酶联免疫吸附试验法在类风湿关节炎患者EB病毒VCA抗体中的研究分析

奚敏芬

酶联免疫吸附试验法在类风湿关节炎患者EB病毒VCA抗体中的研究分析

奚敏芬

目的探究酶联免疫吸附试验法在检测类风湿关节炎的EB病毒VCA抗体的研究价值。方法分别用ELISA法与IE法对某单位635例查体人进行血清检测，比较两种检测方法下的RA患者EB病毒VCA-IgA情况。结果ELISA检测阳性率10．6%大于IE阳性率2．8%，对比差异有统计学意义（P＜0．05）结论采用ELISA法检测RA患者血清中的EB病毒VCA-IgA的灵敏度更高，且比IE法更为客观、有效。但由于本实验的局限性，还需在未来进一步深入研究。

酶联免疫吸附试验法；类风湿关节炎；EB病毒；VCA抗体

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的发病机制主要是滑膜内细胞增生，以及感染大量的炎性细胞所造成。在诸多致病因素中，遗传及感染的致病可能性最大。此外，越来越多的国内外研究学者提到EB病毒与RA之间存在某种联系[1]。临床上常采用免疫酶标法（IE）进行标记检测以协助诊断病症，但由于IE法检测的主观性与滴度的控制性难以把握，检测中存在一定的缺陷。而近年来，随着分子医学的发展，采用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）进行检测开始受到了重视与运用[2]。因此，于2016年7—10月分别采用ELISA法与IE法检测RA患者EB病毒VCA抗体，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年7—10月某单位的正常查体人635例为研究对象，其中男性357例，年龄30～78岁，女性278例，年龄32～75岁。所有患者在年龄、性别、病程等基本资料的对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 仪器与试剂

采用THERMO MULTISKAN酶标仪，北京贝尔生物工程有限公司生产的ELISA诊断试剂盒（批号：20160401，有效期6个月）以及德国IBL公司生产的试剂。

1.3 检测方法

用干燥试剂管抽取清晨研究对象空腹时静脉血4 ml，保存在正常室温下使其正常凝固。按照使用说明书采用ELISA法检测EB病毒VCA-IgA。首先将96孔微滴板孔中被纯化的酶融合的EB病毒编码的病毒壳抗原p18以1：100的血清稀释度检测，设置酶标仪光波450～650 nm。ELISA检测结果判定标准以A值Ratio为准：Ratio＜0.8显示为阴性，Ratio在0.8～1.1为阴阳临界值，Ratio＞1.1显示为阳性。检测结果Ratio在0.8～1.1的可在首次抽样后7天再次抽取血清样本并进行检验，并将结果联合第一次进行评估。

采用免疫酶标法（IE）检测EB病毒VCA-IgA，参照潘国忠提到的相关方法[3]，先滴涂B95-8细胞玻片，以3-氨基9-乙基卡巴唑显色，当血清稀释度≥1：10时检测结果为阳性。

1.4 统计学方法

所有数据经双人录入后，采用SPSS17.0统计软件进行分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结果

635例正常查体人经ELISA检测结果显示，ELISA检测阳性人数67例，其中男性阳性42例，女性阳性25例。检测阳性率为10.6%，IE检测阳性人数18例，其中男性阳性6例，女性阳性12例。检测阳性率为2.8%，ELISA检测阳性率略大于IE阳性率，对比差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 IE与ELISAELISA检测结果对比（%）

3 讨论

类风湿关节炎是一种以炎性滑膜炎为主的周围关节组织炎症性的免疫性疾病。孙安民在有关研究中提到在RA患者的血清中发现高浓度的相关抗体[4]。许荣提到RA患者血液及关节液中都有不同程度的感染因子存在[5]。

EB病毒是一种可通过唾液传播的双链DNA病毒，隶属疱疹病毒科。EB病毒的研究与鼻咽癌和恶性淋巴癌联系较多，但随着外部环境等多方面因素的影响，EB病毒在自身免疫性疾病、淋巴细胞增生性疾病的报道越来越多[6]。因EB病毒能以非增殖的状态潜伏在人体B淋巴细胞中。当机体抗体抵抗力下降时，EB病毒开始攻击宿主细胞B淋巴细胞后转化增殖，使被攻击细胞附着有EB病毒的基因组，从而合成与分泌多种抗原。因EB病毒抗原表达的时段不同，可分为3类：（1）EB病毒潜伏期表达的抗原以EBV核抗原与膜蛋白为主；（2）EB病毒增殖前期产生的EA抗原；（3）EB病毒增殖晚期主要以EBV衣壳抗原（VCA）与EBV包膜抗原（MA）为主。

本实验检测的RA患者中的EB病毒VCA抗体IgA是EB病毒增殖的晚期时段产生的代表性抗体。VCA-IgA是BE病毒衣壳抗原抗体，最具检测的代表性[7-8]。本研究分别采用ELISA法与IE法进行检测，结果显示ELISA检测阳性率略大于IE阳性率（P＜0.05），可见采用ELISA法检测的灵敏度更高。ELISA检测方法不仅操作更为简便、自动化，检测结果的精确性也更高。因IE法检测时涂于玻片上的B95-8细胞表达的CVA时期较早，而VCA-IgA是在EB病毒增殖晚期所产生，因此CA-IgA的阳性检测率略低于ELISA法。

综上所述，采用ELISA法检测RA患者血清中的EB病毒VCA-IgA的阳性率比IE更灵敏，能获得更为客观、准确的检测结果。但由于本研究只对EB病毒的VCA抗体进行检测，具有一定的局限性，还需在未来进一步深入研究。

[1]谭斌，肖红云．双抗体夹心酶联免疫吸附试验法在肺结核患者血清HMGB1水平检测中的应用[J]．中国卫生检验杂志，2014，24（15）：2223-2224．

[2]尹志华，叶志中，陈新鹏，等．类风湿关节炎患者CMV、B19和HCV抗体的检测及临床意义[J]．中国免疫学杂志，2011，27（4）：365-367．

[3]潘国忠．EB病毒VCA抗体（IgA）及早期抗原（IgG）抗体的检测其临床意义[J]．中外医学研究，2011，9（30）：52-53．

[4]孙安民，王伟．类风湿关节炎患者EB病毒VCA抗体阳性率分析[J]．中国卫生检验杂志，2014，24（15）：2207-2208．

[5]许荣，周晓薇，陈呢喃，等．类风湿关节炎患者自身抗体及关节损伤因子检出的临床意义[J]．诊断学理论与实践，2014，12（3）：260-266．

[6]周银锁．500例EB病毒EB病毒壳抗原（VCA）IgM抗体与白细胞计数和分类的分析[J]．疾病监测与控制，2017，11（1）：17-18．

[7]庄健海，张劲丰，吴英，等．EB病毒感染与类风湿关节炎的相关性[J]．广东医学，2010，31（10）：1277-1278．

[8]叶倩，李筱莉，陈岩松，等．联合检测EB病毒不同抗体及EB病毒DNA在鼻咽癌血清学诊断中的价值[J]．现代肿瘤医学，2016，24（19）：3045-3048．

Research and Analysis for Effects of Linked Immunosorbent Assay on VCA Antibody of EB Virus of Patients with on Rheumatoid Arthritis

XI Minfen
Clinical Laboratory, Suzhou Industrial Park Centers for Disease Control and Prevention, Suzhou Jiangsu 215024, China

ObjectiveTo study research value of linked immunosorbent assay in detecting EB virus VCA antibody of rheumatoid arthritis.Methods635 cases of people in one institution under physical examination were provided with sera diagnosis via ELISA method and IE method. Patients with RA receiving two detection methods were compared for VCA-IgA of EB virus.ResultsThe positive rate of ELISA 10.6% was higher than that of IE with 2.8%, and the difference had statistical signi fi cance (P＜0.05).ConclusionIn detecting VCA-IgA of EB virus in serum of patients with RA, ELISA method is more sensitive and more objective and effective. Due to the limitation of this study, further study is required in the future.

linked immunosorbent assay; rheumatoid arthritis; EB virus; VCA antibody

R446

A

1674-9308（2017）08-0069-02

10．3969/j．issn．1674-9308．2017．08．036

苏州工业园区疾病防治中心检验科，江苏 苏州 215024