苦参碱注射液中间体热原内控标准研究建立

曹 云，孙利明

（正大天晴药业集团股份有限公司 江苏 连云港 222000）

苦参碱注射液中间体热原内控标准研究建立

曹 云，孙利明

（正大天晴药业集团股份有限公司 江苏 连云港 222000）

目的对苦参碱注射液进行细菌内毒素研究，建立对苦参碱注射液中间体热原的内控标准。方法按照《中国药典》2015年版第三部通则1143进行。结果建立了苦参碱注射液中间体内控指标：即将样品按《中国药典》2015年版第三部通则1143细菌内毒素检查法测定，应符合规定。结论苦参碱注射液生产中可采用此指标进行内控细菌内毒素。

苦参碱；细菌内毒素；中间体；内控指标

苦参碱注射液目前应用广泛，临床主要使用于治疗慢性肝炎患者，临床疗效确切，配合抗病毒药物同时使用效果更好，同时还有一定的升白效果，市场前景较好。当下SFDA标准YBH06592006之规定注射液需检查热原，目前的家兔法检测准确度较高，但操作不便，无法快速得到检测结果，无法对中间体的质量进行控制。本文研究了用细菌内毒素法对苦参碱注射液中间体进行质量控制，用细菌内毒素法替代热原检测，取得了较好的结果。

1 试验材料及仪器

1.1 苦参碱注射液

规格：250 mL：苦参碱0.15 g与葡萄糖12.5 g，批号：150727220，150727120，150728220，150728120，160219220，160219120，160218220，160218120。

来源：本公司

1.2 细菌内毒素材料

细菌内毒素工作标准品：80 EU/支，批号150601，购自中国食品药品检定研究所。

鲎试剂：①λ为0.125 Eu/mL，批号：16062612，购自福州新北生化工业有限公司。

②λ为0.125 Eu/mL，批号：1606272，购自湛江安度斯生物有限公司。

BET水：5 mL/支，批号：1610170，购自湛江安度斯生物有限公司。

1.3 仪器

名称 型号 厂家电热恒温干燥箱 GZX-DH-50×55 武汉亚华电热恒温水浴锅 H.S.G 20-4 上海析达仪器有限公司净化工作台 苏州佳宝净化

所用玻璃器皿需在250℃干燥2 h处理，并避免热源污染。

1.4 供试品溶液配置

将苦参碱注射液配置成pH值为7左右的供试品溶液，按照不同批号保存。

将苦参碱注射液中间体配置成pH值为7左右的供试品溶液，按照不同批号保存。

2 试验方法

2.1 苦参碱注射液细菌内毒素限值

根据通则1143中注射剂规定K=5 EU/（kg·h）。从苦参碱注射液的使用说明书可知[2]，本品用于静脉滴注时，一次0.15 g，一日1次。按1h输注完成，则每小时剂量不超过150 mg。故M=2.5 mg/（kg·h）。（详见2015年药典第三部通则1143）[1]

本品的L=K/M=2.0 EU/mg。

2.2 样品最大有效稀释倍数

最大有效稀释倍数（MVD）（详见2015年药典第三部通则1143）[1]

由L值可求得最大有效稀释倍数。本品的MVD=0.6×2/0.125=9.6。

2.3 鲎试剂灵敏度复核

按《中国药典》2015年版第三部通则1143[1]细菌内毒素检查法项下“鲎试剂灵敏度复核试验”方法检测，可用于试验。

2.4 实验步骤及样品测定结果

取内毒素标准品一支，摇晃样品后，用切样器在玻璃器皿颈部轻轻切割，用医用酒精消毒后掰开颈口，应注意尽量避免有玻璃碎屑进入瓶中。再计入定量专用检测用水溶解，溶解过程中应注意避免有气泡产生用封口膜封口后放置于混合器上混合溶解20分钟。混合结束后进行样品稀释步骤，应保证每稀释一步必须在混合器上混合60秒，由此可得细菌内毒素标准溶液，计2.0 λ，1.0 λ，0.5 λ，0.25 λ[3]。

取鲎试剂样品，轻轻震荡后，用切样器在玻璃器皿颈部轻轻切割，用医用酒精消毒后掰开颈口，应注意尽量避免有玻璃碎屑进入瓶中。再计入定量专用检测用水溶解，溶解过程中应注意避免有气泡产生，然后将其分装到凝集管中待用。

取配置好的鲎试剂，加入分别加入供试品稀释溶液、阳性对照溶液以及检查用水作为阴性对照管。鲎试剂以及相关溶液混匀后，用封口膜封口，并垂直放入37度的恒温器中，保温60分钟后取出，观察实验结果，记录阳性与阴性结果，并注意取出过程中应避免震动。

将家兔法检查合格的150727220批样品和家兔法检查不合格的150727120批样品，分别按《中国药典》2015年版第三部通则1143[1]测定，结果如表1。

2.5 内控指标的建立

综上所诉，通过鲎试剂灵敏度试验及样品测定，说明细菌内毒素法能够应用于对苦参碱注射液的细菌内毒素测定，并且与家兔法测定的热原结果一致，完全能替代热原法对苦参碱注射液的中间体进行控制。

公司严格把控苦参碱注射液的质量，根据规定，公司SOP内控指标定为：样品按《中国药典》2015年版第三部通则1143[1]细菌内毒素检查法测定，每1 mg苦参碱中间体所含内毒素的量应小于0.5 EU。

2.6 中间体监控

实验列举了6批苦参碱注射液中间体采用细菌内毒素法检测，而后苦参碱注射液成品则进行家兔法检测[4]，结果见表2。两个方法的检测结果完全一致，说明细菌内毒素法完全适用于对中间体的质量监控，而且能保证最终成品的质量。

表1 150727220，150727120批样品细菌内毒素检查结果

表2 生产样品测定结果

3 讨 论

经过实验证明，内毒素检测的方法完全可以替代之前的热源加测，可以归纳到SOP操作流程中，即将内控指标定为：样品按《中国药典》2015年版第三部通则1143[1]细菌内毒素检查法测定，每1 mg苦参碱含内毒素的量应小于0.5 EU。将此检测方法应用于实际生产，则可以满足苦参碱注射液中间体质量控制的要求，并且可以保证苦参碱注射液成品的质量。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].二部.北京:化学工业出版社,2015:1143.

[2] 苦参碱注射液说明书.正大天晴药业集团股份有限公司,批准文号:国药准字:H20030210

[3] 吴 杨,赵云燕.细菌内毒素检查法的应用进展.安徽医药,2004,8(3):226-228.

[4] 陶胜源,狄亚敏,宋金斗.动态浊度法检测苦参碱葡萄糖注射液中细菌内毒素《中国医院药学杂志》,2002,22(10):637-637.

本文编辑：王雨辰

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ISSN.2095-8242.2017.08.1567.02