大剂量组 2.24 4.82±0.71# 21.7±5.10# 35.42中剂量组 1.12 4.48±0.60# 24.3±4.67# 27.68小剂量组 0.56 4.17±0.66＊ 27.6±5.46＊ 17.86分组 剂量（g/kg）潜伏期（min）10 min内扭体次数（次）

3 讨论

清脑片方中白芷为君药，辛、温，具有解表散风、通窍镇痛的作用。当归，辛、温，具有补血、活血、镇痛的作用。川芎，辛、温，具有活血行气、祛风镇痛的作用。勾藤，甘、微寒，具有息风止痉、清热平肝的作用。细辛，辛、温，具有祛风散寒、通窍镇痛的作用。四药合用为臣药。龙骨，甘、涩，具有镇静安神、收敛固涩的作用，为佐药。薄荷辛、凉，具有疏散风热，清利头目的作用，为使药，以上七药合用具有活血行气、通窍镇痛的作用。可有效缓解脑震荡后头痛症状。临床应用取得了较好的疗效［12］，前期的药效学实验也证明了该制剂具有活血、抗平衡失调的作用［13－15］。为验证其镇痛作用进行了该实验。动物模型是研究疾病的发病机理以及寻求开发新药物或更有效治疗手段的基础，理想的疼痛模型应该具备：（1）致痛原因近似临床实际情况；（2）动物的疼痛行为反应以及逃避疼痛刺激的反射活动与某种或某些慢性疼痛症状相似，可以客观检测；（3）便于进行疼痛发生机制的研究；（4）模型制作简便，成功率高，可重复性强；（5）反复刺激几乎不引起或只引起极小的组织损伤。

目前国内外筛选镇痛药常用的镇痛方法有物理（热、电、机械）和化学刺激法，其中物理法多用于筛选较强镇痛药，化学法主要用于筛选具有抗炎作用的镇痛药，但这些方法都各有优缺点。另外动物实验结果与临床试验结果的平行关系也是未知的，因此对清脑片的药效学实验设计了多种镇痛实验方法。其中小鼠尾根加压法属反射性测通模型，本方法的优点在于同一小鼠痛阈变化很小，相近重量小鼠变异系数很小，重复性好，对强弱镇痛药均有效，所以辅以机械刺激实验以确保清脑片的镇痛作用，实验结果表明，其具有明显的对抗机械压力引起的疼痛，疼痛提高百分率可达98.55%。腹腔注射醋酸引起小鼠长时间的疼痛刺激，从而导致扭体反应，即腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起。观察给予醋酸10 min内发生扭体反应“扭体”次数。此实验方法具有敏感、简便、重复性好等特点，也是筛选镇痛药物经典动物模型之一。本实验结果表明清脑片大、中、小剂量均能减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，说明清脑片对醋酸所致小鼠有镇痛作用。以大、中剂量清脑片的镇痛疗效最优。

综上可知，清脑片具有镇痛作用，可以对抗机械刺激引起的伤害性反应，且有量效关系，但对其有效成分以及镇痛机制尚有待于进一步的研究探讨。由实验结果可知尾根加压法和扭体反应镇痛率随着剂量的增加而效果逐步增强，再增大剂量已无显著疗效，目前实验中的最佳剂量即为当前大剂量，在大剂量的范围内目前无明显的不良反应。

志谢 本实验在河南中医药大学苗明三教授指导下完成，特此致谢。

参考文献

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