MMP-2 和E-CAD在子宫内膜异位症中的表达

夏文焱，苏翠红，吴英杰

（佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154007）

EMT的发病机制未明，故本研究用免疫组化的实验方法研究MMP-2 和E-CAD在 EMT中的表达，为探索EMT提供新思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年9月～2017年5月佳木斯大学附属第一医院手术术后病理诊断为EMT 的患者32例作为研究组。取其异位内膜及在位内膜，EMT异位内膜统一选取为卵巢巧克力囊肿壁，EMT在位内膜为同时切除子宫所得的内膜或术前诊断性刮宫取得的内膜。同期选择因子宫肌瘤行开腹手术的正常子宫内膜20例。所有病例均排除子宫腺肌病，所有患者无长期用药史，术前6个月未经任何内分泌药物治疗以及无妊娠及哺乳史，无盆腔炎症，无恶性肿瘤史，无其他内外科疾病。所有患者年龄差异均无统计学意义。所有诊断均经术后病理证实。

1.2 方法

1.2.1 标本制备 将实验标本10%甲醛固定经过处理后包埋制成石蜡切片数张。

1.2.2 免疫检测 采用SP法检测。MMP-2、E-CAD均为单克隆抗体。SP试剂盒由北京中杉金桥试剂公司提供。操作严格按照说明进行，以 PBS 代替一抗为阴性对照。

1.2.3 判定标准：MMP-2、E-CAD主要表达于腺体细胞胞浆中，相应部位出现黄色颗粒就是阳性表达。显色情况评分:无色 (0 分 )，淡黄 (1 分 )，棕黄 (2分)，褐黄 (3分)。按阳性细胞率评分:阳性细胞数 ≤25%为 1分，25%～50%为 2分，51% ～ 75%为 3分，＞75%为 4分。二者得分相乘得到的分数平均值作为该病例的最终评分。染色结果分为四级：0分为阴性（-）；1-4为弱阳性（+）；5-8分为阳性（++）；9-12分为强阳性（+++）。

1.3 统计学方法

采用SAS 9.1进行数据分析，采用卡方检验，多个独立样本等级资料的分析采用Kruskal-Wallis Test，进一步两两比较采用Dwass Steel Critchlow-Fligner （DSCF多重比较）。以P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

MMP-2在在位内膜、异位内膜、正常内膜阳性表达率分别为75%、84%、45%。将三组的阳性率进行卡方检验，差异有统计学意义（P＜0.05），说明MMP-2在这三组之间整体表达有差异性，将MMP-2在三组间的分布做Kruskal-Wallis Test，得出H=17.1014，差异有统计学意义（P＜0.05），说明MMP-2在三组间的分布不全相同。再进一步两两比较采用DSCF多重比较，可得出异位内膜中的表达略高于在位内膜，差异无统计学意义（P＞0.05）；在异位内膜和在位内膜中的表达均显著高于正常内膜组，差异有统计学意义（P＜0.05）。同理可以得出E-CAD在在位内膜、异位内膜、正常内膜阳性表达率分别为59.4%、37.5%、95%。E-CAD在这三组之间整体表达有差异性，E-CAD异位内膜中的表达略低于在位内膜，差异无统计学意义（P＞0.05)；在异位内膜和在位内膜中的表达显著低于正常内膜组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 MMP-2与 E-CAD在各内膜中的表达

3 讨 论

EMT具有细胞侵袭能力，能局部或远程转移。一般认为这种侵入和转移的发生，与细胞外基质(extracellular matrix, ECM )的降解密切相关[1]。MMP-2具有降解ECM及血管基底膜的作用。MMP-2被认为是在肿瘤侵袭和转移过程中最直接和最重要的MMPs，与肿瘤的浸润和转移有密切关系，是近年来研究的热点[2]。

细胞与ECM粘附作用的膜表面糖蛋白称为黏附因子，其中钙粘素是一类钙离子依赖的黏附分子家族，是参加细胞间粘附作用的重要粘附分子之一，其中最重要的是E-CAD。E-CAD是在上皮细胞 - 细胞粘附和维持组织结构中起关键作用。钙粘蛋白的异常表达在许多人类肿瘤的发生和发展中起着关键作用[3]。

在EMT中，异位子宫内膜细胞的粘附，增殖和血管生成过程可能是形成子宫内膜异位病灶所必需的，因此子宫内膜异位细胞侵袭力的增加被认为是EMT进展的一个可能原因[4]。

各种体内和体外研究也提示MMP-2的过度表达和E-CAD的缺失与EMT的发展和侵袭性有关。在本研究中，在EMT中无论是异位内膜还是在位内膜MMP-2的表达显著高于正常内膜，E-CAD在异位内膜和在位内膜中的表达均低于正常内膜。说明E-CAD减少使得细胞间黏附力降低，为内膜异位提供了最初的条件，而MMP-2的表达增强，诱导血管生成能力和分解细胞外基质能力增加，异位内膜侵袭性和转移能力均增强，二者都使得异位内膜的侵袭性和转移能力增加，在EMT中起重要作用。

参考文献

[1] Akoum A, Alakoum M, Lemay A, et al. Imbalance in the peritoneal levels of interleukin 1 and its decoy inhibitory receptor type II in endometriosis women with infertility and pelvic pain.[J]. Fertility& Sterility, 2008, 9(6):1618-1624.

[2] Loukopoulos P, ungall B A, traw R C,et al.Matrix metalloproteinase-2 and -9 involvement in canine tumors.[J].Veterinary Pathology, 2003, 40(4):382-394.

[3] Shiozaki H, Tahara H, Oka H, et al. Expression of immunoreactive E-cadherin adhesion molecules in human cancers. Am J Pathol 1991;139:17–23.

[4] Gaetje R, Kotzian S, Herrmann G, Baumann R, Starzinski-Powitz A: Invasiveness of endometriotic cells in vitro. Lancet 1995;346:1463–1464.